猪附红细胞体病诊断与防控*

拜廷阳,赵德明,吴志明,闫若潜,普志平

(1.中国农业大学动物医学院,北京 100094;2.河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州 450008;3.周口市动物疫病预防控制中心,河南周口 466000)

猪附红细胞体病诊断与防控*

拜廷阳1,3,赵德明1,吴志明2,闫若潜2,普志平3

(1.中国农业大学动物医学院,北京 100094;2.河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州 450008;3.周口市动物疫病预防控制中心,河南周口 466000)

猪附红细胞体病是由猪附红细胞体引起的一种以黄疸和贫血为主要特征的人畜共患传染病。该病流行范围广泛,对养猪业危害严重。根据其16 S RNA序列,现将猪附红细胞体划为支原体属的单个新种。猪附红细胞体主要通过接触被病原污染的血液、胎盘感染、蚊虫叮咬等途径传播。猪附红细胞体对干燥敏感,对低温的抵抗力较强;对青霉素类药物不敏感,但对强力霉素敏感。通过引种时做好种猪的选育、在夏秋季节加强畜舍消灭蚊蝇工作、加强饲养管理以增强猪体抵抗力、采用敏感药物进行早期治疗等相关措施可对该病起到积极预防作用。论文主要对猪附红细胞体的病原学、流行病学、临床症状、病理变化、诊断、预防及治疗等进行了综述。

猪附红细胞体;病原学;流行病学;诊断;防控

附红细胞体病(Eperythrozoonsis,EH)是由附红细胞体(Eperythrozoon)寄生于动物红细胞表面、血浆以及骨髓中而引起的以贫血、黄疸、发热等为主要特征的人畜共患病。1928年Schillig V首先在脾切除鼠中发现了附红细胞体(E.coccoides)[1]。目前报道的感染或发病的动物有人、猪、马、牛、兔、羊 、骡 、驴 、狐 、水貂 、骆驼 、犬 、鸡 、鼠 、猫等 。 动物发生该病后,不仅生产性能下降,而且可引起死亡。猪附红细胞体可引起免疫介导的溶血性贫血,在世界范围内所有日龄的猪均有感染[2],导致产品质量和产量的降低,给养猪业造成了巨大的经济损失[3]。

1 病原学

1.1 分类

附红细胞体的分类国内外尚有争议,以往认为是一种原虫,有人认为应列为支原体,曾归属于支原体目。在1984年版《伯杰细菌鉴定手册》的分类中附红细胞体被列为立克次体目(Rickettsiares)、无形体科(Anaplasmataceae)、血虫体属也称附红细胞体属(Eperythrozoon)。近年来,随着分子生物学技术的不断应用,序列的分析为最终确定病原微生物的分类地位提供了最有利的依据。通过对附红细胞体16 S rRNA基因系统进化分析发现,附红细胞体16SrRNA基因序列与血巴通氏体(Haemobartonellaspp.)有较近的亲源关系,二者的16 S rRNA基因与支原体(Mycoplasma)的亲源性大于与立克次体(Rrickettsiae)的亲源性[4];Neimark H等将附红细胞体和血巴尔通氏体划归为柔膜体纲支原体属(Mycoplasma haemosuis)的同一种中,并正式将附红细胞体重新分类作为支原体属的单个新种(Mycoplasma comb.Nov)。在命名上,统一采用“支原体+种名”来替代以前的名称,如猪附红细胞体(Mycoplasa suis)。这一新的分类和命名方法在2003年以后国际上有关附红细胞体的研究报道中已广泛使用[5]。但有学者建议在搞清附红细胞体的病原遗传学及分子生物学特征前,仍然沿用原来的附红细胞体分类系统[6]。

1.2 分子病原学

迄今为止,大量附红细胞体的16 S rRNA基因组片段序列已经上传到公共数据库中。瑞士苏黎世大学在GenBank上发表了猪嗜血支原体1.8 kb DNA序列,该序列存在11个ORF[7]。其还发表了另外2个基因序列(MSG1和HSPA1)[8]。通过脉冲场凝胶电泳和限制性酶切片段测定了猪附红细胞体基因组全长约为745 kb,限制性酶切片段加起来长度范围为730 kb～770 kb,通过Southern杂交表明,16 S rRNA基因座落在120 kbMluⅠ,128 kbNruⅠ,25 kbSacⅡ和217 kbSalⅠ片段上。

1.3 形态

附红细胞体形态具有多样性,猪附红细胞体的直径为 0.3 μ m ～ 0.8 μ m,最大达 2.5 μ m,有一层膜包被,在胞浆膜下有直径10 nm的微管,有核糖体颗粒,无明显的细胞及核的结构,单独或成链状附着于红细胞体表面,或围绕在整个红细胞上,与红细胞结合紧密,且主要寄生于成熟红细胞膜上[9]。

