余甘子斑点病病原菌鉴定、生物学特性及防治药剂筛选

摘要：【目的】明确余甘子果实斑点病的病原菌种类，了解其生物学特性，筛选有效的防治药剂，为余甘子果实斑点病的科学诊断和田间防治提供理论依据。【方法】从广东省汕尾市陆河县余甘子产业园种植基地采集发生斑点病的余甘子果实，采用组织分离法对余甘子斑点病病果进行病原菌分离，通过形态学特征和基于多基因（ITS、TUB和EFl-α）的系统发育进化分析对病原菌进行鉴定；采用针刺接种法测定病原菌菌株的致病力；采用菌丝生长速率法测定不同培养条件对病原菌菌丝生长的影响；通过室内毒力测定评估12种常见杀菌剂对病原菌的抑菌活性。【结果】从余甘子病果中分离出1株病原真菌菌株PE3，致病性测定结果表明，该菌株为余甘子斑点病致病菌，其形态特征与间座壳菌Diaporthe phoemicicola相似，且其ITS、TUB和EFI-a基因系统发育进化树分析显示与D.phoenicicola聚在同一分支。生物学特性测定结果显示，菌株PE3菌丝生长的最适温度为25℃，最适pH为7，最适生长碳源为甘油和蔗糖，最适生长氮源为酵母提取物。室内毒力测定结果显示，450 g/L咪鲜胺乳油对菌株PE3菌丝生长的抑制作用最强，抑制中浓度（EC50）为0.019 mg/L;其次是8%氟硅唑微乳剂、10%苯醚甲环唑微乳剂和25%吡唑醚菌酯悬浮剂，EC50分别为0.023、0.124和0.194 mg/L;而2%春雷霉素水剂对菌株PE3菌丝生长的抑制效果最差，EC50为402.336 mg/L。【结论]间座壳菌D.phoenicicola是引起余甘子果实斑点病的病原菌，450 g/L咪鲜胺乳油、8%氟硅唑微乳剂、10%苯醚甲环唑微乳剂和25%吡唑醚菌酯悬浮剂能有效防治余甘子果实斑点病，可在余甘子种植中推广应用。

关键词：余甘子；果实斑点病；间座壳菌；生物学特性；毒力测定

中图分类号：S436.67文献标志码：A文章编号：2095-1191（2024）02-0479-10

Identification，biological characteristics and screening of fungi-cides for Phyllanthus emblica L.spot disease pathogen

LAI Duo'，WANG De-lin'，ZHOU Guo-chang²，SHAO Xue-hua'，QIN Jian'，

ZHUANG Qing-li'，CAI Shi-ke³⁴，XIAO Wei-qiang'*

（'Institute of Fruit Tree Research，GuangdongAcademy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of South Subtropical Fruit Biology and Genetic Resource Utilization，Ministry of Agriculture and Rural Affairs/Guangdong Provincial Key Laboratory ofTropical and SubtropicalFruit Tree Research，Guangzhou，Guangdong 510640，China;²Shanwei Academy of Agricultural Sciences，Shanwei，Guangdong 516699，China;'Crops Research Institute，Guangdong Academy of Agricultural Sciences，Guangzhou，Guangdong 510640，China）

Abstract：[Objective]The purpose of the study was to identify the pathogen species of Phyllanthus emblica L.fruit spot disease，to understand its biological characteristics，to screen the effective fungicides，and to provide theoretical ba-sis for the scientific diagnosis and field control of Pemblica fruit spot disease.【Method】The Pemblica fruits with spot disease were collected from the planting base of Pemblica industrial park in Luhe County of Shanwei city，Guangdong Province.Tissue separation method was used to isolate pathogens from Pemblica fruits with spot disease.The pathogens were identified by morphological characteristics and phylogenetic evolutionary analysis based on multiple genes（ITS，TUB and EFl-α）.The pathogenicity of the pathogen strains was determined using the pin-prick inoculation method.The effects of different culture conditions on the mycelial growth of pathogens were determinedbased on the mycelium growth rate method，and the inhibition activities of 12 common fungicides against the pathogen were evaluated by indoor viru-lence assay.【Result】A pathogenic fungus strain PE3 was isolated from the diseased fruit of Pemblica.The pathogenicity test results showed that this strain was the pathogen causing the spot disease of Pemblica.Its morphological characteris-tics were similar to those of Diaporthe phoenicicola.Phylogenetic tree analysis of its ITS，TUBand EFI-a genes showed that it was clustered in the same branch with D.phoenicicola.The results of biological characteristics measurements showed that the optimum temperature for mycelial growth of strain PE3 was 25℃，the optimum pH was 7，the optimum carbon sources for growth were glycerin and sucrose，and the optimum nitrogen source for growth was yeast extract.The results of indoor virulence assay showed that 450 g/L prochloraz emulsifiable concentrate had the strongest inhibition ef fect on mycelial growth of strain PE3，with median inhibitory concentration（ECso）of 0.019 mg/L.It was followed by 8%flusilazole microemulsion，10%difenoconazole microemulsion and 25%pyraclostrobin suspension with ECso of 0.023，0.124 and 0.194 mg/L，respectively.However，2%kasugamycin aqueous solution had the worst inhibition effect on mycelial growth，with ECso of 402.336 mg/L.【Conclusion】D.phoenicicola is the pathogen causing the fruit spot di sease in P.emblica.The 450 g/L prochloraz emulsifable concentrate，8%flusilazole microemulsion，10%difenoconazole microemulsion and 25%pyraclostrobin suspension can effectively prevent and control the fruit spot disease of Pemblica which can bepromoted and applied in Pemblica planting

