首乌益智胶囊对血管性痴呆大鼠学习记忆及性激素水平的影响

李长生 杨晓妮 贺 仆 刘世青 林梅青

(山东省千佛山医院,山东 济南 250014)

血管性痴呆(VD)是因脑血管疾病所致的智能及认知功能障碍的临床综合征〔1〕,是老年人多发病和疑难病,给社会和家庭带来沉重的负担,因此探讨其发病原因和机制,研究开发治疗该病的新药具有十分重要的意义。随着对 VD研究的不断深入,人们认识到性激素与VD关系密切,性激素水平与VD的发生发展存在着密切联系。本研究采用改良 Pulsinelli四血管阻断(4-VO)法制造 VD大鼠模型,观察首乌益智胶囊对 VD大鼠的疗效,并通过性激素水平的变化,进一步探讨首乌益智胶囊对 VD的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 Wistar健康老龄大鼠 120只(月龄 ＞15个月),雌雄各半,体重 300～400 g。山东大学实验动物中心提供,实验动物质量合格证号:010281。

1.1.2 药物与试剂 首乌益智胶囊(药物组成:制何首乌、黄芪、丹参、川芎、益智仁、天麻、水蛭等)由济南钢铁职工医院制剂室生产。脑复康片由济南东风制药有限公司生产(批号0307043)。碘〔125I〕-人血清睾酮 (T)放射免疫药盒、碘 〔125I〕-雌二醇(E2)放射免疫药盒、碘〔125I〕-孕酮(P)放射免疫药盒,均购于北京北免东雅生物技术研究所。

1.2 方法

1.2.1 迷宫学习训练 大鼠购进,室温 20～24℃,相对湿度45～55%,饲养 1 w后,Morris水迷宫法进行大鼠行为学训练。方法:定位航行试验,每天下午 4次,将受试大鼠按顺时钟方向顺序面向池壁放入水中。记录 2 min内找到平台的时间(逃避潜伏期)。共学习 6d。

1.2.2 VD大鼠模型的制备 用改良 Pulsinelli4-VO法制造VD大鼠模型〔2,3〕。大鼠于术前禁食 12 h,不禁水。0.4%戊巴比妥钠,0.16g/kg腹腔麻醉,将大鼠俯卧固定,行背侧颈正中切口,逐层钝性分离,暴露双侧第 1颈椎横突翼小孔,用直径约

0.5 mm的电凝针灼烧双侧翼小孔内的椎动脉,造成永久性闭塞,再将大鼠仰卧固定,行腹侧颈正中切口,钝性分离双侧颈总动脉,以“4”号丝线穿线备用。24 h后,用微动脉夹夹闭双侧颈总动脉5 min,间隔 1 h后再夹闭 5 min,共夹闭 3次,局部伤口缝合前,以庆大霉素局部喷洒处理防止感染,术后3d给予青霉素 2 U/kg肌肉注射抗感染。假手术组步骤同上,不做缺血处理。

1.2.3 造模后水迷宫测试 造模术后 7 d,对大鼠进行水迷宫测试。定位航行试验:历时 6 d,每天下午 4次,将受试大鼠按顺时钟方向顺序面向池壁放入水中。记录2 min内找到平台的时间。前 5 d学习,第 6天测试,记录测试成绩。空间探索试验:第 6天下午定位航行试验后撤除平台,将大鼠从任意一点放入水中,拍摄游泳过程 1 min,分析循行路径,统计其在原平台所在象限内外循行路径之比,和在该象限内外停留的时间之比,统计跨越原平台位置的次数。

1.2.4 分组 按术后水迷宫定位航行测试成绩,随机分组。将 VD模型大鼠分为首乌益智胶囊组、脑复康组、盐水组,每组16只(雌雄各 8只)。并设假手术组 10只(雌雄各 5只)。

1.2.5 药物干预 术后 7 d,给大鼠用灌胃器灌胃,每天下午灌一次,共灌胃 20 d。灌胃液体温度为 20℃。首乌益智胶囊组,首乌益智灵溶液灌胃,每次5 ml,含药量 0.24 g。盐水组,生理盐水灌胃,每次5ml。脑复康组,脑复康溶液灌胃,每次5 ml,含药量 0.06 g。假手术组,生理盐水灌胃,每次 5 ml。

1.2.6 用药后迷宫测试 用药 20 d后,对大鼠进行水迷宫测试。方法同造模后水迷宫测试。迷宫后 3 d,颈静脉取血测性激素。

1.3 性激素的测定 E2、P、T三个试验项目均采用放射免疫分析方法。

1.4 统计学方法 数据以x±s表示,应用 SPSS11.5软件,组内数据比较用 t检验,组间数据比较用单因素方差分析。

2 结 果

2.1 各组大鼠造模后定位航行试验结果 造模后假手术组大鼠的逃避潜伏期为(2.26±0.55)s,明显小于盐水组(6.45±0.39)s、脑复康组(6.42±0.44)s、首乌益智胶囊组(6.55±0.48)s,具有统计学意义(P＜0.01),盐水组、首乌益智胶囊组、脑复康组间大鼠的逃避潜伏期无统计学差异(P＞0.05),表明 VD模型成功。

