微生物生产功能性油酯-共轭亚油酸的研究进展

罗玉芬,徐尔尼,巫小丹

(南昌大学食品科学教育部重点实验室,江西南昌 330031)

微生物生产功能性油酯-共轭亚油酸的研究进展

罗玉芬,徐尔尼,巫小丹

(南昌大学食品科学教育部重点实验室,江西南昌 330031)

共轭亚油酸是一种功能性油脂,具有抗癌、抗动脉粥样硬化、减肥、促进生长、改善免疫功能等许多重要生理功能,在医药、食品、保健品、化妆品等中具有广阔的应用前景。本文系统地综述了可转化生成共轭亚油酸的微生物菌株、影响转化的因素以及共轭亚油的提取、纯化和检测方面的研究进展。

共轭亚油酸,微生物转化,提取

共轭亚油酸 (Conjugated linoleic acid,CLA)是一类具有多种生物学功能的多不饱和脂肪酸,主要存在于奶制品及反刍动物肉制品中,是一种天然活性物质。大量的科学研究证明,共轭亚油酸具有抗肿瘤、抗氧化、抗动脉粥样硬化、提高免疫力、提高骨骼密度、防治糖尿病等多种重要生理功能;还能降低动物和人体胆固醇以及甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇,降低动物和人体脂肪,增加肌肉。因此,共轭亚油酸成为目前药物开发、食品添加和动物营养等领域的研究热点。

1 共轭亚油酸的发现与功能研究

共轭亚油酸 (CLA)是存在于食物中的天然成分,Booth等 (1935)首次证明反刍动物食品中含有共轭双键的脂肪酸。1951年,P.L.Nichols等成功合成了共轭亚油酸 (CLA)。1966年,C.R.Kepler发现 c9, t11-CLA是反刍动物瘤胃内溶纤维丁酸弧菌氢化亚油酸过程中的中间体。1978年,M ichael Pariza在烹调过程中寻找肉中诱导有机体突变物质的形成时发现 CLA具有抑制诱变活性,并推测其抑制诱变活性能抑制癌症的发生。1985年,Pariza发现 CLA能降低小鼠皮肤癌的发病率;1990年,Y.L.Ha等确认 CLA对苯并芘诱导老鼠前胃肿瘤的形成有抑制作用。1991年,C.I p发现 CLA具有抑制老鼠乳腺癌的生成。20世纪 90年代中期 CLA的抗肿瘤特性得到了实验证实,由此引发了人们对 CLA的极大研究兴趣。1997年,Pariza小组发现,CLA能显著减少身体内的脂肪,并增加瘦肉的量。1999年,日本油脂公司建立了世界上第一家 CLA生产装置,CLA减肥胶囊 (营养补充剂)在美国上市。2002年,CLA列入列为我国“十五”国家重大科技专项——奶牛现代集约饲养关键技术研究与产业化开发项目。2003年,Tonalin CLA减肥胶囊在我国试销。大量的医学研究证明, CLA具有抵抗癌症,减少脂肪沉积,防止动脉粥样硬化,加强免疫系统功能的作用。CLA对改善动物机体代谢,重新分配营养素,增加瘦肉率,改善肉品质,提高动物免疫系统功能有明显效果。CLA正成为灸手可热的保健食品和促生长营养剂。

2 共轭亚油酸的结构

共轭亚油酸 (CLA)是指一系列含有共轭双键、具有位置和空间构型不同的十八碳二烯酸同分异构体的混合物。CLA的异构体十分丰富,从 2,4碳原子到 15,17碳原子有 14种可能的位置异构体,但其主要位置异构体有 4种,即:C8,C10;C9,C11;C10,C12和 C11,C13,而每种位置异构体又有 4种几何异构体即: cc,ct,tc和 tt,其中 c9,t11和 t10,c12两种异构体被证实具有很强的生理活性[1]。

3 微生物法生产共轭亚油酸

利用化学法如油酸烯丙醇脱水,亚油酸碱性异构化等都可以合成 CLA,不过产物是各种 CLA异构体的混合物。工业上目前主要是采用碱法异构化使亚油酸(LA)发生异构化而生成 CLA,其缺点是需要在碱性条件、高温和一定的压力下进行异构化反应,所得到的产物也是一系列 CLA位置和几何异构体的混合物,活性异构体 c9,t11-18∶2和 t10,c12-18∶2 CLA的含量低。此外,化学合成产物中的 t,t异构体对人体有害。由于化学合成法具有以上一些弊病,影响了合成产物的应用范围,因此,科学家们开始致力于生物合成CLA的研究。