Key words：PhyllanthusemblicaL.;fruit spot disease;Diaporthe phoenicicola;biological characteristics;viru-lence assay

Foundation items：Guangdong Key Research and Development Project（2019B020217003-04）;Science and Tech-nology Cooperation Project of Shanwei Branch of Guangdong Academy of Agricultural Sciences（2023 Branch Special 01）;Science and Technology Plan Projectof Shanwei City（2023B006）

0引言

【研究意义】余甘子（Phyllanthus emblica L.）又称油甘子、牛甘果、滇橄榄等，为大戟科叶下珠属小乔木特色经济树种。余甘子果实营养丰富，富含维生素C以及黄酮、多酚、鞣质等多种生物活性成分（王建超等，2018;程子贤等，2022;Yan et al.，2022），在我国已有近2000年的药食利用历史，具有清热凉血、消食健胃、生津止咳、抗氧化（Liet al.，2020;李晓强等，2023）、抗衰老（Pientaweeratch et al.，2016）、抗肿瘤（马美等，2020;Kumar et al.，2022）、消炎（Li et al.，2022;Liet al.，2023）、降脂（Chen et al.，2023）等药理作用，被国家卫生部列入首批药食兼用名单。余甘子广泛分布于东南亚和南亚等热带、亚热带地区，在我国福建、广东、广西和云南等地均有分布，其中广东省作为余甘子主产区之一，生产的余甘子以鲜食为主，具有产量高、品质佳、口感好等优势。近年来，随着余甘子新式茶饮（赵旭珠等，2020;郑聪和李胜楠，2022;高楚腾等，2023）、果汁（徐涓等，2019）、果粉（宋志姣等，2023）等产品的兴起，其市场需求量不断增加，种植面积日益增大，已成为部分地区乡村振兴的特色产业之一。然而，当前余甘子栽培技术相对落后，管理粗放，导致余甘子田间病害呈明显加重趋势，对余甘子产业的经济效益造成较大损失，因此，急需加强对余甘子病害的监测，为其科学防治提供技术支撑。【前人研究进展】国内外关于余甘子病害及其病原鉴定的研究已有很多报道，其病害研究主要集中在采后贮藏病害方面，这与余甘子果实采后不易贮藏，常温下易受病菌侵染有关（陈雨欣等，2022;Dutta et al.，2023）。郑毅等（2014）采用形态学鉴定和rDNA-ITS序列分析从余甘子采后黑疗病果实中分离鉴定出其病原菌为链格孢属（Alternaria spp.）菌株。吴月等（2019）采用形态学特征结合rDNA-ITS序列分析从余甘子采后软腐病果实中分离鉴定到一种致病菌青霉菌（Penicillium choe-rospondiatis）;而Sengupta等（2020）从余甘子软腐病果实中分离出另一种致病菌，经鉴定为拟茎点霉菌（Phomopsis phyllanthus），同时明确了引起余甘子果实腐烂病和炭疽病的致病菌分别为指状青霉菌（Pdigitatum）和胶孢炭疽菌（Colletotrichumgloeo-sporioides）。Dutta等（2023）从余甘子病果中分离出2株能产红色素和黄色素的致病真菌，采用ITS 和β-tubulin序列分析鉴定为踝节菌（Talaromyces atroroseus）和青霉菌（P choerospondiatis）。以往研究表明，余甘子果实采后病害以真菌为主，其中霉菌危害性最大，严重时可导致50%减损（Muzaffar et al.，2022）。此外，杨子祥等（2012）调查发现，云南地区余甘子田间病害主要有锈病、炭疽病和煤污病等。蒋华等（2021）对滇西地区余甘子主要病虫害种类及危害情况进行了系统调查，发现真菌性病害有13种，其中发生较严重的病害有黑粉病、炭疽病、褐腐病、煤污病、枝枯病、疮痂病和褐斑病等7种；而在广东产区，余甘子常见的主要病害有锈病和青霉病等（匡石滋等，2020）。在生产种植过程中，余甘子发生的病害种类繁多，但大多数病害的识别以田间症状观察为主，多数尚未明确其确切的病原种类，导致田间用药缺乏针对性和科学指导。【本研究切入点】2022年12月，本课题组在广东汕尾对余甘子进行病害调查时发现，田间余甘子果实腐烂症状与已报道的病害症状存在较大差异，发病率约18%，果面呈红褐色斑点腐烂症状，故称余甘子果实斑点病，果实感病后腐烂速度较快，危害性大。但目前未见关于余甘子果实斑点病的研究，对引发该病害的病原菌及其生物学特性尚不明确，也没有针对该病害防治药剂的研究报道。【拟解决的关键问题]采用组织分离法对余甘子果实斑点病的病原菌进行分离，通过形态学特征和基于多基因（ITS、TUB和EFI-α）的系统发育进化分析对病原菌进行鉴定，采用针刺接种法测定病原菌菌株的致病力，采用菌丝生长速率法测定不同培养条件对病原菌菌丝生长的影响，并通过室内毒力测定评估12种常见杀菌剂对病原菌的抑菌活性，以明确该病害的病原菌种类、生物学特性和有效防治药剂，为余甘子果实斑点病的科学诊断和田间防治提供理论依据。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1试验材料余甘子病果于2022年12月18日从广东省汕尾市陆河县余甘子产业园种植基地采集，放入无菌封口袋，置于冰盒，于当天运回实验室进行病原菌分离。

