牛奶中抗生素残留的调查及检测分析

刘秀萍,唐雨顺,寇 叙,刘永华,唐 峰

(辽宁医学院畜牧兽医学院,辽宁锦州121001)

人们随着生活水平的提高,对牛奶质量的要求越来越高。牛奶被称为“白色血液”,是理想的天然食品,其中的乳蛋白含有人体几乎所有的必需氨基酸具有较高的营养价值[1]。但是近年来,国内外不断曝光食品安全问题,使牛奶质量问题成为人们关注的焦点。在奶牛饲养过程中,用于预防和治疗作用的抗生素药物也严重的影响着牛奶的卫生质量,同时在牛奶加工过程中为了延长牛奶的保存时间也可能人为添加抗生素。当人类经常食用含有抗生素残留物的乳品,等于长期低剂量吸收相应的抗生素,这样就会致使病菌的耐药性上升,亦可导致体内正常菌群失去平衡[2]。本文对锦州市市售牛奶中抗生素残留情况做了调查,调查包括导致市售牛奶中抗生素残留的主要疾病因素和用药率情况。同时,还对锦州市各大、小超市的袋装奶190份和锦州市郊的散养奶牛的新鲜牛奶70份进行抗生素残留检测,以了解市售牛奶中抗生素残留的状况。

1 资料与方法

1.1 资料的来源 2009年1～3月期间,对辽宁医学院畜牧农场、北山种畜场、锦州开发区牧场、铁路养殖场、市郊(唐庄子、宋家沟、流水等)牧场的奶牛数量、常见病、发病数、发病率、用药等情况进行详细调查。并对锦州市郊奶源户的生鲜牛奶及各大、小型超市市售成型包装纯牛奶随机抽样做抗生素残留的实验室检测。

1.2 检测方法 根据实验室的现有仪器设备情况我们采用了两种方法即GB-TTC和CM T-快速检测试剂盒的方法。

1.2.1 GB-TTC方法[3]菌种:嗜热乳酸链球菌(由上海天呈科技有限公司提供);试剂:2,3,5-氯化三苯四氮唑(由上海如吉生物技术有限公司提供);牛奶:锦州市各超市;锦州市周边的养殖户;注射用青霉素G钾:160IU,由武汉远程科技发展有限公司提供;注射用硫酸庆大霉素:2 mL,8万单位,由山东益康药业有限公司提供。

1.2.1.1 试验前准备 从锦州各大、小超市分别购买不同批次、不同厂家的袋奶;从锦州市郊采集刚挤出的鲜奶。取健康无病牛刚挤出的鲜牛奶,于2 000 r/min离心15 min,移去上层脂肪。将试管、吸管、脱脂乳等置于113℃灭菌20 min;将菌种移种脱脂乳,经(36±1)℃培养 15 h后,以灭菌脱脂乳1∶1稀释待用。

1.2.1.2 TTC试剂制备 称取1 g TTC溶于5 mL灭菌蒸馏水中,装入褐色瓶内,置于7℃冰箱保存。临用时再用灭菌蒸馏水稀释至5倍。如遇溶液变为褐色或浅褐色,则不能再用。

1.2.1.3 样品检测 取检样9 mL,置于16 mm×160 mm试管内,80℃水浴加热5 min后冷却至37℃以下,加菌液1 mL,(36±1)℃水浴培养2 h,加 TTC 0.3 mL,(36±1)℃水浴培养30 min,观察如为阳性,再于水浴中培养30 min作第2次观察。每份检样作两份,另外再作阴性和阳性对照各1份。阳性对照管用无抗生素的乳8 mL加抗生素及菌液和TTC,阴性对照管用无抗生素乳9 mL加菌液和TTC。

1.2.1.4 判定标准 乳中有抗生素存在,则检样中虽加入菌液培养物,但因细菌的繁殖受到抑制,因此指示剂TTC不还原,不显色。相反,如果没有抗生素存在,则加入菌液即行繁殖,TTC被还原而显红色。即检样呈乳汁原色时为阳性,显红色时为阴性。显色状态判断标准:未显色者为阳性;微红色者为可疑;桃红色或红色为阴性。

1.2.2 CMT方法[4]

1.2.2.1 材料 干燥培养箱、CMT试剂盒、移液枪等。

1.2.2.2 操作方法 (1)每块微孔板共有96个检测孔,可被分成6小块(每块含16个检测孔)。小心掰开所需数量的检测孔(用剪刀剪开封口铝箔薄膜)。注意不要损坏剩余检测孔上的封口铝箔薄膜(封口铝箔薄膜的损坏会导致孔内培养基的脱水)。(2)撕开待用检测板上的封口铝箔薄膜。(3)用加样器向每个检测孔加入100 μ L待检样本。使用一次性的枪头,避免相邻检测孔之间由于样品泼涧、溢出所导致的交叉污染。(4)使用试剂盒提供的封口膜将检测孔口封住。(5)将检测板/小块放置在预热的(64±0.5)℃水浴锅(或其他的温浴装置)中温浴3 h。尽量保证温浴温度的恒定,温度的波动会导致温浴时间的延长。