许多微生物能够利用自身的酶将 LA转化成CLA。与化学合成法相比,利用微生物合成 CLA的特异性强,条件也非常温和,产物中活性 CLA异构体含量高,与天然食物中 CLA异构体组成相似,无毒副作用,有利于产品的开发应用。因此利用微生物生产CLA已成为该领域的发展方向。

3.1 生产共轭亚油酸的微生物

3.1.1 瘤胃菌 天然 CLA主要来自瘤胃细菌对亚油酸异构化作用及内源合成。Kepler等[2]发现,c9, t11-CLA是反刍动物瘤胃中厌氧溶纤维丁酸弧菌(B utyrivibrio fibrisolvens)生物氢化LA过程的中间体。Ki m等[3]从饲喂谷物的奶牛瘤胃中取样,经乳酸盐和胰蛋白胨富集培养,分离到能产生 t10,c12-CLA的埃氏巨型球菌 (M egasphaera elsdenii)。

虽然多种瘤胃菌均能催化LA转化成 CLA,但瘤胃菌的培养需要严格的厌氧条件,且生成的产物是以 c9,t11-CLA为主的CLA的混合物,异构体含量复杂,生成的 CLA在其它微生物存在下还可以发生氧化、还原等反应转化成其它脂肪酸,因此限制了在生产上的应用。

3.1.2 乳酸菌 乳酸菌是一群能从可发酵性碳水化合物中产生大量乳酸的革兰氏阳性细菌的通称,广泛存在于人、畜、禽肠道及多种食品中。乳酸菌兼性厌氧,培养条件易于控制,无毒安全。迄今,人们发现多种乳酸菌菌种可以发酵生产 CLA,乳酸菌中含有亚油酸异构酶,这是一种诱导酶,作用位点在脂肪酸的 c12双键上,能把LA转化为 c9,t11-CLA。空气对它没有影响,而有双键在 c6上的脂肪酸会抑制其活性,但有双键在 c9位置上的脂肪酸可提高其活性,得到的 CLA可直接从细胞培养液中提取。Ogawa等[4]报道,嗜酸乳杆菌 AKU1137(Lactobacillus acidophilusAKU1137)在微好氧的环境下,可将 LA转化为 CLA。实验表明,反应进行 4d后,95%的LA被转化为CLA。随后,Ogawa等又筛选到1株更有效的植物乳酸菌 AKU1009a(Lactobacillus plantarum AKU1009a),在最优条件下,以含 12%的 LA为底物经 108h,CLA产量可达 40mg/mL。AKU1009a菌株在脂肪酶存在下,还能转化蓖麻油合成 CLA。张中义等[5]从泡菜中筛选的一株具有较高转化能力的植物乳杆菌 ZS2058(Lactobacillus plantarumZS2058),在LA质量浓度为 1.204 mg/mL的条件下于 37℃培养 24 h,能将 11.6%的LA转化为 c9,t11-18∶2(质量分数 75.9%)和 t10,cl2-18∶2(质量分数 24.1%)异构体。 Ir mak等[6]对 嗜 酸 乳 杆 菌 (Lactobacillus acidophilus)、罗 伊 氏 乳 酸 杆 菌 ATCC23272 (Lactobacillus reuteriATCC 23272)和罗伊氏乳酸杆菌ATCC55739(Lactobacillus reuteri ATCC55739)进行研究发现,这3种菌都有将LA转化为CLA的能力。产量最高的是罗伊氏乳酸杆菌 ATCC55739。杜波等[7]首次自青贮饲料中分离筛选到一株植物乳酸菌ANCLA01(Lactobacillus plantarumANCLA01),能将浓度为 1mg/mL的 LA转化生成 33.44μg/mL的CLA。

3.1.3 丙酸菌 丙酸菌存在于牛奶、干酪及其它乳制品青贮饲料、土壤和家畜粪便中,丙酸菌中的某些菌种也可以产生 CLA。Jiang[8]的研究表明,费氏丙酸杆菌 (Propionibacterium frudenreichii)能将游离 LA转化成 CLA。他们采用MRS培养基作为初选培养基,检测了 19株丙酸菌转化LA为 CLA的能力。结果发现,有 3株丙酸菌 (PFF、PFF6、PFS)具有转化生成 CLA的能力,产量达 265μg/mL。并且,丙酸菌可将LA转化成胞外 CLA。Rainio[9]对费氏丙酸杆菌研究发现,在对数生长期 CLA形成量最多,有80%～87%的 LA转化成 CLA,其中 c9,t11-CLA占85%～95%。

