酵母培养物对草鱼（Ctenopharyngodon idellus）生长性能与肠道粘膜形态的影响

邱 燕 叶元土 蔡春芳 代小芳 尹晓静 张 俊 谭芳芳

酵母培养物（yeast culture，简称YC）通常指用固体或液体培养基经酵母菌发酵的培养物和酵母菌的混合物，含有维生素、矿物质、消化酶、促生长因子、有机酸、寡糖、增味物质和较丰富的氨基酸等，营养十分丰富，是集营养和保健为一体的饲料添加剂[1-2]，是生物技术和微生态技术在饲料添加剂中的研究成果之一，具有无残留、无污染和无毒等优点，逐渐成为目前研究的热点。本试验通过在草鱼基础饲料中添加不同浓度的酵母培养物，旨在探讨酵母培养物对草鱼生长性能的影响，为其在草鱼饲料中的应用提供依据。

1 试验材料和方法

1.1 试验材料

酵母培养物由达农威生物发酵工程技术（深圳）有限公司提供，有效成分是酵母细胞外代谢产物。草鱼，由无锡宜兴养殖厂提供。

1.2 试验设计及日粮组成

试验选取初均重（69.51±6.29）g的草鱼144尾，随机分为3组，以基础饲料作为对照组；在基础饲料中分别添加1000、2000 mg/kg的酵母培养物作为2个试验组，共3个组。每组3个重复，每个重复16尾鱼，基础饲料配方及营养水平见表1。饲料原料经微粉碎后过40目筛，混合均匀后用小型颗粒饲料机加工成直径1.5 mm的颗粒饲料备用，饲料加工过程中温度65～70℃，持续时间约1 min。

表1 基础日粮组成及营养水平(干物质基础)（%）

1.3 饲养管理

在50亩的池塘中设置网箱进行养殖试验，网箱规格为1 m×1 m×1.5 m，本试验共15个网箱。试验鱼经过2周的养殖驯化后再进行分组。饲料投喂每天3次，投喂量为体重的2%～3%。试验时间为2008年8月至10月，饲养期间水质条件为：水温（28.0±3.0）℃、DO＞8.0 mg/l、pH 值＜8.3、亚硝酸盐＜0.01 mg/l、硫化物＜0.05 mg/l。正式养殖试验70 d。

1.4 样品采集和分析

饲养试验结束后，禁食24 h后测定每箱鱼的总体重和尾数，计算成活率、饲料系数、特定生长率。解剖试验鱼，取出内脏团，分离出肠道，剔除表面脂肪组织，分别取中肠1 cm左右大小的组织1～2块，纵向剖开，使肠粘膜暴露于空气中，用生理盐水冲洗3～4次，除去其上所带有的血液、粪便等杂质，制得肠道样品。扫描电镜肠道样品置于4%戊二醛固定液中，超声波洗涤10 min，更换固定液再次洗涤，更换固定液保存。制样时将其取出，洗涤，适当修剪，1%锇酸固定1 h，0.1 M pH值7.2磷酸缓冲液洗3次，叔丁醇系列梯度脱水，真空干燥，喷金，S-4700型冷场发射扫描电镜观察、拍照。

组织切片肠道样品置于4%中性甲醛中固定、70%乙醇保存。分别经浓度为70%、80%、90%、95%以及100%的酒精梯度脱水，并置于二甲苯中透明，最后包埋于低熔点石蜡中。使用KD-2508型切片机横向连续切片，厚度为8 μm，而后展片于清洁的载玻片上。采用H.E染色，中性树胶封片。显微测量肠道皱襞高度、宽度，粘膜层、肌层、浆膜层厚度，光学显微镜下观察并采用Nikon COOLPIX4500型相机进行拍照。

1.5 计算公式

成活率（SR，%）=（试验末鱼尾数/试验初鱼尾数）×100；

特定生长率（SGR，%/d）=（ln末均重-ln初均重）/饲养天数×100；

饲料系数（FCR）=每箱投喂饲料总量/每箱鱼体总增重量。

1.6 数据处理

试验数据用“平均数±标准差”表示,结果采用Excel和SPSS14.0版统计软件中One-Way Anova过程进行方差分析,并进行Duncan's法多重比较,显著水平为0.05。

2 结果

2.1 酵母培养物对草鱼生长性能的影响

经过70 d的池塘网箱养殖试验，各组试验草鱼的特定生长率和饲料系数结果见表2。各试验组成活率均为100%，对照组为98%。在特定生长率方面：与对照组相比，各试验组的特定生长率增加，分别增加了28.72%、4.26%。其中，酵母培养物为1000 mg/kg组显著高于对照组（P＜0.05）。在饲料系数方面：与对照组相比，各试验组饲料系数分别下降了33.76%、10.55%，其中1000 mg/kg组饲料系数显著低于对照组（P＜0.05）。

