两种大孔树脂对舒胸片中6种有效成分动态吸附性能的研究

钟露苗， 夏新华

(1.湖南省药品审评认证与不良反应监测中心，湖南 长沙 410013;2.湖南中医药大学，湖南 长沙410013)

舒胸片为《中国药典》2005版一部收载的品种［1］，由三七、红花和川芎三味药组成。具有活血化瘀，通络止痛之功效。用于瘀血阻滞所致的胸痹，症见胸闷、心前区刺痛及冠心病心绞痛见上述证候者。其制法为红花、川芎水提干膏、三七粉碎细粉制成的糖衣片，日服剂量达15片。为探讨该复方有效成分富集纯化的方法，作者采用大孔树脂吸附技术，选择LSA-30、HPD-100二种树脂，在静态吸附-脱吸附实验研究的基础上，对方中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、羟基红花黄色素A、阿魏酸和川芎嗪六种有效成分进行了动态吸附性能的系统研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器 shimadzu LC-10Atvp型高效液相色谱仪;shimadzu SPD-10Avp型紫外检测器;N3000色谱工作站;AY120 SHIMADZU分析天平。玻璃层析柱(内径1.5 cm)。

1.2 试药与材料 人参皂苷Rg1(批号:110703-200322，供含测用)、人参皂苷Rb1(批号:110704-200318，供含测用)、三七皂苷R1(批号:110745-200312)、川芎嗪(批号:110817-200305，供含量测定用)、阿魏酸(批号:07733-9910，供含量测定用)、羟基红花黄色素A对照品(批号:111637-200502，供含量测定用)，均由中国药品生物制品检定所提供。

乙腈为色谱纯(Caledon Laboratories LTD.)，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

三七经鉴定为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根及根茎;川芎经鉴定为为伞形科植物川芎Ligugsticum chuanxiong Hort.的干燥根茎;红花经鉴定为菊科植物红花Carthamus tinctorius L.的干燥花。均由湖南三湘中药饮片有限公司提供。

LSA-30型大孔吸附树脂，由西安蓝深交换吸附材料有限责任公司提供;HPD-100型大孔吸附树脂由沧州宝恩化工有限公司提供。

2 实验方法与结果

2.1 舒胸片提取液的制备 按2005版《中国药典》舒胸片处方各药味比例，取三七细粉，加50%乙醇浸泡2.5 h，回流提取2次，加醇量分别为药材的8倍、6倍量，提取时间分别为2.5 h、2.0 h，收集醇提液，回收乙醇，备用;取川芎，加10倍量水煎煮2 h，滤过，滤液另存，药渣与红花加8倍量水煎煮二次，每次1 h，合并三次煎液，60℃减压浓缩至每1 mL含1 g生药，在搅拌下缓缓加入乙醇使含醇量达70%，静置24 h，滤过，滤液回收乙醇，与上述醇提浓缩液合并，视实验需要于60℃减压浓缩至适当浓度，滤过，即得。

2.2 上柱药液浓度对动态吸附的影响

2.2.1 不同浓度药液动态吸附实验 分别精密量取生药浓度为0.3 g/mL的药液200mL、0.4 g/mL的药液150 mL、0.5 g/mL的药液120 mL、0.6 g/mL的药液100 mL，调 pH为5.0，以2 BV/h的流速分别通过装有4 g LSA-30、HPD-100湿树脂的玻璃柱，并用水洗去附着的药液，收集各浓度下的全部流出液，分别用HPLC法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、川芎嗪、阿魏酸及羟基红花黄色素A的含量［2-4］，同时测定原液(未经吸附的舒胸片提取液)中上述各有效成分的含量，按下式计算各成分在LSA-30、HPD-100两种树上的比吸附量(A)。

式中:A为树脂比吸附量(mg/g)，M1为起始浓度(mg/mL)，M2为流出液与水洗液混合后的剩余浓度(mg/mL)，V1为上柱药液总体积(mL)，V2为流出液与水洗液的体积之和(mL)，W为干树脂重量(g)。

2.2.2 实验结果与分析

2.2.2.1 浓度对三七皂苷R1的动态吸附的影响 结果见表1。

表1 不同浓度药液中三七皂苷R1在树脂上的吸附情况(n=2)

由表1可见，在生药浓度为0.3～0.6 g/mL范围内，LSA-30树脂对三七皂苷R1的比吸附量随浓度增加总体呈增加趋势，其中浓度为0.4 g/mL时有最大比吸附量;HPD-100树脂对三七皂苷R1的比吸附量随浓度增加未见明显的变化。另外，LSA-30树脂对三七皂苷R1的动态比吸附量明显大于HPD-100树脂，配对t-检验表明二者的比吸附量存在显著性差异(t=5.770 3，P＜0.05)。

2.2.2.2 浓度对人参皂苷Rg1的动态吸附的影响 结果见表2。

表2 不同浓度药液中人参皂苷Rg1在树脂上的吸附情况(n=2)

