安普霉素及其联合用药对金黄色葡萄球菌体外PAE的研究

王 新，崔一喆，黄宝明

（黑龙江省八一农垦大学动物科技学院，黑龙江 大庆 163319）

抗生素后效应（PAE）是指细菌与抗生素短暂接触，当药物清除或药物浓度低于最小抑菌浓度时细菌生长仍受到持续抑制的效应。在兽医领域中，对抗菌药物PAE的研究较少，尤其是安普霉素对金黄色葡萄球菌PAE的研究少见报道。因此，开展此项研究可以为兽医临床上更加合理地应用安普霉素、有效控制疾病提供参考。

1 试验材料

1.1 试验药品 安普霉素标准品（K0230811），购于中国兽医药品监察所；阿莫西林标准品（130409）与氨苄西林标准品（130410），均购于中国药品生物制品检定所。

1.2 试验菌株 金黄色葡萄球菌（ATCC25923），购于中国药品生物制品检定所。

2 试验方法

2.1 菌种的活化与计数 取冻干标准菌株，接种于营养肉汤中，37℃孵育18h后，进行平板划线，观察菌落形态。挑取2～4个单菌落接种于2mL营养肉汤中，37℃培养过夜。用营养琼脂平板进行菌落计数后，将菌液稀释至浊度为1×108CFU·mL-1，4℃冰箱中保存备用。

2.2 药物溶液的制备 精确称取各种药物，用无菌蒸馏水配制成浓度为1280μg·mL-1的药液100mL，均为使用前配制。

2.3 药物体外抗菌活性测定 采用试管二倍稀释法和平板菌落计数法，分别测定安普霉素、阿莫西林和氨苄西林对浊度为1×105CFU·mL-1金黄色葡萄球菌的最小抑制浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC），试验重复3次。

2.4 体外PAE的测定

2.4.1 药物单独应用PAE的诱导 用已灭菌的营养肉汤分别将受试药物配成浓度为20×MIC、40×MIC和80×MIC的药液。取各浓度的药液0.5mL分别加入含4.0mL营养肉汤的试管中，每管再加入0.5mL浊度为1×108CFU·mL-1的菌液，使混合药物最终浓度分别为2×MIC、4×MIC 和 8×MIC，此为试验管（T）；同时设 C1、C2两只对照管，均由4.5mL营养肉汤与0.5mL菌液混合，其中C2作为抗菌药持续作用的对照，各管旋涡混匀后，放入37℃恒温箱内培养1h。

2.4.2 药物联合应用PAE的诱导 药物联用时按简易棋盘法混合，将同浓度的安普霉素0.5mL与阿莫西林或氨苄西林0.5mL加入含3.5mL营养肉汤的试管中，再加入0.5mL浊度为108CFU·mL-1的菌液，其他程序同2.4.1。

2.4.3 药物的去除及重建 采用800倍稀释除药法。药物诱导1 h后，取T、C1和C2管中菌液0.1mL，分别加入含1.9mL 37℃预温的营养肉汤试管中，充分混匀后再吸取0.1mL菌液，分别加入另外含3.9mL 37℃预温的营养肉汤试管中重建，并在C2管的重建管中加入一定量药物，使其中药物浓度相当于8MIC试验管中被800倍稀释后的抗菌药物浓度，以此作为残留药物造成PAE的对照。以上各重建管立即置37℃恒温箱中孵育，此时为重建后的零时。

2.4.4 细菌生长动力学曲线建立 重建后0、1、2、3、4、6、8h分别取菌液0.1mL作系列稀释，于琼脂平板上进行菌落计数，得出CFU·mL-1值。试验重复3次，取平均值绘制细菌重建后恢复生长的曲线，以CFU·mL-1对数值为纵坐标，以孵育时间（h）为横坐标作图。

2.4.5 体外PAE的计算 按公式PAE=T-C计算。其中T、C分别为试验管与对照管细菌CFU·mL-1值高于重建后零时10倍所需要的时间（h）。

2.4.6 药物联用PAE的判断标准 药物联用的PAE与两种药物单用的PAE比较，长于药物单用之和1h以上为协同作用，与药物单用之和接近为相加作用，与药物单用最大值相近为无关作用，小于药物单用最小值为拮抗作用。

3 试验结果

3.1 药物的体外抗菌活性 安普霉素对金黄色葡萄球菌的MIC 和 MBC 分别为 0.63μg·mL-1和 1.25μg·mL-1，阿莫西林对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为0.16μg·mL-1和 0.31μg·mL-1，氨苄西林对金黄色葡萄球菌的 MIC 和 MBC 分别为 0.63μg·mL-1和 1.25μg·mL-1。

3.2 安普霉素及其与阿莫西林或氨苄西林联用的体外PAE 试验结果见表1、图1、图2和图3。由表1可知，安普霉素、阿莫西林及氨苄西林对金黄色葡萄球菌均具有较长的体外PAE，且随药物浓度的升高其体外PAE也相应地延长。安普霉素与阿莫西林或氨苄西林联用后对金黄色葡萄球菌的体外PAE呈相加或协同作用。由图1、图2、图3可见，PAE测定过程中所设的细菌对照管与残留药物对照管的细菌生长基本一致，说明各试验管中细菌生长所受到的抑制是PAE造成的，而不是残留药物的作用，同时说明800倍稀释基本上可以去除药物。此外，随着浓度的增高，药物对细菌生长繁殖的抑制作用越强，在药物去除后，细菌恢复正常生长所需的时间也越长。

表1 药物单用及联用对金黄色葡萄球菌的体外PAE h

图1 安普霉素PAE期金黄色葡萄球菌的生长曲线

图2 安普霉素与阿莫西林联用PAE期金黄色葡萄球菌的生长曲线

图3 安普霉素与氨苄西林联用PAE期金黄色葡萄球菌的生长曲线

4 讨论与小结

本试验采用稀释法去除抗生素，用菌落计数测定细菌生长曲线的方法，进行了安普霉素及其与阿莫西林或氨苄西林联用对金黄色葡萄球菌体外PAE的研究。结果证实了安普霉素对金黄色葡萄球菌具有较强的抗菌活性和较长的体外PAE，且呈现出高度的浓度依赖性；安普霉素与阿莫西林或氨苄西林联用对金黄色葡萄球菌的体外PAE也表现为相加或协同作用。因此，临床应用安普霉素治疗金黄色葡萄球菌引起的感染时，建议采用大剂量间断给药或与β-内酰胺类药物联用的给药方案，所获得的治疗效果会更好。

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