1.4 致病性和染色特性

附红细胞体可使不同品种、年龄的畜禽和人感染,而且感染率也相当高。国内很多学者分别利用附红细胞体感染小鼠、豚鼠、家兔等动物模型获得成功[10]。在我国部分地区,猪的感染率为49%左右。但附红细胞体进入机体后多呈潜伏状态,发病率较低,只有当机体处于应激状态(如分娩、疲劳和长途运输等)或摘除脾脏时才可能引起发病,所以多数学者认为附红细胞体的毒性低、致病性弱,很可能是一种条件致病微生物。附红细胞体对于苯胺色素易于着色,革兰染色为阴性,用姬姆萨染色呈紫红色,用瑞氏染色呈蓝紫色,丫啶橙染色呈现两种不同的荧光[11]。

1.5 运动性

附红细胞体是寄生于红细胞表面或游离于血浆的病原体,附着于红细胞表面的附红细胞体则较难看出其运动性,而游离于血浆中的附红细胞体可见摇摆扭转翻滚等运动[12-13]。附红细胞体的运动不受红细胞溶解的影响,镜下将1 mL/L盐酸加入鲜血滴中使红细胞破坏,可见其活动力仍不减弱,但当加入1 g/L碘酒,可使其停止运动,这一特性具有鉴别作用[14]。

1.6 抵抗力

猪附红细胞体对干燥敏感,对青霉素类不敏感,而对强力霉素敏感,对低温的抵抗力较强。在冰冻凝固的血液中可存活31 d,在加150 mL/L甘油的血液中于-79℃保存80 d,能保持感染力[15]。

1.7 培养特性

Nonaka N等[16]首次进行了猪附红细胞体的体外培养试验,但红细胞最高感染率只有15.8%,且维持时间很短。吴志明等[17]用RPMI-1640和胎牛血清按比例混合并添加肌苷作为体外培养猪附红细胞体的基础培养基,以无附红细胞体感染的兔红细胞泥作为培养寄生载体,置于体积分数为5%CO2的37℃恒温培养箱进行猪附红细胞体的体外培养,每24 h换培养液1次,每36 h传代 1次,可连续传代40代次以上,并能保持最高感染率90%以上;感染猪附红细胞体的猪红细胞在4℃条件下可保持30 d以上而不发生溶血;兔红细胞接种新鲜制备的自然感染猪附红细胞体的猪红细胞,36 h后感染率可达91.6%,并一直维持到96 h,之后有少量细胞开始出现溶血;接种4℃条件下保存30 d以内自然感染猪附红细胞体的猪红细胞与新鲜制备的自然感染猪附红细胞体的猪红细胞对兔红细胞的感染率影响差异不显著。这些培养方法的建立和完善,对于附红细胞体的生物学特性研究、有效药物的筛选、诊断抗原的制备和有效疫苗的研制将会提供有效的途径。

2 流行病学

2.1 传染源

洪鹤松等[18]报道牛的感染率为80%,猪的感染率为 90%。张守发等[19]报道犬的感染率为91.25%。因此,相当多的动物都可能是潜在的传染源。

2.2 传播途径

传播途径至今还不明确。近期dos Santos A P等[20]证实了一艾滋病人感染嗜血支原体,且与该病人饲养的猫体内分离的嗜血支原体同源,推断猫参与了该病的跨种传播。猪附红细胞体病的传播可通过摄食血液和含血的物质,如舔食断尾的伤口,互相斗殴或喝被血污染的尿而进行直接传播。使用被附红细胞体污染的注射器、针头进行注射时可发生感染,用被污染的手术器具、阉割工具、断尾或打耳号器械、剪毛工具等器具时也可造成该病传播,吸血节肢动物是该病原体的主要传播媒介,啮齿类动物在附红细胞体的传播过程中发挥重要作用[21]。

2.3 发病条件

附红细胞体感染动物后潜伏期短,繁殖快,动物一旦受到附红细胞体的侵袭后会导致急性感染[22]。尤其是受到长途运输、饥饿、疲劳、惊恐、切脾等应激刺激时可导致宿主的抵抗力下降,更易发病而出现明显症状。

3 临床症状

猪附红细胞体病一般情况下发生在哺乳猪、怀孕母猪及受到高度应激的肥育猪。病猪发病突然,体温升高到39.5℃～42.0℃,精神委顿,饮食减退,卧地不起,病猪表现贫血、消瘦;后期病猪耳朵、颈下、胸前、腹下、四肢内侧等部位皮肤发绀,指压不褪色,甚至整个猪皮肤呈红色,成为“红皮猪”。新生仔猪可因过度贫血而死亡;断奶仔猪不能发挥很好的生长性能;育肥猪生长缓慢,出栏延迟;母猪流产、死胎、不发情或发情后屡配不孕。患病育肥猪初期便秘而后腹泻,有的尿呈酱油色,呼吸急促,心音亢进,出现寒颤,抽搐;母猪可携带附红细胞体,出现繁殖障碍。

4 病理变化

病死猪四肢末端、耳尖、鼻盘及腹下皮肤出现紫红色斑块。剖检变化有血液稀薄,呈淡红色,不易凝固;皮下淤血、出血,脂肪黄染,肌肉苍白;有胸水、腹水;胸、腹、心冠沟脂肪黄染;心肌松弛,色熟肉样;肺脏肿胀,小叶性肺炎;肝脏肿大、出血、黄染,呈土黄色质地变脆,胆囊肿胀,充满胆汁;脾脏肿大,呈暗黑色;肾脏肿大,肾盂水肿;膀胱黏膜黄染并有少量出血点;淋巴结肿大,切面外翻。

