APBD致胆管疾病患儿胆管组织中survivin、Ki-67的表达变化及意义

韩新峰

(邯郸市中心医院,河北邯郸 056000)

先天性胆管扩张症(CBD)由Vater在1723年首次报道。国内外报道和研究表明本病有癌变倾向。目前认为胆胰管合流异常(APBD)是CBD的病因[1]。2002～2008年,我们对 37例 APBD所致CBD患儿的肝外胆管黏膜中Ki-67、survivin进行检测,探讨APBD所致CBD患儿胆管癌变机制。

1 资料与方法

1.1 临床资料 37例APBD所致CBD患儿中男11例,女 26例;年龄 4个月 ～16岁,平均 8.7岁。病史5 d～11 a。均行术中胆管造影检查后行手术治疗(行胆总管囊肿切除、胆囊切除、肝总管空肠Roux-en-Y吻合术),其中胆管囊状扩张25例、梭状扩张 12例。全组无死亡病例。

1.2 Ki-67、survivin标记指数(LI)的检算方法 将标本(胆管、胆囊)用10%甲醛固定,石蜡包埋。4～6μm厚连续切片。另取胆肠吻合时正常小肠黏膜为正常对照。所有标本行免疫组织化学 ABC法染色,按试剂盒说明书操作。PBS替代一抗作为阴性对照。细胞核呈黄色或棕褐色为 Ki-67阳性细胞,细胞质内有黄色或棕黄色颗粒者为survivin阳性细胞。采用盲法标记染色良好区域,在 400倍显微镜下任选 10个高倍视野,各计数 100个细胞。Ki-67 LI、survivin LI=阳性细胞/计数细胞×100%。

1.3 统计学方法 采用SPSS12.0统计软件。计量资料用q检验,计数资料用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

CBD患儿胆管黏膜中Ki-67 LI为37.43%± 16.58%、胆囊黏膜中为19.86%±10.49%,均显著高于小肠黏膜的2.85%±1.28%(P＜0.05)。囊状胆管扩张者胆管、胆囊黏膜的 Ki-67 LI分别为45.6%±20.43%、14.17%±6.76%,梭状扩张者分别为21.67%±10.57%、25.8%±12.07%;囊状胆管扩张者胆管黏膜中Ki-67 LI高于梭状扩张者(P＜0.05),胆囊黏膜中Ki-67 LI囊状扩张与梭状扩张者近似(P＞0.05)。

CBD患儿胆管、胆囊、小肠黏膜中survivin LI分别为9.64%±4.13%、7.54%±3.21%、6.29%± 2.36%(P均 ＞0.05)。胆管囊状扩张者胆管、胆囊黏膜的survivin LI分别为9.64%±3.87%、10.41% ±3.56%,梭状扩张者分别为 11.42%±5.48%、6.29%±2.36%(P均＞0.05)。

3 讨论

APBD是指解剖学上胆管和胰管在十二脂肠壁外提前合流,共同通道过长致使胰液和胆汁过早混合而引起的胰酶在压力更低的胆管内被激活,在各种胰酶主要是磷脂酶 A2的作用下造成胆管壁的损伤。胆管损伤包括在形态学上的变化和胆管组织学的变化。形态学表现为胆管形状的变化,胆管扩张。胆管黏膜的反复破坏和修复,在病理学表现为胆管组织的坏死、增生、化生和癌变[2～5]。Ki-67抗原是在增殖细胞中表达的一种核抗原,也是目前较为肯定的核增殖标志性基因,存在于细胞周期中除 G0期以外的所有阶段。它开始表达于细胞周期的G1期,在 S期及G2期表达增加,至 M期达高峰,在分裂晚期很快消失。由于其半衰期短,脱离细胞周期后迅速降解,故已成为目前检测肿瘤细胞增殖活性最可靠的指标[6,7]。本组研究结果显示,CBD患儿的胆管黏膜Ki-67 LI明显高于与正常小肠黏膜,囊状扩张者胆管黏膜中Ki-67 LI明显高于梭状扩张者,提示CBD患儿的胆管黏膜处于高增殖状态,囊状扩张者的胆管黏膜增殖程度更高。说明囊状扩张患者胆管扩张症癌变率高于梭状扩张者,临床上应更加关注 CBD囊性病变患者的早期治疗。

survivin是细胞抑制凋亡蛋白(IAP)家族成员,特异性表达于人和鼠的胚胎抗凋亡蛋白,其基因位于 17p25,蛋白中含有一个杆状病毒抑制凋亡蛋白重复序列BIR分子,该分子的trp67、pro33和cys84残基可与Caspase3和Caspase7结合,直接抑制Caspase活性,在细胞凋亡中起重要作用。survivin在胚胎组织和多种肿瘤组织中呈高表达,具有调节细胞增殖分裂和抗凋亡细胞作用,促进细胞异常增殖和恶性转化[8～10]。本研究结果显示,survivin在CBD患儿胆管、胆囊、小肠黏膜中的表达近似,胆管囊状扩张与梭状扩张者survivin LI亦无显著性差异(P均＞0.05),证实APBD导致患儿肝外胆管组织存在高增殖现象,有明显的癌变倾向。survivin未明显表达可能与本组病例年龄低和病变分化程度有关,本组无癌变病例,所以survivin在各组间表达无显著性差异。本研究结果说明临床治疗APBD导致CBD的原则应为早发现、早治疗和完整切除肝外胆管组织。

[1]Babbit DP.Congenital choledochal cyst：new etiological concept based on anomalous relationships of common bile duct and pancreatic bulb[J].Ann Radiol,1969,12(1)：231-241.

[2]魏明发.小儿胆管扩张症的基础研究[J].临床外科杂志, 2007,15(4)：223-225.

[3]周彦明,杨甲梅.胰胆管合流异常与胆囊癌的关系[J].中国普外基础与临床杂志,2005,12(4)：361-364.

[4]钟明安,赵中辛.成人胰胆管合流异常患者胆囊黏膜病理形态观察[J].肝胆胰外科杂志,2007,19(6)：346-348.

[5]吴高松,吴剑宏,罗先文,等.胰胆管合流异常患者胆汁对人胆管癌细胞生长的影响[J].肝胆外科杂志,2003,11(5),384-387.

[6]李涛,乔占英,康建省,等.增殖核细胞抗原在先天性胆总管囊肿肝外胆道中表达及意义[J].临床荟萃,2008,23(23)：1715-1716.

[7]万云乐,丁伟,郑树森,等.原发性胆囊癌survivin和Ki-67的表达及意义[J].中华实验外科杂志,2006,23(8)：919-922.

[8]巴特尔,宋志春,佟豪,等.Survivin在原发性胆囊癌中的表达和意义[J].内蒙古医学杂志,2008,40(6)647-649.

[9]杨华安,苟欣.Survivin的研究进展[J].实用医学杂志,2008, 24(3)：329-331.

[10]Fukuda S,Pelus LM.Survivin,a cancer targetwith an emerging role in normal adult tissues[J].Mol Cancer Ther,2006,5(5)：1087-1098.