高效液相色谱法测定栀子柏皮颗粒中栀子苷含量

陶腊梅 承 伟

[摘要] 目的 采用高效液相色谱法测定栀子柏皮颗粒中栀子苷的含量。方法 色谱柱为KromasilC18柱(150×4.6 mm,5μm),流动相为:乙腈∶水(14∶86),流速:1.0 ml·min-1,检测波长为238 nm。结果 加样回收率为96.28%;RSD为1.21%。栀子苷在0.30～0.27μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9993),结论 采用高效液相色谱法测定栀子柏皮颗粒中栀子苷的含量,结果准确,重现性好。

[关键词] 栀子柏皮颗粒;栀子苷;高效液相色谱法;含量

[中图分类号] R284.1[文献标识码] B[文章编号] 1004-8650(2009)12-031-01

栀子柏皮颗粒方源自张仲景的《伤寒论》,是以栀子、黄柏、炙甘草3味中药经适当加工而成的中药制剂,用于治疗湿热发黄、热重于湿之阳黄症[1]。有关文献报道栀子苷的含量测定方法有薄层色谱—紫外分光光度法[2], 薄层色谱扫描法[3～5], 高效液相色谱法[6]等。本文采用高效液相色谱法测定其主药栀子中的栀子苷含量。本方法简便易行,结果准确可靠,可用于栀子柏皮颗粒的质量控制。

1仪器与试药

1.1仪器

FL2200液相色谱仪(浙江温岭福立分析仪器有限公司),BS223S型电子天平(北京赛多利斯系统有限公司)。

1.2试药

栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所);乙腈为色谱纯,其他试剂为分析纯;栀子柏皮颗粒(自制)。

2试验方法

2.1色谱条件

KromasilC18柱(150×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈∶水(14∶86),流速为1.0 ml·min-1,检测波长为238 nm。

2.2对照品溶液的制备

精密称取栀子苷对照品5.0 mg,置50 ml量瓶中,加95%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀得对照品储备液。精密量取对照品储备液1.5 ml,置10 ml量瓶中,加95%乙醇溶解并稀释至刻度、摇匀,得对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备

取栀子柏皮颗粒约1.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加95%乙醇25 ml,精密称定,超声处理20 min,放冷,以95%乙醇补足损失的量,滤过,精密量取续滤液1 ml,置25 ml量瓶中,加95%乙醇稀释至刻度、摇匀,即得供试品溶液。

2.4标准曲线的制备

在上述色谱条件下,分别吸取对照品溶液2、6、10、14、18 μl进样,记录峰面积。以栀子苷进样量(X)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标,回归得标准曲线:Y=2.0×106X-20438(r=0.9993)。结果表明:栀子苷在0.03～0.27 μg范围内,进样量与其峰面积成良好线性关系。

2.5精密度试验

取对照品溶液(浓度为15.24 μg/ml),连续进样6次,每次10 μl,记录色谱图,计算峰面积的相对标准偏差,RSD为0.31%,说明方法精密度良好。

2.6重复性试验

取同一批号样品,按照样品测定法重复测定6次,计算RSD为0.80%。

2.7稳定性试验

取供试品溶液一份,室温下放置,分别于0、2、4、8、12、24 h,精密吸取10 μl注入液相色谱仪,测定,计算RSD为0.81%,表明样品溶液在24 h内稳定。

2.8专属性试验

取栀子的阴性样品,按供试品制备方法制备。在上述色谱条件下,分别吸取阴性供试品、对照品、供试品及空白溶剂10 μl进样,记录色谱图,结果表明,其他成分对栀子苷的测定无干扰。

2.9加样回收率试验

采用加样回收率法,分别取已知含量的样品(含量26.54 mg/g)约0.5 g(n=9),精密称定,分别加入栀子苷对照品溶液(1.10 mg/ml)10 ml、12 ml和14 ml,加95%乙醇稀释至约25 ml,照“供试品溶液的制备”项下同法操作,得回收率试验溶液,精密吸取10 μl注入液相色谱仪,记录色谱图,计算回收率。平均回收率为96.28%,RSD为1.21%。

3样品含量测定

分别取本品3批各1.0 g,精密称定,按供试品项下制备方法制备供试液,精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,以外标法计算样品中栀子苷的含量。结果见下表。

4讨论

本文采用高效液相色谱法测定栀子柏皮颗粒中栀子苷的含量,方法简单,操作方便,重现性好,可以作为栀子柏皮颗粒质量标准中的含量测定方法。

参考文献:

[1] 苗润田.伤寒论教程[M].北京:科学出版社,2000:167.

[2] 许良,王青虎,特木尔巴根.薄层—紫外法测定如达六散中栀子甙含量[J].时珍国医国药,1999,10(9):662.

[3] 方肇年,熊义涛,叶小川,等.薄层扫描法测定石淋止痛剂中栀子甙的含量[J].中国中医药科技,1997,4(4):227.

[4] 梁生旺,张广强,李永军,等.薄层扫描法测定清肝利胆注射液中4种有效成分的含量[J].药物分析杂志,1995,15(1):24.

[5] 郜迎晨.用薄层扫描法测定清热解毒注射液中栀子甙[J].中国药业,1999,8(9):27.

[6] 徐以亮,李松.高效液相色谱法测定栀子浓缩颗粒中栀子苷含量[J].时珍国医国药,2000,11(10):881-882.

(收稿日期2009-11-04)