子宫内膜息肉ras基因p21蛋白和p53的表达及意义

高宝辉 祁旦巳 赵志光 谢丽微

子宫内膜息肉ras基因p21蛋白和p53的表达及意义

高宝辉 祁旦巳 赵志光 谢丽微

子宫内膜息肉；p21ras基因；p53

子宫内膜息肉(EMP)是妇科常见疾病，是引起不规则阴道出血的重要原因，可导致不孕，甚至癌变，其发病机制尚不清楚。现普遍认为EMP是一种不能与正常子宫内膜同步增生、分化和脱落的失调性肿瘤。ras基因是一种促进细胞增殖的原癌基因，其家族三个成员具有相似的结构，其编码的产物为相对分子量21000的蛋白质，故称为p21蛋白。p21ras基因蛋白的检测可以反映肿瘤细胞的生长活性，目前ras已成为卵巢肿瘤发病机制研究的热点，但有关子宫内膜息肉组织中p21ras的检测及临床意义尚未见到报道，为此，我们检测了35例EMP和31例EMP伴腺体不典型增生的组织中p21ras的表达，同时所有病例检测p53，以探讨EMP形成原因，并探讨EMP与子宫内膜息肉腺体不典型增生之间的关系。

1 材料和方法

1.1 材料 收集本院2006年1月～2009年6月经病理确诊的存档EMP石蜡标本35例，平均年龄43.7岁，均为增生期EMP；子宫内膜息肉伴腺体不典型增生的石蜡标本31例，平均年龄45.2岁；对照组30例，取自异常子宫出血行宫腔镜检查并诊刮者，经病理证实为正常增生期子宫内膜。所有病人就诊前3个月均无性激素用药史。未选绝经后病例。

1.2 方法 标本用10%福尔马林固定，石蜡包埋后，连续切片，厚度4～5um，贴于涂有多聚赖氨酸的载玻片上，常规烘片脱蜡，梯度酒精到蒸馏水化，切片作免疫组化微波修复S-P法检测。鼠抗人p53单克隆抗体和p21ras抗体为DaKo公司产品，SP试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司，设阳性和阴性对照，DAB显色。

1.3 结果判断 采用两人双盲法观察切片，用半定量积分方法判断结果，p21ras阳性标准是在细胞质包括核膜特异性出现片状或颗粒状棕黄色着色者为阳性细胞，p53蛋白定位于细胞核，为棕黄色颗粒。阳性细胞≤5%为0分，6%～25%为1分(+)，26%～50%为2分(++)，50%以上为3分(+++)。

1.4 统计学处理 数据采用x2检验。

2 结果

p21ras的表达：30例增生期子宫内膜仅一例弱阳性表达(1/30)；35例EMP中阴性24例，弱阳性5例，阳性6例，阳性表达率为31.42%(11/35)；EMP伴腺体不典型增生31例中，阴性15例，弱阳性6例，阳性10例，阳性表达率为51.61%(16/31)。

p53的表达：30例增生期子宫内膜阴性28例，弱阳性2例，表达率为6.66%(2/30)；35例EMP中阴性23例，弱阳性7例，阳性5例，表达率为34.28%(12/35)；EMP伴腺体不典型增生31例中，阴性14例，弱阳性8例，阳性9例，表达率为54.83%(17/31)。

表1 子宫内膜组织中p21ras和p53的表达

3 讨论

子宫内膜息肉(EMP)是妇科常见病，在青春期后的任何年龄均可发生，临床可表现阴道不规则出血，经量增多，不孕，3%的病人可发生癌变[1]。EMP表现为子宫内膜基底层腺体和间质出现局限性增生，息肉中间质纤维化甚至胶原化，间质中含有成熟的厚壁血管，腺体可呈囊性扩张、扭曲，腺上皮可伴有增生、不典型增生、甚至癌变。

关于雌、孕激素受体与EMP的关系已见到较多报道，普遍认为长期持续的雌激素刺激是EMP发病原因之一，但近年来有学者提出细胞的增殖与EMP关系密切，现普遍认为K-ras突变是子宫内膜新生物发生发展的早期阶段的事件。本研究结果表明，p21ras染色的阳性率和强度都是随着子宫内膜病变的严重程度的增加而增加，即按照正常增生期内膜、子宫内膜息肉、子宫内膜息肉伴腺体不典型增生这个顺序，阳性率逐渐增加，表明在子宫内膜息肉病变中，ras基因已有表达，其作为一种促进细胞增殖的原癌基因，可能提示癌变可能始于内膜息肉，其在子宫内膜癌的早期发现可能有积极意义。

ras基因点突变是人类肿瘤最常见的基因异常，Yaginuma等[2]发现p21ras在良性、交界性、恶性浆液性肿瘤过度表达的比例分别是0%、16%、50%，之后伴随有p53的出现，p21ras和p53的表达之间呈稳定的正相关关系，说明p21ras的过表达是肿瘤恶变的早期基因改变，这跟我们的结果也比较相近。

p53蛋白是重要的细胞生长负调节因子，p53基因突变导致对细胞周期的调节功能丧失，使细胞异常增殖。p53基因也是重要的抑癌基因，p53蛋白作为转录因子，通过阻止细胞复制和发动细胞凋亡保持基因组的稳定性，维持细胞正常生长，抑制细胞恶性增殖，对生长起负调节作用，若该基因由于突变、丢失或重排而失活，细胞可能发生恶性转变，其突变与失活在肿瘤生长与浸润过程中具有重要作用。抑癌基因p53的突变是人类多种恶性肿瘤中较为普遍的遗传现象，它的失活表现为突变型p53的过度表达。突变型p53蛋白不仅失去了正常的抑癌作用，而且具有促进正常细胞恶性转化的作用。

Long等[3]应用免疫组化方法检测子宫内膜癌ras基因表达产物p21蛋白的改变，结果增生期内膜、腺囊型增生的子宫内膜均无ras癌基因表达，4例不典型增生者有2例表达，11例Ⅰ级内膜癌中有6例表达，22例Ⅱ～Ⅲ级内膜癌中21例(95%)ras癌基因表达阳性。

我们的研究表明，在子宫内膜息肉中即有ras癌基因p21蛋白的表达，在EMP伴腺体不典型增生的病变中表达更为明显，提示ras癌基因蛋白可能为子宫内膜癌变的早期事件，提示子宫内膜息肉可能已经为子宫内膜癌变提供了一个有利于癌变的组织微环境，提示癌变可能开始于内膜息肉，其对子宫内膜癌的早期发现可能有积极意义。

[1]Schaumberg D A,Snow K K,Dana M R.The epidemic of aeanthamoeba keratit is where do we sdand[J].Cornea,1998,17(3):169-171.

[2]Yaginuma Y,Yamashita K,Kuzumaki N,et al.Ras oncogene produet p21 expression and prognosis of human ovarian tumors[J].Gyneeol Oncol,1992,46(1):45-50.

[3]long CA,Timothy J,Bnien O,et al.Ras oneogene in expression in adnocarcinoma of endometrium[J].Am J OBSTEL Gyneeol,1988,159:1512.

10.3969/j.issn.1009-4393.2010.13.020

温州市科技局科研基金资助项目(No Y2007A0075)

325027 温州医学院附属二院病理科 (高宝辉 祁旦巳赵志光 谢丽微)