由表2可见，在生药浓度为0.3～0.6 g/mL范围内，LSA-30树脂对人参皂苷Rg1的比吸附量随浓度的变化情况与上述三七皂苷R1相似;HPD-100树脂对三七皂苷R1的比吸附量随浓度增加呈增加的趋势，浓度为0.4 g/mL时，吸附已接近饱和。另外，LSA-30树脂对人参皂苷Rg1的动态比吸附量也明显大于HPD-100树脂，配对t-检验表明二者的比吸附量存在显著性差异(t=13.831 8，P＜0.01)。

2.2.2.3 浓度对人参皂苷Rb1的动态吸附的影响 结果见表3。

由表3可见，在生药浓度为0.3～0.6 g/mL范围内，LSA-30树脂对人参皂苷Rb1的比吸附量随浓度的增加呈先增加后下降的趋势，与上述二种皂苷一样，浓度为0.4 g/mL时有最大比吸附量;HPD-100树脂对人参皂苷Rb1的比吸附量随浓度增加未见明显变化。另外，与上述二种皂苷不同，除浓度为0.4 g/mL外，LSA-30树脂在其它浓度下对人参皂苷Rb1的动态比吸附量低于HPD-100树脂，配对t-检验表明二者的比吸附量存在显著性差异(t=-5.117 0，P＜0.05)。

表3 不同浓度药液中人参皂苷Rb1在树脂上的吸附情况(n=2)

2.2.2.4 浓度对羟基红花黄色素A动态吸附的影响 结果见表4。

表4 不同浓度药液中羟基红花黄色素A在树脂上的吸附情况(n=2)

由表4可见，在生药浓度为0.3～0.6 g/mL范围内，LSA-30与HPD-100二种树脂对羟基红花黄色素A的比吸附量随浓度的变化趋势相似，均呈波浪形变化，浓度为0.4 g/mL时有最大比吸附量，浓度为0.5 g/mL时有最小比吸附量。另外，LSA-30树脂对羟基红花黄色素A的动态比吸附量高于HPD-100树脂，配对t-检验表明二者的比吸附量存在显著性差异(t=4.310 1，P ＜0.05)。

2.2.2.5 浓度对阿魏酸动态吸附的影响 结果见表5。

表5 不同浓度药液中阿魏酸在树脂上的吸附情况(n=2)

由表5可见，在生药浓度为0.3～0.6 g/mL范围内，LSA-30、HPD-100树脂对阿魏酸的比吸附量随浓度的变化情况与上述人参皂苷Rg1相似。LSA-30树脂对阿魏酸的动态比吸附量也明显大于HPD-100树脂，配对t-检验表明二者的比吸附量存在显著性差异(t=4.244 4，P＜0.05)。

2.2.2.6 浓度对川芎嗪动态吸附的影响 结果见表6。

由表6可见，在生药浓度为0.3～0.6 g/mL范围内，LSA-30、HPD-100树脂对川芎嗪的比吸附量随浓度的变化情况亦与上述人参皂苷Rg1相似。LSA-30树脂对阿魏酸的动态比吸附量也明显大于HPD-100树脂，配对t-检验表明二者的比吸附量存在显著性差异(t=11.918 6，P＜0.01)。

表6 不同浓度药液中川芎嗪在树脂上的吸附情况(n=2)

2.3 上柱药液pH值对动态吸附的影响

2.3.1 不同pH药液动态吸附实验 量取生药浓度为0.4 g/mL的药液150 mL和生药浓度为0.6 g/mL的药液100 mL，各4 份，分别调 pH 为4.0，5.0，6.0，7.0，以2 BV/h 的流速分别通过装有4 g LSA-30和4 g HPD-100湿树脂的玻璃柱，以下操作同2.1项下方法。

2.3.2 实验结果与分析

2.3.2.1 pH对三七皂苷R1在树脂上吸附的影响 结果见表7。

表7 不同pH药液中三七皂苷R1在树脂上的吸附情况(n=2)

由表7可见，药液pH5时，三七皂苷R1在LSA-30、HPD-100两种树脂上均具有最大的比吸附量，但LSA-30明显高于HPD-100;而在pH7时，均具有最小的比吸附量。另外，pH对三七皂苷R1在两种树脂上的比吸附量的影响程度有明显的差异。

2.3.2.2 pH对人参皂苷Rg1在树脂上吸附的影响 结果见表8。

表8 不同pH药液中人参皂苷Rg1在树脂上的吸附情况(n=2)

由表8可见，pH改变，对人参皂苷Rg1在LSA-30、HPD-100两种树脂上的比吸附量有一定程度的影响，对LSA-30树脂，以pH5为佳;而对于HPD-100树脂，以pH5～6为佳。两种树脂相比，在pH4～7范围内，LSA-30均明显优于HPD-100。

2.3.2.3 pH对人参皂苷Rb1在树脂上吸附的影响 结果见表9。

表9 不同pH药液中人参皂苷Rb1在树脂上的吸附情况(n=2)