3.1.4 共轭亚油酸高产菌的诱变育种 于国萍等[10]以紫外线、硫酸二乙酯、亚硝基胍进行多次及复合诱变处理,提高了德氏乳杆菌保加利亚亚种 Ldb2 (Lactobacillus.delbrueckiisubspbulgaricusLdb2)生成CLA的能力,最终获得了 315UU,98DD及 71UN 3株突变菌,使 CLA的生成能力较出发菌株提高幅度在43.04%～59.56%之间。并且指出,诱变剂的一次处理对菌株Ldb2提高 CLA的生成能力是有限的。而反复多次处理,尤其是一种诱变剂大剂量或两种诱变剂连续处理,对提高 CLA的生成能力效果更好。王璟等[10]以植物乳酸菌 A(Lactobacillus plantarumA)为出发菌株,经紫外线、硫酸二乙酯的依次处理,结合高浓度亚油酸平板 (0.1%)的筛选和进一步摇瓶复筛,得到一株 CLA高产菌株Lactobacillus plantarum H3-1,其共轭亚油酸产量高达 30.67mg/L,比出发菌株提高了 264.5%。

3.2 影响微生物转化生成共轭亚油酸的因素

微生物转化 LA生成 CLA受到各种因素的影响,包括菌种、培养基、细胞培养方式、底物(LA)的浓度、菌浓度、pH、培养温度、培养时间等。

3.2.1 培养基对转化生成共轭亚油酸的影响 在不同培养基上 CLA生产菌株的生长和转化能力有所不同。Alonso等[12]分析了嗜酸乳杆菌 (Lactobacillus acidophilus)和干酪乳杆菌 (Lactobacillus casei)在MRS或脱脂乳培养基中生产 c9,t11-/t10,c12-/t9, t11-CLA异构体以及总 CLA的状况。结果表明,菌株在MRS培养基中的LA转化率比在脱脂乳培养基中高。Niu等[13]对植物乳杆菌 ZS2058(Lactobacillus plantarumZS2058)进行研究发现,在含有 0.5mg/mL亚油酸的MRS培养基培养时,转化生成的 CLA中, c9,t11-CLA占 96.4%。王丽敏等[14]研究费氏丙酸杆菌费氏亚种 (P.freudenreichiisubspfreudenreichii),发现其在MRS,乳酸钠和脱脂乳 3种培养基质中均具转化葵花籽油生成 CLA的能力,但是 CLA产量在这三种培养基的顺序为MRS>乳酸钠 >脱脂乳。

3.2.2 细胞培养方式对转化生成共轭亚油酸的影响

在发酵过程的控制中,一方面要考虑菌体的最适生长条件,另一方面要考虑亚油酸异构酶的合成及酶活的最佳条件,所以选择合适的细胞培养方式至关重要。Martin等[15]利用混合碳源进行反刍动物瘤胃细菌的连续培养,在培养的 24～30h期间,c9, t11-CLA产率较高。当稀释速率控制在 0.05h-1时, CLA产率下降。梁新乐等[16]对费氏丙酸杆菌 HZ-P -35(Propionibacterium freudenreichiiHZ-P-35)高密度培养转化亚油酸生成共轭亚油酸进行了研究,分别采用间歇培养、pH-sat培养、间歇补料培养和连续补料培养四种培养方式进行细胞高密度培养。相对于间歇培养,pH-sat培养细胞干重是它的 1.5倍,间歇补料培养和连续补料培养的细胞干重分别是它的3.4倍和 2.97倍。而连续补料培养时的 CLA产量最高,是间歇培养 CLA产量的 1.29倍。因此认为间歇补料培养较有利于细胞高密度培养,而连续补料培养较有利于CLA的产生。

