甲状腺乳头状癌组织中基质金属蛋白酶-2表达与微血管密度的关系

底旺 李清怀 张凯丽 严丽

基质金属蛋白酶(MMPs)是一组由结缔组织细胞分泌的，参与细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)降解的Zn2+依赖性的蛋白酶家族。实验证明MMPs与肿瘤的发病及浸润转移密切相关［1］。有研究证实，MMPS的表达水平或活性在恶性肿瘤中增高。MMP-2是MMPs的一员，能降解细胞外基质和基膜的主要成分，在肿瘤的浸润和转移及血管生成过程中起重要作用［2］。甲状腺乳头状癌是颈部常见病。我们通过SP免疫组织化学技术及形态定量分析方法，检测上述两类良恶性肿瘤组织中MMP-2的表达，并在CD34染色切片上检测间质微血管密度(MVD)，分析MMP-2表达与甲状腺肿瘤血管生成的关系。

1 材料与方法

1．1 材料 标本选自河北医科大学第二医院病理科1996至2004年手术切除标本的存档蜡块90例，男52例，女38例;年龄16～70岁。其中甲状腺腺瘤35例，甲状腺乳头状癌55例。

1．2 试剂 鼠抗人MMP-2单克隆抗体(MAB-0244)、鼠抗人CD34单克隆抗体(MAD-0034)及S-P试剂盒均购于迈新生物试剂有限公司。

1．3 方法及结果判定 采用SP免疫组织化学法。实验步骤按说明书进行，用已知阳性片作阳性对照。以PBS缓冲液取代一抗作阴性对照。(1)MMP-2参考标准按镜下阳性细胞所占组织细胞的百分比，观察5个视野(×200)取均值，阳性细胞＜25%为+，25% ～50%为++，＞50%为+++。(2)MVD计数采用Weidner等［3］的方法判断阳性结果，以与背景明显有别的任何一个染成棕色的内皮细胞或细胞群作为一个血管。先在低倍镜下(10×10)寻找肿瘤内血管最高密度区(hot spot)，然后在高倍镜下(10×40)计数5个血管最高密度区的微血管数，取均值代表MVD。

1．4 统计学分析应用SPSS13．0统计软件，计量资料以¯x±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，P ＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 MMP-2测定结果 MMP-2在肿瘤细胞中表达较强，周围间质细胞中表达较弱，在肿瘤细胞与间质交界处及肿瘤浸润的前缘有很强的阳性反应。甲状腺腺瘤组织中MMP-2阳性率为28．6%(10/35)，甲状腺乳头状癌组织中的阳性率为67．3%(37/55)，两者比较差异有统计学意义(P＜0．05)。

2．2 MVD测定结果 CD34在甲状腺肿瘤的血管内皮细胞胞质着色，微血管分布呈异质性，且密集区多位于肿瘤浸润的前缘。甲状腺腺瘤的MVD平均值为(45±3)个/HP，甲状腺乳头状癌为(62±4)个/HP，两者比较差异有统计学意义(P＜0．05)。

2．3 甲状腺肿瘤MMP-2与MVD的关系 90例甲状腺肿瘤组织中MMP-2阳性47例，MVD值(68±4)个/HP;高于 MMP-2阴性43例的值(45±4)个/HP，两者比较，差异有统计学意义(P ＜0．01)。

3 讨论

甲状腺乳头状癌的发病率较低，仅为全部恶性肿瘤的1%，并占全身癌瘤的第25位，病死率仅0．4%，但居全部内分泌及头颈部恶性肿瘤的首位［4］。其侵袭和转移是造成患者死亡的主要原因，而肿瘤细胞发生侵袭转移的关键之一是通过MMPs破坏由细胞间基质及基膜构成的ECM，导致癌细胞可进出周围组织，使肿瘤浸润转移，并可以形成新生血管，从而形成肿瘤转移的通道。ECM尤其是基底膜是阻碍肿瘤转移的关键组织屏障，在浸润和转移过程中，癌细胞与细胞外基质相互作用，溶解ECM，经ECM缺损处向外扩散引起浸润和转移。此过程中MMP-2和微血管生成发挥了重要作用。MMP-2作为MMPs的重要成员之一，主要降解Ⅳ、Ⅴ型胶原及明胶等ECM，促进微血管生成及肿瘤细胞生长［5，6］。MMP-2在癌细胞侵袭和转移中的意义在于MMPs通过破坏基质的降解平衡而促进癌细胞突破基底膜和ECM构成的组织化学屏障，侵袭周围组织;通过促进肿瘤新生血管的形成，进而促进癌细胞转移至远处组织［7，8］。本研究结果显示，甲状腺乳头状癌组织中MMP-2的表达高于甲状腺腺瘤，差异有统计学意义(P＜0．05)，提示甲状腺乳头状癌可能具有较强的分泌MMP-2的能力。由于肿瘤细胞的异质性，MMP-2与CD34在肿瘤组织中的表达也呈现不均一性。本研究中MMP-2阳性组MVD值高于MMP-2阴性组，提示MMP-2可能通过促进肿瘤间质血管生成来加速肿瘤的生长和转移。因此，通过抑制MMP-2活性来控制肿瘤进展有可能成为肿瘤治疗的强有力手段。此外，通过检测MMP-2活性可以为判断肿瘤患者预后提供依据。

1 张彦荣，毕伟，李锰，等．实验性重症急性胰腺炎继发损伤时基质属蛋白酶-9的变化．河北医药，2008，30:278．

2 花少栋，杜江，刘秀青，等．基质金属蛋白酶2和基质蛋白酶9在生兔高氧机械通气肺损伤中的表达．中国全科医学，2008，11:2043．

3 Weidner N，Semple JP，Welch WR，et al．Tumor angiogenesis and metastasis correlation in invasive breast carcinoma．N Eng JMed，1991，324:1-8．

4 李树玲主编．头颈部肿瘤诊断、治疗及预后．第1版．天津:天津科学技术出版社，1983．316-318．

5 Shah FD，Shukla SN，Shah PM，etal．Clinical significance ofmatrixmetalloproteinase 2 and 9 in breast cancer．Indian J Cancer，2009，46:194-202．

6 Jiang Y，Goldberg ID，Shi YE．Complex roles of tissue inhibitors ofmetalloproteinases in cancer．Oncogene，2002，21:2245-2252．

7 周彩云，姚济芬，陈晓瑞．基质金属蛋白酶MMP-2、9及其抑制因子TIMP1、2在子宫颈鳞癌中表达的研究．癌症，2002，21:735-739．

8 王璐，张丽红，李玉林，等．基质金属蛋白酶9及其mRNA在胃癌中的表达与血管新生的关系．中华医学杂志，2003，83:782-786．