由表9可见，pH改变，对人参皂苷Rb1在LSA-30、HPD-100两种树脂上的比吸附量的影响趋势不同，在pH4～7范围内，人参皂苷Rg1的比吸附量在两种树脂上呈现相反的变化趋势，对 LSA-30树脂，以 pH5为佳;而对于 HPD-100树脂，以pH7为佳。

2.3.2.4 pH对羟基红花黄色素A在树脂上吸附的影响结果见表10。

表10 不同pH药液中羟基红花黄色素A在树脂上的吸附情况(n=2)

由表10可见，pH改变，对羟基红花黄色素A在LSA-30、HPD-100两种树脂上的比吸附量的影响趋势不同，在pH4～7范围内，对LSA-30树脂，羟基红花黄色素A的比吸附量呈先上升后下降走势，pH以5为佳;而对于HPD-100树脂，羟基红花黄色素A的比吸附量呈逐步下降的趋势，pH以4为佳。两种树脂相比，在pH5～7范围内，LSA-30明显优于HPD-100。

2.3.2.5 pH对阿魏酸在树脂上吸附的影响 结果见表11。

表11 不同pH药液中阿魏酸在树脂上的吸附情况(n=2)

由表11可见，pH改变，对阿魏酸在LSA-30、HPD-100两种树脂上的比吸附量的影响非常大，阿魏酸的比吸附量均是随pH的增加而下降。对LSA-30树脂，从pH4→5，阿魏酸的比吸附量稍有下降，而pH6～7时，比吸附量急居下降，几乎达到不吸附的程度;而对于HPD-100树脂，从pH4→5时，阿魏酸的比吸附量即出现明显下降，pH6～7时与LSA-30树脂相似。两种树脂对阿魏酸的比吸附量，均以pH4为佳。

2.3.2.6 pH对川芎嗪在树脂上吸附的影响 结果见表12。

表12 不同pH药液中川芎嗪在树脂上的吸附情况(n=2)

由表12可见，pH改变，对川芎嗪在LSA-30、HPD-100两种树脂上的比吸附量的影响趋势不同，在pH4～7范围内，对LSA-30树脂，川芎嗪的比吸附量呈先上升后趋于稳定的走势，pH以5为佳;而对于HPD-100树脂，川芎嗪的比吸附量在pH5时出现明显下降，而在其它pH时，比吸附量较为接近。两种树脂相比，除pH5外，LSA-30与HPD-100在各pH处的比吸附量相近。

3 小结与讨论

3.1 上柱药液生药浓度为0.3～0.6 g/mL范围内，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、羟基红花黄色素A、阿魏酸和川芎嗪六种有效成分在LSA-30树脂上的动态比吸附量一般均大于HPD-100树脂。其中生药浓度为0.4 g/mL时，各成分在LSA-30树脂上均有较佳的比吸附量;其中生药浓度为0.6 g/mL时，各成分在HPD-100树脂上均有较佳的比吸附量。

3.2 不同成分在同一树脂上的比吸附量随pH变化趋势视树脂种类不同差异有大有小。对于LSA-30树脂，除阿魏酸外，其它5种成分比吸附量随pH变化趋势较为相似，且均以pH5时为最佳，阿魏酸在此pH亦可获得较好的比吸附量;而对于HPD-100树脂，6种成分的比吸附量随pH变化趋势差异较大，但pH4时各成分均可获得较佳的比吸附量。

3.3 结构类型相同的成分，pH对其在树脂上的吸附性能影响不一定相同。如三七所含3种皂苷在LSA-30、HPD-100二种树脂上的比吸附量随pH的变化趋势亦有程度不等的差异。对于有机弱酸类(如阿魏酸)、黄酮类(如羟基红花黄色素A)，pH增加，可明显降低其在非极性树脂上的吸附性能，该现象可能与其解离后极性增加或使氢键破坏有关;对生物碱类成分(如川芎嗪)，pH增加，其在非极性树脂上的吸附性能稍有增加，该现象可能与其游离程度增加，极性降低有关。因此，用大孔树脂分离纯化复方提取液中多种不同结构类型的有效成分时，考察药液pH对各类成分比吸附量的影响十分必要，它将有助于寻找到对于大多数有效成分均具有较佳吸附性能的最适pH。

3.4 动态吸附实验与实际生产条件较为接近，它的研究结果对于合理选择大孔树脂的吸附工艺条件用于复方多组分的分离纯化具有一定的指导价值。

［1］中国药典［S］.一部.2005:636.

［2］何 丽，夏新华.川芎提取液中川芎嗪与阿魏酸在HPHPD-100型大孔树脂上吸附-脱吸附动力学研究［J］.湖南中医药大学学报，2007，27(3):29-30.

［3］杨红艳，夏新华.RP-HPLC测定脑得生片中4种皂苷的含量［J］. 亚太传统医药，2008，4(5):38-40.

［4］夏新华，吴 卫.均匀设计法优选红花提取工艺［J］.中药材，2006，29(11):1251-1253.