黄鹤通络胶囊对大鼠 Pulsinelli法脑缺血再灌注模型的影响

刘福昌 张晓双 程 陕西省宝鸡职业技术学院中医药学系 (宝鸡 721013)

黄鹤通络胶囊由姜黄、仙鹤草、丹参、葛根等组成,具有活血化瘀、醒脑通络等功能,临床主要用于脑卒中的治疗。为了阐明其药理作用及其机制,我们观察了黄鹤通络胶囊对大鼠Pulsinelli法脑缺血再灌注模型的影响。

1 实验材料 1.1 实验动物 SD品系大鼠,雄性,250～ 300g,由第四军医大学实验动物中心提供,合格证号 scxk(军 )2007-007。

1.2 药品及试剂 黄鹤通络胶囊,0.45g/粒,内容物呈棕色粉末状 ,1g内容物约相当于生药 5.1g,批号:20060823,用蒸馏水将其配成所需浓度的混悬液备用;曲克芦丁片,由山西津华晖星制药有限公司生产,批号:060901;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒,由南京建成生物工程研究所出品 ,批号分别为 20061027、20061101;红四氮唑,上海科丰化学试剂有限公司出品,批号:050812。

1.3 主要仪器 SW-CJ-2FD型双人单面净化工作台,苏州净化设备有限公司出品;UV1102紫外分光光度计,上海天美科学仪器有限公司生产;702型超低温冰箱,美国热电公司生产;HDW-600型高频电灼治疗仪,成都航天产业开发有限责任公司生产。

2 实验方法 取 SD品系大鼠,雄性,体重 280～ 320g。除假手术组外,其余大鼠采用 Pulsinelli法 (四血管阻塞法)建立大鼠全脑缺血再灌注损伤模型[1～3]。以 10%水合氯醛 0.35mL/100g腹腔注射麻醉,背位固定。在超净工作台下,按无菌操作于大鼠背部正中枕骨后第 1、2颈椎位置切口,钝性分离,暴露第 1颈椎的横突翼,并找到左、右横突孔,用电凝器灼断双侧椎动脉,缝合伤口。然后,再仰位固定大鼠,钝性分离左右两侧颈总动脉,用动脉夹夹闭双侧颈总动脉阻断血流,10min后同时开启两动脉夹进行脑再灌流。术中及术后麻醉清醒前用烤灯维持动物体温(37.0±0.5)℃ ,实验室温度保持在(24～ 25)℃。第2d,按动物体征状况[4]均衡后随机分为 5组,即模型组,曲克芦丁组(150mg/kg)、黄鹤通络胶囊大、中、小剂量组(8g生药 /kg、4g生药 /kg和 2g生药 /kg)。假手术组除不阻塞四血管和脑再灌流外,其他操作与模型组相同。各组动物灌胃给药,模型组和假手术组给予等容积的蒸馏水。各组动物每天给药 1次,连续 7天,给药容积 20mL/kg。对于有进食困难的动物,每天早晚灌胃浓牛奶各 1次。末次给药后 1h,断头处死大鼠,迅速取出全脑,称重,计算脑指数(g/100g体重 )。除嗅球、小脑和低位脑干外,将脑置于-80℃,冠状切成 6片 1～ 1.5mm厚脑片。取同一位置的 1个脑片,先取适量照 SOD和 M DA试剂盒说明测定脑组织 SOD和 M DA,剩余部分用 10%福尔马林固定,常规取材、脱水、浸蜡、包埋、切片、HE染色,光镜下进行病理学检查。其他 5片脑组织迅速置于 2%红四氮唑(TTC染色)磷酸缓冲溶液中,37℃避光温孵染色 30min,其间每隔 7～ 8min翻动 1次,染色后正常脑组织呈红色,梗塞组织呈白色。温孵完毕后用 SONY800万相素数码相机拍照脑片 ,输入计算机,采用 image-pro plus图像处理软件计算梗塞面积,求出每鼠 5片脑片总梗塞面积与脑片总面积之比。为了消除误差,将图像中的所有白色区域均记入梗塞面积。

3 结 果 3.1 对脑组织 SOD和 M DA的影响 测定脑组织 SOD和 M DA,用t值法进行数据处理,比较组间差异。结果见表 1。

表1 对脑组织 SOD和 MDA的影响

结果表明,黄鹤通络胶囊 4g生药 /kg和 8g生药 /kg能明显升高脑缺血再灌注大鼠脑组织 SOD活性;黄鹤通络胶囊 8g生药 /kg能降低脑缺血再灌注大鼠脑组织 MDA含量,与模型组比较,差异有显著性意义 (P＜0.05或 P＜0.01),提示黄鹤通络胶囊具有提高脑缺血再灌注大鼠脑组织的抗氧化作用。