表2 酵母培养物对各试验组草鱼成活率、特定生长率和饲料系数的影响

2.2 酵母培养物对草鱼肠道粘膜形态的影响

2.2.1 肠道皱襞观察及测量

各组草鱼肠道皱襞测量结果见表3，各试验组皱襞高度均显著高于对照组（P＜0.05），粘膜层厚度与皱襞高度表现一致（P＜0.05）。各试验组皱襞宽度、肌层厚度、浆膜层厚度均与对照组差异不显著（P＞0.05）。

表3 酵母培养物对各组肠道皱襞的影响（μm）

2.2.2 肠道微绒毛观察及测量

肠道微绒毛观察结果见表4，各试验组微绒毛高度均高于对照组，其中1000 mg/kg组显著高于对照组（P＜0.05）。各试验组微绒毛宽度均高于对照组，但差异不显著（P＞0.05），微绒毛密度均高于对照组，其中2000 mg/kg组显著高于对照组（P＜0.05）。

表4 酵母培养物对各试验组肠道微绒毛的影响

3 讨论

本试验中，各试验组特定生长率比对照组分别增加了28.72%、4.26%，饲料系数与对照组相比，下降了10%以上，其中1000 mg/kg组下降了33.76%。此结果表明，酵母培养物在一定范围内可有效促进草鱼的生长，降低饲料系数，且酵母培养物1000 mg/kg组生长效果最好。此结果可能由于酵母培养物中甘露寡糖成分促进了肠道中双歧杆菌、乳酸杆菌等有益菌的生长，阻止了致病菌的入侵，维持了肠道菌群的平衡，并且改善了肠道粘膜形态；营养物质成分为草鱼生长提供了营养物质，参与机体代谢，还有各种未知生长因子共同作用，从而促进草鱼的生长。这与刘哲等研究酵母培养物（YC）添加量为5%时，明显促进了建鲤生长的结果；吴新民等在对虾饲料中添加活性酵母可提高饲料利用率的结果一致[3-4]。

YC对粘膜的保护作用可能部分与酵母细胞壁有关。而酵母细胞壁甘露寡糖不经消化直接到达后肠促进双歧杆菌和乳酸杆菌增殖，并且与病原菌在肠壁上的受体非常相似，可吸附病原菌，减少了绒毛与抗原的结合机会，改善肠道微生物区系，进而影响肠道形态。Zhang等证实，酵母细胞壁改善了肉仔鸡的肠粘膜形态[5]。有报道YC对家禽粘膜形态也有影响，家禽日粮中添加酵母细胞或酵母细胞壁，能提高绒毛高度和绒毛高度与隐窝深度比[6]。本试验结果显示，各试验组皱襞高度均显著高于对照组，各试验组肌层厚度均高于对照组，消化管壁肌肉的厚度决定食糜的机械消化速率。这与刘观忠报道的YC增加了肠壁厚度的结果一致[7]。各试验组微绒毛高度均高于对照组，其中1000 mg/kg组显著高于对照组。各试验组微绒毛宽度、密度均高于对照组。此结果表明，基础饲料中添加1000 mg/kg酵母培养物能够促进草鱼肠道皱襞、微绒毛发育、生长，从而使肠粘膜形态得到改善，且与提高其平均日增重和降低饲料系数的试验结果相一致。可能是因为YC到达消化道内能分泌并活化大量蛋白酶，促进饲料蛋白的降解；也可能是酵母细胞壁某些成分促进了消化道的发育，改善了肠道内环境。刘观忠等研究发现酵母培养物具有改善雏鸡肠壁结构的效果。李顺等发现，活性酵母可替代抗生素，有促进仔猪生长和降低腹泻的作用，并可改善小肠上皮组织结构[7-8]。胡友军等研究发现，添加活性酵母显著提高了仔猪肠道绒毛高度，一定程度上克服了断奶应激对肠道造成的损伤[9]，这些与本试验研究结果相似。关于酵母对肠道的保护作用的机制尚需进一步研究。

有报道随着活酵母饲料添加水平的升高，肉仔鸡生长速度和饲料利用率有随之减少的趋势，当YC添加水平达到0.9%时反而对肉鸡生长有抑制作用，刘观忠也有类似报道[7,10-11]。本文研究的添加2000 mg/kg酵母培养物，特定生长率有下降的趋势且饲料系数有所增加，因此，高浓度添加酵母培养物并不能使草鱼的生产性能进一步改善，与他们的报道一致。可能由于过高剂量YC引起的免疫反应过度，使用于生长的能量或营养素减少，具体原因有待进一步证明。

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[2]冯兴军,单安山.酵母培养物及其在养殖业中的应用 [J].饲料博览,2003（8）:14-16.

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[4]吴新民,杨金晓.酵母菌在对虾饵料中的应用 [J].饲料研究,1998(10):4-5.

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[8]李顺,王继成.活性酵母对断奶仔猪生产性能及小肠上皮组织结构的影响[J].湖南饲料,2007(02):28-30.

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