制备环境对N-乙酰半胱氨酸木糖醇注射液有关物质的影响

方红英，王福根，庄让笑，席建军，邵益丹，缪斌，吴锡铭

（浙江中医药大学附属第六医院，浙江 杭州 310014）

N-乙酰半胱氨酸木糖醇注射液（NACX）是我院研制的用于治疗慢性重症肝炎的制剂[1]。由于N-乙酰半胱氨酸（NAC）在水溶液中很不稳定，其分子中的巯基易发生自动氧化，产品在制备过程中可产生的杂质有 L-半胱氨酸（CSH）、L-胱氨酸（CSSC）、N，N-二乙酰胱氨酸（ASSA）等，其中 N，N-二乙酰胱氨酸能明显影响产品的质量。第5版欧洲药典（EP）、2003年版英国药典（BP）对这些有关物质的含量有着严格的限制。为进一步严格控制NACX中的杂质，提高制剂质量，笔者参照BP的测试方法，对在不同制备环境中产生的上述有关物质含量进行比较试验，报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱仪。NACX（自制）；N-乙酰半胱氨酸、L-半胱氨酸、L-胱氨酸对照品，购自中国药品生物制品检定所；N，N-二乙酰胱氨酸（自制）；庚烷磺酸钠为高效液相色谱专用试剂，磷酸、磷酸二氢钠为分析纯。

2 方法与结果

2.1 含量测定

2.1.1 色谱条件

色谱柱：Agilent ODS柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相:0.01 mol/L磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠1.38 g，庚烷磺酸钠3.2 g，加水700 mL溶解后，用磷酸调pH 2.15，加水至1 000 mL）-甲醇（95 ∶5）；流速：1 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：210 nm；进样量：20 μL。

2.1.2 溶液制备

取NACX适量，加流动相制成质量浓度为4 mg/mL的溶液，作为供试品溶液。分别称取N-乙酰半胱氨酸、L-半胱氨酸、L-胱氨酸、N，N-二乙酰胱氨酸对照品适量，精密称定，加流动相制成每1 mL中含上述成分各1 mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。

2.1.3 方法学考察

系统适用性试验：取对照品溶液，依法进样记录色谱图（图1）。结果表明，在该色谱条件[2]下，N-乙酰半胱氨酸与3种杂质均能达到基线分离，L-胱氨酸、L-半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、N，N-二乙酰胱氨酸的色谱峰保留时间约为1.5，2.0，3.5，6.4 min。

线性关系考察：精密称取N-乙酰半胱氨酸和3种杂质对照品适量，加流动相配制成相当于有关物质检查用对照品溶液的80%，90%，100%，110%，120%浓度的5种溶液，分别进样20 μL，以质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，线性回归方程见表1。

精密度试验：取线性关系考察项下的对照品溶液，重复进样6次。结果的 RSD范围在0.1% ～0.9%，表明仪器精密度良好。

图1 各杂质典型的色谱分离图

表1 线性关系考察结果

加样回收试验：取已知含量的样品适量，分别加入不同量的N-乙酰半胱氨酸对照品，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定含量，计算加样回收率。结果见表2。

表2 N-乙酰半胱氨酸加样回收试验结果（n=6）

2.2 稳定性影响因素考察

2.2.1 pH

取NAC和木糖醇，用注射用水制成含量为99.6%的注射液，以 NaOH 或 HCI调 pH 分别为 2.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0，灌封于250 mL输液瓶中，于115℃加热30 min后，分别进行液相色谱分析。结果见表3。可见，7种不同pH的溶液加热前后pH、澄明度无明显变化，而NAC含量有不同程度的改变。NAC的氧化、水解产物在酸性溶液中为CSH和CSSC，在碱性溶液中以ASSA为主，但在pH为6.0～7.0范围内溶液较稳定，分解产物也相对减少。综合上述结果和结合临床要求，NACX溶液pH以6.5～7.5为妥。

表3 不同pH溶液加热后各杂质含量变化

2.2.2 氧

取样品，按2.2.1项下方法制成pH约为6.5的溶液，在配制溶液及容器空间分成通氮和不通氮两组。通氮组所用注射用水预先煮沸，通入氮气，冷至60℃；不通氮组按一般方法配制。两组样品分别经日光照射3 d和115℃加热30 min，并依法测定pH及各杂质含量，结果见表4。

表4 通氮气对光照和高温灭菌条件下NAC溶液中各杂质含量的影响

2.2.3 光照

取样品，按2.2.2项下通氮组方法配制溶液，调pH约为6.5，置光照度为4 000 lx的光照箱内，间隔一定时间取样分析。结果见表5。

表5 光照对通氮NAC溶液各杂质的影响

2.2.4 加热

取样品，按2.2.2项下通氮组方法配制溶液，调pH约为6.5，置 90 ℃进行恒温加速试验，间隔 0，24，48，72，96，120，144 h 取样分析。结果见表6。

表6 通氮NAC溶液在恒温（90℃）条件下不同时间各杂质含量变化

2.3 室温留样考察试验

取样品，在室温条件下放置，并定期进行对比分析。结果见表7。

表7 通氮NAC溶液室温留样考察的杂质含量变化

3 讨论

N-乙酰半胱氨酸分子结构中含有巯基，在水溶液中易发生自动氧化，溶液中的溶氧和容器空间氧及溶液的pH对产品质量影响较大，温度、光照等对产品的稳定性也有一定影响。由于N-乙酰半胱氨酸的氧化还原电位很小，一般抗氧剂不仅不能发挥抗氧作用，反而会促进其氧化，若遇高温则氧化更迅速，故配制时必须严格控制温度。

稳定性试验表明，本品在合适的工艺条件范围内能克服上述多项不稳定因素，故产品质量容易控制，能符合注射剂的质量要求。另外，采用高效液相色谱法能有效控制杂质，客观反映产品质量。

[1]吴 刚，郭树华.N-乙酰半胱氨酸在肝病治疗中应用[J].中华肝脏病杂志，2004，12（3）：185-186.

[2]韩晓捷，黄哲苏，李海生.反相离子对色谱法测定乙酰半胱氨酸注射液含量及有关物质的方法研究[J].天津药学，2005，17（6）：7-9.