Lee等[17]将罗伊氏乳杆 菌 ATCC 55739 (Lactobacillus reuteriATCC 55739)固定在硅胶上,在最适条件下反应 1h,500mg/L的 LA可转化生成175mg/L的 CLA,转化率为 35%。而游离洗涤细胞在最适条件下反应 1h,仅产生 32mg/L的 CLA,转化率为 6.4%。固定化细胞 CLA转化率是游离洗涤细胞的 5.5倍。王欢等[18]研究了以海藻酸钠为载体,采用包埋法制备固定化干酪乳杆菌 (Lactobacillus casei)的相关条件对 CLA生成量的影响,在最适条件下培养 18h,CLA积累量可达到最大值 62.57μg/mL。而游离乳酸菌在相同条件下培养 18h,CLA积累量仅为50μg/mL。在游离乳酸菌与固定化乳酸菌均达到最大产量的 CLA时,固定化的乳酸菌比游离菌所用时间短,且 CLA积累量多,说明细胞固定化更有利于实现高产量的连续化作业,便于今后的工业化生产。

3.2.3 亚油酸浓度对转化生成共轭亚油酸的影响CLA是亚油酸异构酶异构化LA形成的产物,因此底物LA的浓度是决定 CLA形成的主要因素之一。底物LA浓度的提高,既有利于提高产物 CLA的浓度,也有利于提高 CLA的生成速率,但生产菌株对 LA的耐受性也存在一定的范围。LA浓度过高会抑制菌株的生长,从而使CLA的产量下降。因此底物LA存在一个最适宜的浓度范围。Kishino[19]从 14株乳酸菌中筛选到一株能将LA转化成 CLA的植物乳杆菌 AKU1009a(Lactobacillus plantarumAKU1009a),在含 0.06%LA的培养基上培养并收集菌体,在含 12%的LA的反应液中反应 108h,每毫升反应液生成40mg的 CLA,CLA的产率为 33%;在含 2.6%的LA的反应液中反应 96h,每毫升反应液生成 20mg的CLA,CLA的产率为 80%。陆永霞等[20]用嗜酸乳杆菌 (Lactobacillus acidophilus)在 MRS培养基中转化LA生成 CLA,反应 pH4.6、温度 37℃、接种量 2.0%、反应时间 24h,当LA的添加量为 0～0.025%时,CLA的产量随之增加,但继续增加 LA浓度时,CLA的产量下降。

3.2.4 发酵条件对转化生成共轭亚油酸的影响 微生物菌株发酵的 pH、温度、时间等条件都会影响细胞内亚油酸异构酶的活性,从而影响其对LA进行转化。曹健等[21]研究表明嗜酸乳杆菌 1.1854 (Lactobacillus acidophilus1.1854)突变株的亚油酸异构酶转化 LA为 CLA的最佳条件为:pH4.0,温度35℃,保温时间 48h,在此条件下,CLA的转化率最高,达 38.1%。董明等[22]以盐生植物紫花苜蓿籽油为底物,用嗜酸乳酸杆菌 1.1854 (Lactobacillus acidophilus1.1854)催化紫花苜蓿籽油中的 LA转化为 CLA,用磷酸钠缓冲液调节发酵培养基的 pH,研究 pH对生产CLA的影响,当pH 6.4时,CLA转化率最高,超过50%。

过低的温度不利于菌种的生长,导致菌体产酶的生化反应不能顺利进行;而过高的温度会加速酶的变性而使该酶失活。董明等[23]以盐生植物紫花苜蓿的种籽油为底物,用植物乳杆菌 6026(Lactobacillus plantarum6026)催化紫花苜蓿籽油中的 LA转化为CLA。在该乳酸菌发酵过程中改变发酵温度,发现CLA转化率会有较明显的变化。在 20℃时,CLA转化率不到 10%;随着温度升高至 37℃,CLA转化率也随之升高到 30%;而当温度继续升高到 50℃,CLA转化率呈下降趋势。分析认为乳杆菌中的亚油酸异构化酶的最适温度在 37℃,所以温度在 37℃时 CLA转化率最大。培养时间对LA的转化也有很大影响,植物乳杆菌培养至 5～10h时为对数生长期,此期间生物量快速增加;约 12h进入稳定期,CLA转化率此时呈高速增长阶段;约 21h时,CLA转化率达到最大,而后 CLA转化率呈下降趋势,可能是由于 CLA不稳定,须进行保护以防止其氧化[24]。

