2种丙泊酚注射液犬体内药动学研究

宋桂娥，何海霞（1.山西省电力公司医保处，太原市 030001；2.重庆医科大学附属第一医院临床药理研究室，重庆市 400016）

丙泊酚（Propofol）为烷基酚类的短效静脉麻醉药，临床上主要用于全身麻醉的诱导或短时麻醉的维持。丙泊酚目前制剂主要有脂肪乳注射剂，其微乳制剂为新近研究的产品，无明显破乳现象，更适于临床使用。为比较2种制剂的作用，笔者在本文中以Beagle犬为研究对象，首先对其进行了体内药动学比较研究，以为后续研究提供基础。

1 材料

1.1 试药

实验制剂丙泊酚微乳注射液（简称MBF，北京世桥生物制药有限公司提供，批号：20071003，pH 6.7，规格：100 mg·10 mL－1）；参比制剂丙泊酚脂肪乳注射液（商品名得普利麻，简称DBF，阿斯利康公司生产，批号：EX109，规格：100 mg·10 mL－1）；丙泊酚对照品（北京世桥生物制药有限公司提供，批号：931028，纯度：＞99.5%）；甲醇、乙腈均为色谱级，硫酸铵为分析纯，水为三蒸水。

1.2 动物

健康合格Beagle犬12只，♀♂各半，体质量9～10 kg，个体间体质量不超过±10%；由四川养麝研究所提供，环境设施合格证和质量合格证号分别为川实动管第64号及川实动管质第63号。

1.3 仪器

1100系列高效液相色谱仪，包括G1321A型荧光检测器及色谱数据处理系统（美国Agilent公司）；SK30型低温离心机（美国Sigma公司）；BS210S电子天平（德国Sartorius公司）；QL-901旋涡混匀器（上海医疗器械六厂）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[1]

色谱柱：Agilent ZORBAX-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；预柱：C18（250 mm×4.6 mm，30 μm）；流动相：甲醇-水（75 ∶25）；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL·min－1；检测波长：ex：276 nm，em：310 nm。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取丙泊酚对照品10 mg，置于100 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，制备为0.1µg·mL－1标准贮备液备用。

2.3 样品处理[2]

取血浆0.2 mL置于1.5 mL带盖EP管内，加饱和硫酸铵、甲醇、乙腈各0.2 mL，漩涡振荡1 min，15000 r·min－1离心15 min，取上清液0.1 mL进样，记录峰面积，以外标法定量。

2.4 丙泊酚浓度测定方法学考察

2.4.1 色谱行为。取“2.2”项下对照品溶液及空白血浆、空白血浆+对照品及血浆样品进样分析，色谱结果详见图1。

图1 高效液相色谱图A.对照品；B.空白血浆；C.空白血浆+对照品；D.血浆样品 ；1.丙泊酚Fig 1 HPLC chromatographyA.reference substance；B.blank plasma；C.blank plasma spiked with reference substance；D.plasma sample；1.propofol

由图1可见，在本实验所采用的色谱条件下，血浆中丙泊酚的tR为11.5 min左右，且峰形良好，不受血浆内源性物质的干扰。

2.4.2 标准曲线与最低定量浓度。在空白血浆中分别添加丙泊酚对照品溶液，使血药浓度相当于0.01、0.05、0.25、0.5、1.5、3.5、7.0 µg·mL－1，按照“2.3”项下方法进行处理和分离测定，所得数据用加权最小二乘法进行线性回归，得丙泊酚峰面积（Y）与丙泊酚浓度（X）的回归方程：Y＝446.5850X－4.5506（r＝0.9999）。结果表明，丙泊酚血浆检测浓度线性范围为0.01～7.0 µg·mL－1，最低定量浓度0.01 µg·mL－1。

2.4.3 回收率及日内与日间精密度。于空白血浆中加入高、中、低（7.000、1.500、0.050 µg·mL－1）3种浓度的丙泊酚对照品溶液，按相关方法进行实验，评价本法测定血浆中丙泊酚浓度的方法回收率、萃取回收率及日内、日间RSD，结果见表1。

