猕猴病毒性肝炎血清学调查*

杨丽芬,李绍东,周亚敏,唐品超,吴志蕾,王 琼

(中国实验动物云南灵长类中心,云南昆明 650216)

猕猴病毒性肝炎血清学调查*

杨丽芬,李绍东,周亚敏,唐品超,吴志蕾,王 琼

(中国实验动物云南灵长类中心,云南昆明 650216)

了解相同饲养条件下恒河猴、食蟹猴中的病毒性肝炎抗体阳性率,为控制病毒性肝炎的传播,提高饲养管理水平与实验动物质量提供依据。用ELISA法,对525份来自两个猴群的血清样本进行了病毒性肝炎(HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、HGV、TTV)抗体(IgG、IgM)检测。猴群中病毒性肝炎(HBV、HCV 、HDV 、HEV 、HGV 、T TV)抗体(IgG)均为阴性,恒河猴甲型病毒性肝炎(HAV)抗体IgG、IgM 阳性率分别为81.9%、0%;食蟹猴分别为91.9%、1.6%。食蟹猴和恒河猴甲型病毒性肝炎感染率高。

猕猴;肝炎病毒;抗体检测

人病毒性肝炎(Viral hepatitis)是由多种病毒引起的人类肝细胞肿胀,汇管区水肿和炎性细胞浸润,导致肝肿大为特征的一组传染病,是世界上流行久远、广泛、危害极大的传染病之一[1-2]。

实验猕猴是医学科学研究中非常重要的实验动物,猕猴可被甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)、丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)、戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)、庚型肝炎病毒(Hepatitis G virus,HGV)攻击感染发病,可用于开展相关致病机理的研究。虽然用猕猴做乙型肝炎动物模型效果不太理想[3],但猕猴能感染甲型肝炎成为自然宿主[4]。目前国内未见对灵长类实验动物进行病毒性肝炎血清学较全面调查的报道,特别是尚无两种猕猴进行多型病毒性肝炎血清学的对比调查报道。开展对猕猴的病毒性肝炎血清学调查,有助于研究猕猴病毒性肝炎的感染、流行,有利于更好地控制传播以及进一步开展相关流行病学的研究。

肝炎病毒免疫球蛋白IgG抗体是机体遭受病毒感染后产生的总抗体,一般在感染后30 d出现,90 d～120 d达到高峰,可持续几年或几十年,形成一种保护性抗体,病毒性肝炎免疫球蛋白IgG抗体的存在表明机体对肝炎病毒具有免疫力,是肝炎病毒曾经感染的标志。肝炎病毒免疫球蛋白IgM抗体是机体遭受病毒感染后产生的应急抗体,一般在感染后20 d出现,35 d～42 d达到高峰,随后逐渐减少,于84 d～112 d后大部分消失,肝炎病毒免疫球蛋白IgM抗体的存在表明机体处在病毒感染的急性期,是病毒感染早期诊断的重要指标。

本文对猕猴群甲型肝炎病毒抗体(抗-HAVIgG 、抗-HAVIgM),乙型肝炎病毒抗体(HbsAg、抗HBs、HbeAg 、抗 HBe、抗 HBe)简称乙肝两对半 ,丙型肝炎病毒抗体(抗-HCVIgG),丁型肝炎病毒抗体(抗-HDVIgG),戊型肝炎病毒抗体(抗-HEVIgG),庚型肝炎病毒抗体(抗-HGVIgG),T T肝炎病毒抗体(抗-TTVIgG)进行了检测,旨在为控制病毒性肝炎的传播,提高饲养管理水平与实验动物质量提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血清样品 来源于中国实验动物云南灵长类中心长期人工饲养于大笼的猕猴525只。其中食蟹猴309只,公猴128只、母猴181只。恒河猴216只,公猴 111只、母猴 106只。后肢静脉采血,2 500 r/min离心30 min后,分离血清,置-30 ℃保存、备用。

1.1.2 诊断试剂盒 甲肝病毒IgG抗体(HAVIgG)酶联免疫诊断试剂盒,厦门新创科技有限公司生产;甲肝病毒IgG抗体(HAV-IgM),乙肝两对半酶联免疫诊断试剂盒,深圳月亮湾生物工程有限公司生产;丙肝病毒IgG抗体(HCV-IgG),丁肝病毒IgG抗体(HDV-IgG),戊肝病毒IgG抗体(HEVIgG),庚肝病毒IgG抗体(HGV-IgG)酶联免疫诊断试剂盒,深圳博赛生物工程有限公司生产;TT肝炎病毒IgG抗体(TTVIgG)酶联免疫诊断试剂盒,华美生物工程公司生产。

1.2 方法

采用酶联免疫吸附试验(ELISA)。按试剂盒说明书的要求操作,依其反应结果判定;抗体测定用酶标仪(ELx800型)测吸光度值。

2 结果

2.1 猕猴肝炎病毒抗体检测结果

结果见表1。在相同的人工饲养条件下,猕猴除甲肝以外,其他肝炎病毒抗体(IgG)均为阴性。恒河猴与食蟹猴甲肝病毒(IgG)抗体(HAVIgG)阳性率分别为 81.9%、91.9%,经t检验,存在显著性差异(P＜0.05)。表明食蟹猴感染比恒河猴多。恒河猴甲肝病毒(IgM)抗体全为阴性,而食蟹猴甲肝病毒(IgM)抗体阳性率为1.6%。

