Ang-2、Cox-2及 VEGF在食管癌组织中表达的研究

卓 越,李敬岩

(佳木斯大学附属第一医院消化二科,黑龙江 佳木斯 154003)

血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2)和血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor,V EGF)为目前已知的两个作用于血管内皮细胞的血管生成促进因子,在肿瘤的血管生成及发展中起着重要的作用[1]。V EGF是一类作用最强、特异性最高的可溶性血管生成促进因子,与肿瘤的生长、侵袭和转移等特性密切相关。V EGF表达后,通过与血管内皮细胞上的血管内皮生长因子受体结合,刺激内皮细胞分化、增殖、迁移 ,促进血管构建[1]。环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,Cox-2)又称前列腺素过氧化物合成酶-2(PGHS-2),是前列腺素(PGs)合成初始步骤中的关键限速酶,生理情况下无明显表达,当细胞受到相应刺激后便开始合成表达。近期研究表明,Cox-2除了在炎症中发挥重要作用外,还与肿瘤细胞生长、细胞凋亡、细胞运动和肿瘤血管生成等有密切关系[2]。实验应用免疫组化技术检测 Ang-2、Cox-2和 V EGF在食管癌病理组织中的表达,分析其与临床病理学特征的关系。

1 资料与方法

1.1 标本来源

所有标本收集于2008-01～ 2009-06胸外科手术切除的食管癌病理标本52例,患者男43例,女9例。年龄42～ 79岁,平均58岁。标本均经病理学确诊为鳞状细胞癌。其中有淋巴结转移者23例,无淋巴结转移者29例。所有患者送病理检查前均未放疗和化疗,且均为该院病理科存档标本。另取随机胃镜检查组织学相对正常的食管黏膜20例作为正常对照组。

1.2 主要试剂

采用免疫组化方法,兔抗人 Angiopoietin-2多克隆抗体、羊抗人 Cox-2多克隆抗体购于武汉博士德生物技术公司,鼠抗人 VEGF单克隆抗体工作液、S-P免疫组化试剂盒购于中山生物技术公司。

1.3 方法

收集相应病例的存档蜡块,行 4μm厚连续切片,取 1张行HE染色,其余行免疫组化 SABC方法染色。操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。每次实验均以公司提供的阳性片作阳性对照。

1.4 结果判定

以胞浆呈棕黄色为阳性细胞。在光镜下计数10个高倍视野 (×400),平均阳性细胞数≥ 10%判断为阳性病例,＜10%为阴性病例。

1.5 统计学方法

两组间率的比较采用 X2检验,检验水准 α= 0.05,P＜0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 Ang-2Cox-2及 VEGF在食管癌组织及正常组织中的表达

Ang-2阳性着色主要位于肿瘤细胞和部分肿瘤微血管内皮细胞,Cox-2及 VEGF蛋白表达主要在肿瘤细胞的胞质,少部分在胞膜。在食管癌组织和正常对照组中 Ang-2阳性率分别为55.76%(29/52)和5.00%(1/20),两组比较差异有统计学意义 (P＜0.05)。在食管癌组织和正常对照组中Cox-2阳性率分别为 67.31%(35/52)和10.00%(2/20),两组比较差异有统计学意义 (P＜0.05)。在食管癌组织和正常对照组中 V EFG阳性率分别为61.54%(32/52)和0.00%(0/52)两组比较差异有统计学意义 (P＜0.05)。

2.2 Ang-2 Cox-2及 VEFG在食管癌有无淋巴结转移组织中的表达

在有、无淋巴结转移食管癌组织中 Ang-2阳性率分别为82.61%(19/23)、37.04%(10/29),两组比较差异有统计学意义 (P＜0.05)。在有、无淋巴结转移食管癌组织中 Cox-2阳性率分别为 82.61%(19/23)、55.17%(16/29),两组比较差异有统计学意义 (P＜0.05)。在有、无淋巴结转移食管癌组织中 VEGF阳性率分别为 86.96%(20/23)、44、44%(12/29),两组比较差异有统计学意义 (P＜0.05)。

3 讨论

肿瘤性血管是高度不成熟的血管,依赖于肿瘤组织产生的促血管生成因子克服保持血管稳定的因素。Ang-2是分泌性蛋白,由血管内皮细胞产生,与 Tie-2受体结合不能引起后者磷酸化而破坏血管完整性。病理状态下,Ang-2主要表达于肿瘤、炎症、创伤等部位 ,以新生血管网最为丰富。Cox-2在多种肿瘤中有较高表达,促进细胞增殖,抑制凋亡,增加肿瘤细胞侵袭力及促进肿瘤血管生成。V EGF是最直接参与诱导肿瘤血管形成的因子之一,特异地诱导和激活血管内皮细胞的有丝分裂,直接刺激血管生成;又可使微血管通透性增加,导致大分子渗出,为新血管形成提供基质支架。Inueo等研究表明,V EGF蛋白不仅在肿瘤细胞中表达而且在血管内皮细胞中表达[3]。我们实验证实,Ang-2、Cox-2和 V EGF表达量在正常食管黏膜中明显低于癌组织,在癌组织的表达集中于肿瘤浸润前缘,说明食管癌的发生与浸润与 Ang-2、COX-2和 VEGF的高表达密切相关。分析显示 Ang-2、Cox-2和 VEGF表达量与淋巴结转移浸润有关,淋巴结转移组 Ang-2、Cox-2和 V EGF表达量明显高于无淋巴转移组。淋巴结转移和浸润的深度是与食管癌预后明显相关的指标。Tadahiro等发现 Cox-2强表达的食管癌患者预后较弱表达的差,多因素分析中 Cox-2是预后差的独立危险因素[4]。综上所述,Ang-2、Cox-2和 V EGF在食管癌组织中的过表达和肿瘤的血管及淋巴管生成密切相关,参与肿瘤的发生、发展和淋巴转移。

[1]Hardwick JS,YangY,Zhang C,et al.Identification ofbiomark-ers for tumor endothelial cell proliferation through gene expression profiling[J].Mol Cancer Ther,2005,4(3):413-425

[2]王彬,张湘茹,储大同,等.易瑞沙在晚期非小细胞肺癌化疗失败后的作用 [J].中华肿瘤杂志,2004,26(12):742-745

[3]Inueo K,Ozeki Y,Suganuma T,et al.Vascular endothelialg rowth factor expression in primary esophqgeal squamous cellcarcinoma.Association with angiogenesis and tumor progression[J].Cancer,1997,79(2):206-213

[4]Tadahiro N,Takahiro E,Akira K,et al.Significance of immunhisto-chemical expression of cycloox ygenase-2in squamous cell carcinoma of the esophagus[J].Am J Surgery,2005,189(1):110-115