表1 回收率及精密度实验结果Tab 1 Results of recovery and precision test

由表1可见，3种浓度的回收率为（79.85～110.12）%，日内、日间RSD小于15.67%。

2.4.4 稳定性实验。用空白犬血浆制备含丙泊酚浓度为0.05、1.5、7.0 μg mL－1的血浆样品，在室温、冻融条件下放置，室温分别在0、4、8、14、20、24 h取样，冻融分别在0、5、10、15 、21、28 d时取样，测定丙泊酚的峰面积。结果表明，3种浓度样品在室温放置24 h内稳定，RSD分别为2.42%、3.92%、5.28%；在冻融条件下放置28 d内稳定，RSD分别为4.11%、3.51%、5.03%。

2.5 实验方案

采用随机交叉实验设计，单剂量静脉注射给药。将12只Beagle犬随机分为实验制剂组和参比制剂组，每组6只，在Ⅰ、Ⅱ阶段分别交叉静脉注射2种制剂，2次给药间经1周清洗期。实验前禁食12 h后，于次日晨静脉注射4 mg·kg－1实验制剂或参比制剂。给药后4 h后统一进食。实验期间禁食一切非实验药物，并由研究人员进行监护，观察记录给药后犬的一般体征状况。于给药后1、3、5、10、20、40、60、90、120、180、240、360、480 min采静脉血1.5 mL，分离血浆，低温保存（－20℃），待测。间隔1周后交叉静注另一种制剂，按前述方法采集静脉血。

2.6 统计学方法

采用3p97计算软件，计算各个体的药动学参数，AUC按梯形面积法计算。对2种制剂的AUC进行方差分析，双单侧t检验，（1－2α）置信区间法进行统计分析，判断两者是否存在差异。

2.7 药-时曲线

12只Beagle犬交叉静脉注射2种制剂4 mg·kg－1后，2组平均血药浓度-时间曲线见图2。

图2 静脉注射2种丙泊酚制剂后的平均药-时曲线Fig 2 Mean plasma concentration-time curves of propofol after intravenous administration

由图2可见，2种丙泊酚制剂在Beagle犬体内的药-时曲线均呈二室模型，药动学过程较为接近。

2.8 药动学参数

采用3p97计算机软件（中国数学药理学会），计算各个体的主要药动学参数，结果见表2。

表2 2种丙泊酚制剂在Beagle犬体内的药动学参数（n＝12）Tab 2 Pharmacokinetic parameters of 2 kinds of propofol preparations in Beagle dogs（n＝12）

2.9 药动学参数比较

对2种制剂的AUC经对数转换后进行方差分析、双单侧t检验及计算（1－2α）置信区间。结果，实验制剂MBF与参比制剂 DBF 的 AUC（0～∞）分别为（29.33±13.55）、（28.66±13.76）µg·min·mL－1，经对数转换方差分析结果表明，差异无显著性，F（1，10）为0.2042，P＞0.05；双单侧t检验t1＝3.956，t2＝3.054，均大于t0.05＝1.812；（1－2α）置信区间为[91.7%～115.5%]。

MBF 与 DBF的 AUC（0～t）分别为（27.67±9.60）、（21.90±10.10）µg·min·mL－1，经对数转换方差分析结果表明，差异无显著性，F（1，10）为1.8235，P＞0.05；双单侧t检验t1＝7.231，t2＝4.530，均大于t0.05＝1.812；（1－2α）置信区间为[98.3%～112.8%]。以上结果表明2种制剂在犬体内药动学参数AUC无显著性差异。

3 讨论

有关丙泊酚浓度测定的方法已有报道[1]，本文在现有的实验室条件下，对文献方法进一步验证，在所建立的色谱方法下，主药的峰形良好，且与血浆内源性物质分离好，回收率高，专属性强，完全能满足药动学研究要求。

由图2及表2可见，2种丙泊酚制剂在犬体内药动学过程较为接近，药动学参数经3种统计学方法处理表明，2种制剂无显著性差异。本实验为新剂型丙泊酚微乳注射液的应用提供了药动学依据。

[1]王增涛.3岁以下儿童丙泊酚药动学研究[J].中国现代应用药学，2006，23（2）：132.

[2]余松林主编.医学统计学[M].北京：人民卫生出版社，2003：330.