2.2 各组大鼠用药前后定位航行试验及空间探索试验测试结果 用药后组内比较,首乌益智胶囊组、脑复康组治疗后逃避潜伏期明显小于治疗前(P＜0.01);首乌益智胶囊组、脑复康组治疗后在原平台象限内的游泳距离和时间及跨越原平台位置的次数均较治疗前明显改善(P＜0.05,P＜0.01);用药后组间比较,首乌益智胶囊组大鼠的逃避潜伏期明显小于脑复康组和盐水组(P＜0.01,P＜0.05),低于假手术组(P＜0.01);首乌益智胶囊组大鼠在原平台所在象限内的循行路径和停留时间及跨越原平台位置的次数均好于脑复康组、盐水组,低于假手术组(P＜0.01)(见表 1)。

2.3 各组VD模型大鼠用药前后性激素水平变化 VD模型雌鼠用药后首乌益智胶囊组、脑复康组治疗后E2、P水平明显高于治疗前(P＜0.05),VD模型雄鼠用药后首乌益智胶囊组、脑复康组治疗后 E2水平明显低于治疗前(P＜0.05),T水平明显高于治疗前(P＜0.05)。首乌益智胶囊组雌鼠 E2、P水平明显高于脑复康组、盐水组(P＜0.05),首乌益智胶囊组雄鼠 E2水平明显低于脑复康组、盐水组,而T水平明显高于脑复康组、盐水组(P＜0.05),见表 2。

表1 用药前后定位航行成绩及空间探索成绩分析(x±s)

表2 VAD模型大鼠用药后性激素水平比较(x±s)

3 讨 论

研究表明,VD的病理机制主要有脑梗死、小血管疾病、白质损伤、神经元损伤几方面;其分子机制主要有级联反应、兴奋性毒性、炎症反应、细胞凋亡等〔4〕。VD的发病机制目前还不完全清楚,随着对 VD研究的不断深入,人们认识到性激素与 VD关系密切。近年来研究发现 VD时血浆性激素水平发生变化,出现性激素水平失衡,认知功能的减退与性激素水平的下降成正相关,提示性激素水平与 VD的发生发展存在着密切联系。性激素对 VD发挥作用主要通过扩血管增加脑血流、促进葡萄糖代谢、促进乙酰胆碱合成和释放、降血脂、改善血液流变学以及减少兴奋性氨基酸毒性、抗氧自由基〔5,6〕等几个方面发挥作用,改善症状。本实验研究结果表明:首乌益智胶囊能升高 VD模型雌鼠体内 E2、P水平,降低 VD模型雄鼠体内 E2水平,升高T水平,从而调节VD模型大鼠体内性激素水平的失衡。

VD属中医“呆病”范畴,本病病位在脑,与肝、肾、心、脾等脏密切相关,我们以传统中医理论为指导,根据多年来的临床经验,提出肾精亏虚、淤血阻络是 VD的基本病机,确立了补肾健脑、化淤通窍的基本治法,经过反复试验,组方不断加减,制成首乌益智胶囊。本方以何首乌为君药,苦、甘、涩、温、不寒不燥,专入肝肾,养阴益精,补肾健脑,养血益肝。黄芪气味俱轻,具有升发之性,功专补气升阳,为补气药之最,益智仁辛温气香,既能温补肾阳,收敛固精,缩小便,又能温胃逐寒,暖脾摄涎唾。二药为辅药鼓舞肾气以生精,助阳以化阴。银杏叶、水蛭、天麻共为佐药,与主药、辅药共达益气活血、化瘀通络、推陈致新、填精益脑、开窍聪智之功。川芎为使药,辛温香窜,走而不守,为血中之气药,与黄芪相辅相成、益气活血、安神醒脑,可带诸药到达病所。全方配伍共达补肾健脑、益精填髓、益气活血、化瘀通窍之功跑。本实验研究结果验证了首乌益智灵对 VD有明显的治疗作用。

首乌益智灵能明显改善 VD大鼠的智能,其治疗 VD的机制之一可能是调节 VAD模型大鼠体内性激素水平。这为中咏药防治脑 VD提供了新思路、新方法,有重要的使用价值和理论意义。

1 王维治,罗祖明.神经病学〔M〕.北京:人民卫生出版社,2002:253-5.

2 Schmidt-Kastner R,Paschen W,Ophoff BG,et al.Q modified four-wessel occlusion model for inducing in complete forebrain ischemia in rats〔J〕.Stroke,1989;20:936-8.

3 Pulsinelli WA,Brierley JB,Plum F.Temporal profile of neuronal damage in model of transient forebrain ischemia〔J〕.AnnNeurol,1982;11:491.

4 田金洲.血管性痴呆〔M〕.北京:人民卫生出版社,2003:210.

5 朱鋐达,陈名道 .性激素与动脉硬化性心血管疾病及其相关事件的关系〔J〕.中华内分泌代谢杂志,2005;21(1):84-7.

6 张秀清,迟兆富 .性激素与老年期脑梗死的相关性研究进展〔J〕.山东医药,2003;43(25):54-5.