对C57BL/6小鼠超排效果的研究

关文怡，曹授俊，齐军喆

（北京农业职业学院畜牧兽医系，北京 102442）

用激素处理动物进行超数排卵是进行胚胎移植、转基因、克隆等研究的基础之一，通过超数排卵获得大量整齐、优质的卵子或受精卵是胚胎移植的关键技术之一。近年来，随着遗传工程小鼠的大量开发，人们对小鼠卵母细胞和受精卵的需求量日趋增多，因而完善的超数排卵技术是遗传工程小鼠研究获得成功的重要前提条件。本实验在雌鼠的年龄与体重、激素的注射时间等因素不变的条件下，以C57BL/6小鼠为实验对象，对其注射不同剂量的PMSG和HCG进行超数排卵，并分析所获得的卵母细胞的数量和质量。

1 材料和方法

1.1 实验动物 5～6周龄C57BL/6雌性小鼠30只，8周龄C57BL/6雄性小鼠，中国医学科学院实验动物研究所提供。

1.2 实验器械 实体显微镜Nikon SM2645，日本Nikon公司生产；手术器械：剪毛剪、手术剪、镊子等；口吸式移卵管。

1.3 实验试剂 实验超数排卵激素（PMSG，HCG）均购自宁波市激素制品有限公司；其余试剂除特殊说明外均为Sigma公司产品。

1.4 实验方法 选用5～6周龄的C57BL/6雌鼠36只（中国医学科学院实验动物研究所提供），自由采食和饮水，室温 20±2℃，控光（光照 14h/d，6∶00～20∶00）。经过一周的适应性饲养后，按照注射剂量不同随机分为A、B、C三组，A组8只，B组13只，C组15只。A组注射 PMSG 2.5 IU，HCG 2.5 IU；B 组注射 PMSG 5.0 IU，HCG 5.0 IU；C组注射PMSG 7.5 IU，HCG 7.5 IU。每只小鼠腹腔注射PMSG，间隔48h后分别注射HCG进行超数排卵，再与性成熟同系公鼠合笼，次日早上检查阴道栓，有栓雌鼠就用颈椎脱臼法处死，然后将输卵管摘除置于盛有M2培养液的表面皿中，在实体显微镜下找到输卵管膨大部，用1mL注射器冲洗输卵管，再用移卵管收集卵母细胞。超数排卵处理后，对不同处理组的雌鼠进行卵母细胞计数，以确定不同剂量的激素注射对C57BL/6小鼠超数排卵的影响。

1.5 统计分析 利用SPSS软件对C57BL/6小鼠不同剂量组的平均取卵数采用单因素方差分析进行检验。

2 结果

本实验分为A、B、C三个剂量组，各组获得的卵子数量如表1所示。C57BL/6小鼠B组的平均取卵数极显著地高于A组的平均取卵数；B组的平均取卵数显著地高于C组的平均取卵数；C组与A组的平均取卵数差异不显著。

表1 C57BL/6小鼠超数排卵实验结果

3 分析与讨论

在哺乳动物发情周期中给予大剂量外源性FSH或类似物，可诱发大量卵母细胞发育，排卵数可超过正常排卵数的若干倍。在小鼠的超排实验中，一般用孕马血清促性腺激素（PMSG）模仿内源性促卵泡素（FSH）的促进卵成熟作用，人绒毛膜促性腺激素（HCG）模仿促黄体素（LH）的诱导作用。超数排卵的成功与否取决于以下几种因素：雌鼠的年龄与体重、激素的剂量、注射时间以及小鼠的品系。

关于小鼠超数排卵的最适合激素剂量，目前国外多采用PMSG与HCG各5 IU或各7.5 IU剂量，国内有的采用PMSG与HCG各5 IU或各10 IU剂量，也有用PMSG与LH协同处理超排小鼠的报道。由此可知，就激素剂量方面的研究结果也是有一定差异的，这可能与超数排卵受到多种因素的影响有关。对于大多数品系小鼠，推荐的PMSG剂量是腹腔注射5 IU，但对有些品系小鼠PMSG剂量仅2.5 IU或多达10 IU其效果可能更好。李子义等在“不同激素剂量对幼鼠超数排卵及超排卵质量的影响”中报道，以PMSG与HCG各10 IU剂量对5～6周龄小鼠进行超排，结果排卵数分别是42.2枚和40.2枚。

另一种促性腺激素是HCG，用来诱发成熟卵泡破裂，HCG的注射剂量一般为5 IU，但对某些品系小鼠来说，适合的剂量可能在2.5 IU～10 IU之间。本实验选用5～6周龄的C57BL/6雌鼠，采用3种不同剂量组合在自由采食和饮水，室温20±2℃，控光（光照14h/d，6∶00～20∶00）的条件下进行超数排卵，结果表明采用PMSG 7.5 IU、HCG 7.5 IU剂量的这组其排卵数显著高于其他组，为较好的超数排卵方案。

小鼠超数排卵效果除与激素剂量不同有关外，还可能与实验小鼠个体的日龄、发情周期、体重及营养状况有关。

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