4 共轭亚油酸的提取和纯化

4.1 共轭亚油酸的提取

Rainio[9]对 费 氏 丙 酸 杆 菌 DS M7067 (Propionibacterium freudenreichiiDS M7067)研究发现, 98%的 CLA存在于胞外。赵建新等[25]研究了植物乳杆菌 ZS2058(Lactobacillus plantarumZS2058)转化LA为 CLA的条件,培养 24h后,培养液中的 CLA远大于胞内的含量,说明亚油酸异构酶转化 LA为 CLA后,CLA被分泌到胞外,因此可采用有机溶剂萃取法从发酵液中提取。

胡国庆等[26]研究植物乳杆菌 ZS2058 (Lactobacillus plantarumZS2058)在不同基质中转化生成CLA的情况,采用的 CLA的提取方法为:取发酵液1mL,溶解于2mL的异丙醇,然后添加1.5mL的正己烷,在旋涡震荡器上混匀 3min,6000r/min, 10min离心,吸取上清液,添加 1mL水,6000r/min,离心 5min,吸取上清液,N2吹干。苗士达等[27]研究一株植物乳杆菌LT2-6(Lactobacillus plantarumLT2-6)转化生产 CLA的特性。采用的 CLA的提取方法为:向发酵液中加人 5倍体积的氯仿甲醇混合物 (氯仿 /甲醇 =2∶1,v/v)振荡萃取,收集下层部分,离心,用无水硫酸钠干燥,然后 30℃下蒸发除去溶剂,将残余物移入螺帽小试管中,用氮气吹干。YuraweczM.P等[28]研究 CLA稳定性时发现,CLA在空气中很快氧化分解成呋喃脂肪酸。所以提取 CLA时应防止其氧化。杨得坡等[29]研究共轭亚油酸的抗氧化活性并筛选对其活性有保护作用的抗氧化剂。结果表明: TBHQ、TPP、BHA、BHT和α-硫辛酸对 CLA都有一定保护作用,其中 TBHQ与茶多酚抗氧化性能效果显著,TBHQ的添加量建议采用 0.01%～0.04%。

4.2 共轭亚油酸的纯化

由于提取的CLA产物中还混有一些饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸及一些不可知的皂化物质,如果将其直接应用于食品或饲料中,可能存在安全隐患。所以需要对CLA进行纯化。

4.2.1 利用脂肪酶的特异性进行纯化 利用脂肪酶特异性催化水解、转酯和酯化反应的特性,能把很难分离的共轭亚油酸酯异构体分开。杨丽华等[30]利用假丝酵母脂肪酶两步选择性酯化,最佳反应条件:等摩尔量的月桂醇和含有 2种 CLA异构体 (c9, t11-CLA和 t10,c12-CLA)的游离脂酸,20%水, 20U/g假丝酵母脂肪酶,30℃下反应 16h并伴随搅拌。能提高 c9,t11-CLA异构体的含量到 85.1%。并且采用分子蒸馏装置来分离纯化大量样品,最后得到纯度 92.2%的 c9,t11-CLA。

4.2.2 低温结晶纯化 在干冰浴条件下进行(-58℃),在丙酮溶液中 t10,c12-共轭亚油酸甲酯会沉淀下来,而 c9,t11-共轭亚油酸甲酯仍保留在丙酮溶液中,因此可将两者分开。但是用此法得到的产品的纯度不是很高。

4.2.3 利用尿素进行结晶纯化 在盐酸存在下,由于尿素能与结构线性较好的共轭亚油酸酯加成形成结晶,而线性较差的共轭亚油酸酯仍留在溶液中,故可利用尿素分离共轭亚油酸甲酯混合物。尿素/共轭亚油酸甲酯重量比为 1∶1时,t9,t11-CLA及 c9, c11-CLA形成结晶加成物被除去,而 c9,t11-CLA留在母液中,其纯度提高到 75%;再用尿素进行结晶,可除去大部分 c9,c11-CLA,c9,t11-CLA的纯度可提高到 83%[31]。刘丽等[32]通过条件的优化,得到尿素纯化 CLA的最佳工艺条件:CLA粗品/尿素/甲醇=1∶2.5∶8,温度-15℃,时间 6h,CLA纯度由 70%提高到93.6%。