1.2.2.3 判定标准 在(64±0.5)℃条件下温浴3 h后,从检测孔底端和侧面判读颜色变化。可根据试剂盒提供的颜色对照卡来判断检测结果。(1)阴性:黄色表明该样品没有抗生素残留或抗生素残留的含量低于试剂盒的检测限。(2)阳性:紫色表明该样品中含有抗生素残留,且浓度高于试剂盒的检测限。(3)部分阳性:如果颜色介于黄色和紫色之间,则表明该样品可能不含有抗生素残留或抗生素残留的含量低于试剂盒的检测限。参照颜色对照卡来判断结果。

2 结果

2.1 调查结果

2.1.1 导致抗生素残留的主要疾病因素 对锦州奶源户的奶牛的常发病及其发病率做了详细的调查,结果显示,牛的产后疾病主要有:胎衣不下,乳房炎,子宫内膜炎,产后瘫痪等。具体内容见表1。

表1 锦州地区奶牛常见疾病调查

2.1.2 用药情况调查 锦州地区奶牛产后疾病发生后,当地兽医工作者常用抗生素的主要成分及给药途径调查显示:头孢噻呋钠:静脉注射;青霉素:静脉注射或肌肉注射,清洗,灌注;链霉素:静脉注射或肌肉注射,清洗,灌注;克林霉素:肌肉注射;硫酸庆大霉素:肌肉注射;硫酸小诺霉素:肌肉注射。

2.2 检测结果 2009年4～6月份历经3个月的时间,共随机抽检市售成型包装纯牛奶190份及锦州奶源户生鲜牛奶70份,共260份。分别用国标(TTC)法和CMT法进行检测并对两种方法加以比较。TTC法检测结果为奶源户生鲜牛奶阳性率17.14%,市售成型包装纯牛奶阳性率15.71%。CMT法检测结果为奶源户生鲜牛奶阳性率20.00%,市售成型包装纯牛奶阳性率21.14%。见表2。

表2 两种方法检测牛奶中抗生素残留结果

3 讨论

3.1 牛奶中抗生素残留的原因 引起牛奶中抗生素残留的因素有奶牛疾病治疗、饲料添加、牛奶防腐等,因此建议养殖户加强饲养管理,减少奶牛产后疾病的发生,降低产后疾病的发病率,同时要严格遵守休药期规定,不要为了一时的利益,损害人民的身体健康。3.2 国标TTC方法和CMT试剂盒的比较分析

T TC方法的培养温度是(36±1)℃,菌种为嗜热乳酸链球菌,该法简便、快速,无需特殊设备,3～4 h可见报告,很适合牧场、乳品厂及食品卫生检测部门采用;CMT方法的培养基温度是(64±1)℃,菌种嗜热脂肪芽孢杆菌,操作简单,要求取量精确,但费用较昂贵。

3.3 试验过程中应注意的问题 菌种和试剂的保存要符合条件,否则会影响试验结果,严重的导致没有结果。尤其是CM T试剂盒的操作,应该小心,防止交叉污染。试验结果的读取要及时,这样结果准确。3.4 牛奶中抗生素残留是涉及人类健康的公共卫生问题 应加强生产者的主体意识和管理者的执法教育,并努力研究发展一些简单、快速和便携化的筛选多残留的分析技术,以提高分析效率、降低成本,保证消费者的健康。

[1]GB/T 4789.27-1993.食品卫生微生物学检验:鲜乳中抗生素残留量检验[S].

[2]曾伟.奶牛乳房炎综合防治[J].四川畜牧兽医,2009,36(2):47-49.

[3]侯亚莉,朱奎,丁双阳.牛奶中抗生素残留检测技术[J].中国乳业,2008,6:56-59.

[4]吴杰.牛奶中抗生素残留检测方法的研究[J].现代预防医学,2005,12(32):1767-1768.

[5]沈永聪,李守军,杨林.牛奶中抗生素残留检测技术进展[J].食品科学,2006,5:87-89.

[6]吴国娟,沈江,张中文,等.市售消毒纯牛奶中抗菌药物残留的检测[J].北京农学院学报,2002,117(2):335-337.

[7]余奇飞,陈翠莲,孙莉娜,等.牛奶中抗生素残留检测方法的研究进展[J].农产品加工学报,2005,11(11):72-75.

[8]章银良,伍季,鲍彤华.牛奶中抗生素残留检测方法的研究现状[J].郑州轻工业学院学报,2006,11(21):21-25.