1.1.2供试培养基PDA培养基：马铃薯200.0 g、葡萄糖20.0g、琼脂粉15.0g、水1L，pH自然；基础培养基：磷酸氢二钾0.5 g、七水硫酸镁0.5 g、磷酸二氢钾0.5 g、琼脂粉15g，水1L。

1.1.3供试药剂450 g/L咪鲜胺乳油（安道麦马克西姆有限公司）、30%王铜悬浮剂（江西禾益化工股份有限公司）、25%吡唑醚菌酯悬浮剂（河北成悦化工有限公司）、8%氟硅唑微乳剂（河北中保绿农作物科技有限公司）、10%苯醚甲环唑微乳剂（河北中保绿农作物科技有限公司）、33.5%喹啉铜悬浮剂（顺毅股份有限公司）、30%噁唑菌酮水分散粒剂（陕西华戎凯威生物有限公司）、3%中生菌素可湿性粉剂（河北中保绿农作物科技有限公司）、2%春雷霉素水剂（山西新源华康化工股份有限公司）、80%克菌丹水分散粒剂（山东邹平农药有限公司）、70%丙森锌可湿性粉剂（拜尔股份有限公司）、75%抑霉唑硫酸盐可溶粒剂（安道麦马克西姆有限公司）。

1.2病原菌分离纯化

选取自然发病具有典型病斑的余甘子果实，病果用无菌水清洗后，用无菌解剖刀从病果病健交界处切取约5 mm²的组织若干，用75%酒精浸泡3 min，无菌水清洗3次，再用2%次氯酸钠溶液浸泡5 min，最后用无菌水清洗3次，取出置于灭菌滤纸上晾干。将病果组织接种在PDA培养基上，于25℃黑暗条件下培养，待长出菌落后挑取菌落边缘菌丝进行纯化。

1.3病原菌致病性测定

按照柯赫氏法则，采用针刺损伤接种法对分离菌株进行致病性测定。选取健康无病斑、大小一致的余甘子果实，先用2%次氯酸钠溶液进行表面消毒后再用无菌水冲洗3次，取出后晾干。用接种针在余甘子果实赤道部位均匀刺入深3～4 mm的孔，将待测菌株菌丝块接种于伤口处，置于铺有保湿纱布的无菌塑料盒，于25℃恒温条件下培养，每天观察并记录果实发病情况。出现症状后，取发病部位的病健交界组织再次分离纯化，鉴定分离获得的真菌是否为致病菌。