病理组织学变化有肝实质灶状坏死,有单核细胞和淋巴细胞浸润,有含铁血红素沉着;脾小体中央动脉扩张充血;肾曲小管变性坏死;心肌变性;肺间质水肿;肠黏膜下层水肿充血、炎性细胞浸润[23]。

5 诊断

根据临床症状,如贫血、黄疸、发热以及血常规检查红细胞减少,白细胞增多等特征可作出初步诊断,确诊需结合实验室方法。

5.1 直接镜检

患畜静脉采血,滴1滴于载玻片上,加等量的生理盐水稀释,在400倍显微镜下观察,可见虫体呈球形、逗点形、杆形,红细胞呈菠萝状、星状等不规则形状。健康动物或人的红细胞形态规则。但这种方法的局限性在于低特异性和敏感性[24]。

5.2 染色镜检

无菌自耳静脉或前腔静脉采血涂片,采用姬姆萨染色镜检,附红细胞体感染红细胞呈波浪状,星芒状,锯齿状改变,且周围有染成紫红色的小体;健康红细胞形态规则,边缘光滑,染色均匀。瑞氏染色后,在同一视野中可见附红细胞体呈紫红色、褐黄色、深褐色,也可见到强折光性发亮的圆形小体;吖啶橙染色检查的检出率最高,可见附红细胞体呈浅至深橘黄色[25]。

5.3 PCR诊断

PCR方法对附红细胞体的检测具有敏感性高、特异性强的特点,可以用于附红细胞体急性感染和隐性感染的检测。吴志明等建立了猪附红细胞体的PCR诊断方法,闫若潜等[26]建立了猪附红细胞体荧光定量PCR检测方法,这两种方法非常快速、简便,适合于大规模群体检测。

6 预防

主要通过3个方面预防:①减少传染源。选育无猪附红细胞体病携带的种猪,要定期驱除猪体的内、外寄生虫;②切断传播途径。加强灭鼠、灭蚊蝇工作,减少传播本病的机会;防疫操作及手术时器械要进行严格的灭菌消毒,减少该病的血源性传播;③保护易感动物。改善猪群的饲养管理条件,增强机体的抵抗力,减少不利因素的影响,对仔猪注意通风保温。

7 治疗

对猪附红细胞体的治疗,国内外学者均有报道,疗效不一。目前较常用的药物有贝尼尔、土霉素、黄连素、914A、盐酸咪唑等,上述药物能控制病情,但不能彻底杀灭附红细胞体。对附红细胞体病的治疗应本着早发现、早确诊、早治疗、早用特效药物的原则,不能失去最佳治疗时机,否则,随着时间的拖延,机体脏器衰竭,常引起继发感染,治疗难度加大,造成更大的损失。贝尼尔治疗附红细胞体病效果虽好,但毒副作用较大,因此应用时要注意不能超量。此外,患附红细胞体病的人、畜常伴有并发和继发感染,因此临床上需要酌情给予抗菌消炎、强心输液等对症和支持治疗。

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Diagnosis and control ofEperythrozoonosis Suis

BAI Ting-yang1,3,ZHAO De-ming1,WU Zhi-ming2,YAN Ruo-qian2,PU Zhi-ping3

(1.College of Veterinary Medicine,China Agricultural University,Beijing,100094,China;2.Henan Centre for Animal Diseases Control&Prevention,Zhengzhou,Henan,450008,China;3.Zhoukou City Centre for Animal Diseases Control&Prevention,Zhoukou,Henan,466000,China)

Eperythrozoonosisis a kind of zoonotic disease caused byEperythrozoonosis suis(Mycoplasa suis)with a febrile acute anaemia and jaundice as a main feature,and is frequently-occurring and has the most serious harm to livestock in recent years.Based on the comparative sequence analysis of the 16 S rRNA gene,Eperythrozoonosis suisis now allocated to the genusMycoplasmaand reclassified as a new speciesMycoplasma suiscomb.nov.Mycoplasma suisis infected by the ways of contacting with the contaminated blood,placental infection,and mosquito bites,etc.Mycoplasma suisis sensitive to dryness and doxycycline,but more resistant to low temperature and penicillin.Taking the measures such as selection the breeding pigs free ofMycoplasma suisinfection,eliminating mosquitoes by using mosquitocide in animal house in the summer and autumn,enhancing feeding and management to enhance the resistance of pigs,early treatment with sensitive drugs and other related measures can play a positive prevention of the disease effect.In this paper,the etiology,epidemiology,clinical symptoms,pathological lesions,diagnosis,prevention and cure ofeperythrozoonosis suiswere reviewed.

Eperythrozoon suis;etiology;epidemiology;diagnosis;control

S852.7

B

1007-5038(2010)08-0106-04

2010-06-07

河南省自然科学基金(0511031700)

拜廷阳(1968-),男,河南扶沟人,博士研究生,主要从事预防兽医学研究。