5 共轭亚油酸的分析和检测

在CLA的分析中所采用的方法主要有紫外吸收光谱法、红外吸收光谱法、薄层层析法、气相色谱法、Ag+高效液相色谱法 (Ag+-HPLC)。

5.1 光谱分析

5.1.1 紫外吸收光谱法 含共轭双键脂肪酸的吸收区在 230～235nm附近,CLA的特征吸收峰在 234nm附近。据朗伯-比尔定律,CLA样品在 234nm处的吸收程度与其浓度呈线性相关。以 CLA标准品建立标准曲线及回归方程,结合样品在 234nm处的吸光度值,可计算得到样品中 CLA各种异构体的总含量,灵敏度为 10-7～10-4g/mL,准确度较好,简便易行。此法能检测 CLA的总量,但不能检测各异构体的含量[33]。

5.1.2 红外吸收光谱法 红外光谱可根据光谱中吸收峰的位置和形状来推断未知物结构,依照特征吸收峰的强度测定各组分的含量,快速、高度灵敏,而且所需检测试样用量较少。CLA在红外区 900～1000cm-1有吸收峰,如顺反共轭在 985、950cm-1处有两个吸收峰,可测出各种异构体的含量,但该法对CLA异构体的分离鉴定比较困难。

5.2 色谱分析

5.2.1 TLC分析法 在提纯共轭脂肪酸时,薄层层析法 (TLC法)常用作实现更进一步分离的有效手段之一。应用涂布有硝酸银的 TLC二氧化硅凝胶盘作固定相[34],流动相可选用甲苯、正己烷与二乙醚混合物、苯与正己烷混合物、苯与二乙醚混合物、苯与石油醚及二乙醚混合物等。虽然这种方法无法使得共轭脂肪酸的几何异构体彻底的分离,但重复操作可得到相对较为集中的同构型共轭双烯酸的几何异构体。

5.2.2 Ag+高效液相色谱法 Ag+高效液相色谱法(Ag+-HPLC)是利用Ag+对 CLA的特异性吸附而将大部分 CLA异构体分开,但该方法无法使 c9,c11异构体与其他 9,11异构体分开[35]。由于工业上生产的 CLA中仅含有 c/t,t/c结构异构体,故可用于 t9, c11及 c9,t11异构体的分离,也可用于半制备 CLA。

5.2.3 气相色谱法 气相色谱法是根据固定相对样品中各组分的不同吸附、溶解能力来进行分离的,优点是高选择性、高灵敏度和高分离效率。气相色谱法(GC)是脂肪酸分析常规的方法,但甲基化会导致CLA异构体组成发生较大的变化,Yamasaki[36]研究发现一种用于共轭亚油酸气谱检测的酯化方法,即在二甲亚砜或二甲基甲酰胺存在下,用硫酸酯化可避免CLA异构体之间的转化。

5 问题与展望

在人类追求健康、渴望长寿的今天,CLA无论是作为保健食品、功能食品,还是将来应用于临床,它的研究都具有重要的意义。天然 CLA主要存在于牛奶、羊奶、牛肉等瘤胃动物来源的食品中,但含量很少。随着人们的需求增加,CLA的大量生产势在必行。而微生物发酵生产 CLA因其具有异构体单一、选择性合成、条件温和、产量大等优势,越来越引起人们的重视,应用前景广阔。筛选高产菌株,提高CLA的产量,研究更好的发酵条件是亟待解决的问题。随着人们对CLA研究的不断深人,相信 CLA作为“21世纪的新型营养素”,必将为人类的健康生活带来福音。

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Study on the production of functional oil---conjugated linoleic acid by m icrobe

LUO Yu-fen,XU Er-n i,W U Xiao-dan
(The KeyLaboratory of Food Science ofMOE,NanchangUniversity,Nanchang 330031,China)

Conjuga ted linole ic ac id was a kind of func tiona l oil,which had m any b iolog ica l func tion such as antica rc inogenic,antia the rogenic,body-we ight reduc ing,g row th p rom oting,as we ll as i mm unity enhanc ing,so it had a w ide fie ld of app lica tion in m ed ic ine,food,hea lth ca re and cosm e tic indus try.The deve lopm ent of CLA by m ic rob ia l conve rs ion conce rning w ith s tra ins,the influences on m ic rob ia l conve rs ion,the extrac tion technique, p urifica tion and de tec tion m e thods of CLA we re reviewed.

conjuga ted linole ic ac id;m ic rob ia l conve rs ion;extrac tion

TS221

A

1002-0306(2010)05-0377-05

2009-04-16

罗玉芬(1985-),女,硕士研究生,研究方向:应用微生物。