1.4病原菌鉴定

1.4.1形态学鉴定将纯化后的病原菌接种于PDA培养基上，观察记录菌落形态和颜色等。将产生的分生孢子用无菌水冲洗，于光学显微镜下观察记录分生孢子形状、大小等。根据致病菌株在PDA培养基上的菌落特征、光学显微镜下分生孢子形态结构等进行初步鉴定。

1.4.2分子生物学鉴定将病原菌菌饼接种于PDA培养基上25℃培养，7d后刮取菌丝，采用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法提取菌株基因组DNA。采用通用引物分别扩增ITS、EFI-α和TUB基因部分序列，所用引物（表1）均由北京擎科生物科技股份有限公司合成。

PCR反应体系30.0μL：2×PCR Master Mix 15.0μL，DNA模板2.0μL，10μmolL上、下游引物各1.5μL，ddH₂O 10.0μL。扩增程序：95℃预变性5min;95℃30s，54℃30s，72℃1 min，进行34个循环；72℃延伸1 min，16℃保存。PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳检测后，送至北京擎科生物科技股份有限公司进行测序。测序所获序列在NCBI数据库进行BLASTN比对分析。运用MEGA 6.0采用邻接法 （Neighbour-joining，NJ）构建系统发育进化树，采用自举法（bootstrap）进行1000次重复检验。

1.5病原菌生物学特性测定

1.5.1碳源对病原菌菌丝生长的影响在基础培养基中分别加入2%可溶性淀粉、2%葡萄糖、2%蔗糖、2%半乳糖、2%麦芽糖和2%甘油制成不同碳源培养基，以基础培养基为对照（CK）。将病原菌菌饼分别接种在不同碳源培养基中央，于25℃条件下培养，每处理3次重复。采用十字交叉法测量各处理菌落直径，计算菌丝生长抑制率。

生长抑制率（%）=（对照菌丝直径-处理菌丝直径）/对照菌丝直径×100

1.5.2氮源对病原菌菌丝生长的影响在基础培养基中加入2%葡萄糖，然后分别加入0.2%酵母提取物、0.2%蛋白胨、0.2%硝酸钠、0.2%氯化铵、0.2%缬氨酸、0.2%甘氨酸、0.2%酪氨酸、0.2%硫酸铵和0.2%硝酸钾制成不同氮源培养基，以基础培养基为对照（CK）;将病原菌菌饼分别接种在不同氮源培养基中央，于25℃条件下培养，每处理3次重复，其他试验方法和计算方法同1.5.1。

1.5.3温度对病原菌菌丝生长的影响将病原菌菌饼接种于PDA培养基中心，分别在5、10、15、20、

25、30和35℃下培养3d，每处理3次重复，其他试验方法和计算方法同1.5.1。

1.5.4 pH对病原菌菌丝生长的影响用盐酸和氢氧化钠将PDA培养基pH分别调至4、5、6、7、8、9和10。将病原菌菌饼接种在PDA培养基中央，于25℃条件下培养，每处理3次重复，其他试验方法和计算方法同1.5.1。

1.6杀菌剂毒力测定

采用菌丝生长速率法测定12种供试杀菌剂的抑菌活性。将病原菌菌株活化培养5d后，用直径为5 mm的打孔器从菌落边缘打取菌饼，分别接入含有杀菌剂的PDA培养基中央，置于25℃条件下培养，培养7d后采用十字交叉法测量菌落直径。每种杀菌剂均设5个不同的浓度梯度（表2），以不含杀菌剂的PDA培养基为空白对照，每处理3次重复，取平均值计算菌丝生长抑制率。以药剂浓度对数为横坐标，以对应的菌丝生长抑制率为纵坐标进行回归分析，求毒力回归方程，并计算各杀菌剂对病原菌菌株的抑制中浓度（EC50）。

1.7统计分析

试验数据采用SPSS 24.0进行统计分析，采用Duncan's新复极差法进行差异显著性检验。

2结果与分析

2.1余甘子果实斑点病田间发病症状及病原菌分离纯化和致病性测定结果

余甘子果实斑点病的典型症状如图1所示。病害发生初期，在果实表面出现多个散生红褐色小斑点（图1-A）;随着病情发展，小斑点颜色逐渐加深且向四周扩散，中间呈黑色，略显凹陷（图1-B）;至发病后期，病斑蔓延扩大连接成放射状的红褐色大病斑，中间形成明显的黑色凹陷，凹陷周围呈红褐色（图1-C），严重时果实干枯，甚至引起果实畸形、脱落。