3.2 对脑指数和脑梗塞的影响 称量脑重,计算脑指数(g/100g体重)结果见表 2。TTC染色后拍照脑片,输入计算机,用 image-pro plus图像处理软件计算梗塞面积 ,求出每鼠 5片脑片总梗塞面积与脑片总面积之比。用 t值法进行数据处理,比较组间差异,结果见表 2。

表2 对脑指数和脑梗塞的影响

黄鹤通络胶囊 2g生药 /kg、4g生药 /kg和 8g生药 /kg对脑缺血再灌注大鼠脑指数影响较小,但均能减小脑梗塞面积,降低脑梗塞面积与脑总面积比值与模型组比较差异有显著性意义(P ＜0.01)。

3.3 对脑组织病理学检查的影响 脑组织病理学检查显示,假手术组神经元结构正常,模型组血管明显扩张,水肿现象明显,神经元结构紊乱,尼氏体减少,其中 1例脑膜血管扩张,有大量炎细胞浸润。黄鹤通络胶囊 2g生药 /kg、4g生药 /kg和8g生药 /kg血管扩张较轻,水肿明显改善,神经元损伤减轻,其中 4g生药 /kg和 8g生药 /kg作用较显著。

4 讨 论 脑卒中是以脑循环血流量下降为特征的中枢神经系统疾病,是现今世界范围主要的致死、致残疾病之一。脑卒中属祖国医学“中风病”范畴。可分为多种不同证型,如肝阳暴亢,风火上扰;风痰瘀血,痹阻脉络;气虚血瘀,脉络瘀阻;痰浊上扰 ,蒙蔽清窍;瘀血内阻,神明失用等。在传统认识的基础之上,结合临床实践,有学者认为:不少正经、奇经皆上注于头,因而脑内气血丰盈、络脉宏富,而中风病位在脑,故中风病自始至终都存在着“病络”的状况[5]。近来研究发现,脑血流中断和再灌注使脑细胞产生损伤是一个快速的级联反应,包括许多环节,如能量障碍、细胞酸中毒、兴奋性氨基酸释放增加、细胞内钙失稳态、自由基生成、凋亡基因激活等。这些环节互为因果,彼此重叠,并相互联系,形成恶性循环,最终导致细胞凋亡或坏死。更提出了“毒损脑络”的中风病机理论[6]。

黄鹤通络胶囊由姜黄、仙鹤草、丹参、葛根等组成,具有活血化瘀、醒脑通络等功能,临床主要用于脑卒中的治疗。本实验表明,黄鹤通络胶囊 4g生药 /kg和 8g生药 /kg能明显升高SOD活性,8g生药 /kg能降低 M DA含量 0.05或 0.01)。黄鹤通络胶囊 2g生药 /kg、4g生药 /kg和 8g生药 /kg对脑缺血再灌注大鼠脑指数影响较小,但均能减小脑梗塞面积,降低脑梗塞面积与脑总面积比值(P＜0.01)。脑组织病理学检查显示,假手术组神经元结构正常,模型组血管明显扩张,水肿现象明显,神经元结构紊乱,尼氏体减少,其中 1例脑膜血管扩张,有大量炎细胞浸润。黄鹤通络胶囊大、中剂量组动物脑血管扩张较轻,水肿改善,神经元损伤减轻。,提示黄鹤通络胶囊具有提高脑缺血再灌注大鼠脑组织的抗氧化作用,抑制四血管阻塞引起的大鼠全脑缺血再灌注损伤,减小脑梗塞面积和脑组织病理损害,对脑卒中产生治疗作用。

[1] 徐叔云 ,卞如濂,陈 修.药理实验方法学 [M].第三版.北京:人民卫生出版社,2002:1061.

[2] 陈 奇.中药药效研究思路与方法[M].北京:人民卫生出版社,2005:213.

[3] 陈伟峰,韩继媛,田兆兴,等.复方麝香注射液在大鼠急性缺血再灌注损伤中对 BDN F和 NGF的影响 [J].广西中医学院学报,2005,8(3):8-10.

[4] 庞 涛,许 铁,纵雪梅,等.盐酸戊乙奎醚对脑缺血再灌注损伤大鼠脑梗死体积和行为学的影响 [J].徐州医学院学报,2006,26(5):391-394.

[5] 王永炎.中风络病证治述要[J].北京中医药大学学报,2004,27(5):1-3.

[6] 常富业 ,王永炎.毒损络脉诊释 [J].北京中医药大学学报,2006,29(11):729-731.