2.2 猕猴不同性别甲肝病毒IgG抗体检测结果

恒河猴甲肝病毒(IgG)抗体公猴、母猴分别为84.5%、79.2%.食蟹猴甲肝病毒(IgG)抗体公猴、母猴分别为93.8%、90.6%。经t检验,无显著性差异(P＞0.05)表2。表明肝炎病毒感染无性别差异。

表1 猕猴肝炎病毒抗体的检测结果Table 1 Antibody detection results of Hepatitis Virus in Rhesus monkeys

表2 猕猴不同性别甲肝病毒IgG抗体检测结果Table 2 IgG antibody dectection results of hepatitis A virus in different sex Rhesus monkey s

3 讨论

人型甲型肝炎病毒能自发地感染实验动物,感染后实验猴产生血清学反应。这次检出的甲型肝炎病毒抗体(抗-HAVIgG)阳性的食蟹猴和恒河猴均为隐性感染,感染猴未观察到明显的临床症状。而检出的甲肝病毒抗体(抗-HAVIgM)阳性的食蟹猴也为隐性感染,感染猴未观察到明显的临床症状。今后需要对甲肝病毒抗体(HAVIgM)阳性的食蟹猴进行肝功检测,以确认甲肝病毒对灵长类动物肝脏机能的损伤情况。

肝病毒在不同种群的阳性率不同,食蟹猴与恒河猴阳性率差异显著,可能与食蟹猴的食性有关。食蟹猴喜食近海产品,而大多数毛蚶、泥蚶、蛤蜊等近海产品都是甲肝病毒的自然宿主。传染源的确认有待流行病学的研究。而猕猴公、母猴之间阳性率无显著性差异。

孙小梅等[5]对人工大笼饲养条件下的49只恒河猴甲肝病毒抗体(HAV IgG)进行检测,阳性率85.7%。作者检测216只大笼饲养的恒河猴,阳性率81.9%,虽然二者检测的时间、地点、数量不同,但其结果非常接近。似已说明甲肝病毒抗体(HAV IgG)在人工大笼饲养条件下的感染客观状况。

由于甲肝病毒主要以粪—口途径传播,大笼饲养的猴群接触被粪便污染的水源、饲料、笼具的可能性较大,阳性率较高。甲肝属人畜共患传染病,为保护员工的健康,相关员工进行甲肝疫苗的注射,主动免疫防护,切断人与动物间的传播途径,同时防止动物到人的传播。在今后的饲养管理中,应积极创造条件实行食蟹猴与恒河猴的分区饲养,建立相对隔离的饲养环境,实行分区专人饲养管理,饲养、清洁卫生工具专用。实行员工每年定期体检,体检结果显示不适合接触动物的员工应及时调离。特别是要加强水源的管理,及时消毒,定期检测。杜绝因水污染而导致的甲肝传播。与此同时要加强人和动物粪便的无害化处理,避免反复乃至交叉感染。

在相同的人工饲养条件下,在猕猴群中检测不到乙肝、丙肝、丁肝、戊肝、庚肝及T T病毒的抗体。只检测出了甲肝病毒(HAV IgG、IgM)抗体,阳性的食蟹猴和恒河猴均为隐性感染,感染猴未观察到明显的临床症状。食蟹猴较恒河猴阳性率高,而猕猴公、母猴之间阳性率无显著性差异。检测结果为控制病毒性肝炎的传播,提高饲养管理水平与实验动物质量提供了依据。

[1]Kumar V,Cotran R S,Robbins R S.Robbins basic pathology[M].北京:北京大学医学出版社,2003:600-608.

[2]闻玉梅.现代医学微生物学[M].上海:上海医科大学出版社,1999:971-989;1143-1146;1168-1179.

[3]李箐箐,陈乾生.病毒性肝炎动物模型的研究[J].实验动物科学与管理,1995,12(3):29-31.

[4]佘锐萍,李文贵,王英华,等.病毒性肝炎-值得警惕的重要人兽互传病[J].科技导报,2007,25(4):44-52.

[5]孙小梅,代解杰,唐东红,等.恒河猴群中甲型肝炎病毒(HAV)血清学调查[J].中国实验动物学杂志,2000,10(1):37-39.

Serological Investigation on Viral Hepatitis in Rhesus Monkeys

YANG Li-fen,LI Shao-dong,ZHOU Ya-min,TANG Pin-chao,WU Zhi-lei,WANG Qiong

(Yunnan National Laboratory Center of China,K unming,Yunnan,650216,China)

The preliminary investigates on the positive rate for antibodies of viral hepatitis in rhesus and Cynomolgus monkeys was conducted provide the bases for controlling the infection of viral hepatitis and improving the level of breeding management and the quality of laboratory animals.ELISA method was used to test antibodies(IgG,IgM)of the viral hepatitis(HAV,HBV,HCV,HDV,HEV,HGV,T TV)in 525 sera from 2 species monkeys.Antibodies(IgG)of viral hepatitis(HBV,HCV,HDV,HEV,T TV)were negative in monkey colonies.Positive rates of antibodies IgG and IgM of viral hepatitis type A were 81.9%and 0%respectively in Rhesus,and was 91.9%and 1.6%in Cynomolgus.The positive rates of antibodies IgG and IgM were lower in Rhesus than in Cynomolgus.Therefore,in order to control viral hepatitis infection,the houses of two species monkey colonies should be strictly separated.

Rhesus monkey;Hepatitis virus;antibody detection

S865.16

B

1007-5038(2010)08-0125-03

2009-12-18

杨丽芬(1964-),女(纳西族),云南昆明人,主要从事实验动物学研究。