从发病余甘子果实上分离得到4株真菌，分别记为PE1、PE2、PE3和PE4，各菌株在PDA培养基上生长的菌落形态相同，菌丝颜色也一样，选择菌株PE3进行后续试验。

致病性测定结果（图2和图3）显示，从发病果实上分离获得的菌株PE3对余甘子果实具有致病性。菌株PE3离体果实接种第3d开始发病，而未接菌的果实未出现任何病症；孢子悬浮液接种5d后果实发病症状表现为水浸状至黄褐色的坏死圆形斑，并具有明显的黄色晕圈，后期病斑扩展引起果实表面凹陷，而对照果实未发病。挑取发病果实病斑组织进行病原菌再分离、纯化，得到的病原菌与原接种菌株性状一致，表明该菌株为余甘子果实斑点病致病菌。

2.2病原菌形态学特征鉴定结果

菌株PE3于PDA培养基上25℃培养观察，初期菌丝为白色，向四周放射状生长呈规则圆形，边缘平滑，中心菌丝较浓密，四周相对稀疏，生长后期产生黑色小颗粒并有黄色液体排出（图4-A和图4-B）。显微镜下观察，菌丝可见明显分隔（图4-C）;分生孢子浅绿色，卵圆形，分生孢子直径约5μm（图4-D）。

2.3病原菌分子生物学鉴定结果

以菌株PE3的基因组DNA为模板，扩增ITS、TUB和EFl-α基因部分序列，结果分别获得大小约为580、790和310 bp的片段，各条带清晰，无拖尾杂带现象。将ITS、TUB、EFI-α基因序列提交至Gen-Bank数据库，BLASTN同源性比对结果显示，所测序列与NCBI中的间座壳属Diaportheceratozamiae、D.pescicola和D.phoenicicola等菌株的同源性相近，无法将其区分开。利用菌株PE3和间座壳属不同种菌株的ITS、TUB、EFI-α基因序列进行多序列比对及系统发育进化树构建，结果（图5）显示，菌株PE3与D.phoenicicola聚在同一个分支。结合形态学特征和系统发育分析将菌株PE3鉴定为间座壳菌D.phoenicicola。

2.4病原菌生物学特性

2.4.1不同碳源和氮源对病原菌菌丝生长的影响由表3可知，菌株PE3在6种碳源培养基上均能生长，但生长速度不完全一致，各碳源处理的菌落直径比CK提高14.57%～50.33%。其中，菌株PE3对甘油的利用效果最好，生长速度最快，蔗糖次之，培养5 d后菌落直径分别为4.54和4.44 cm，两者间差异不显著（Pgt;0.05，下同），但均显著高于其他碳源处理（Plt;0.05，下同）;其次为葡萄糖、麦芽糖和可溶性淀粉；对半乳糖的利用效果最差。

由表4可知，菌株PE3在9种氮源培养基上均能生长，各氮源处理的菌丝生长速度比CK提高1.47%～60.78%，差异较大。其中，菌株PE3对酵母提取物的利用效果最好，培养5d后菌落直径为6.56 cm，显著大于其他氮源处理；其次为蛋白胨和甘氨酸，菌落直径分别为6.14和5.48 cm;再次为氯化铵、硝酸钠、缬氨酸和硝酸钾；对酪氨酸的利用效果最差，菌落直径仅为4.14 cm.菌丝生长速度显著低于其他氮源处理。

2.4.2不同温度和pH对病原菌菌丝生长的影响

由图6可知，菌株PE3菌丝在10～35℃均能生长，不同温度对菌株PE3菌丝生长的影响存在显著差异。菌株PE3适宜生长温度为25～30℃，其中25℃最适合菌丝生长，生长速度最快，菌落直径达7.40cm;当温度为35、15和10℃时，菌丝生长受到显著抑制，菌落直径分别为2.92、2.14和1.22 cm;当温度为5℃时，菌丝停止生长。表明温度低于5℃时可抑制该菌株的菌丝生长。

由图7可知，在pH为4～10时，菌株PE3菌丝均可生长。当pH为7时菌丝生长速度最快，菌落直径为8.00 cm，显著高于其他pH处理；当pH为4、5、6和8时，菌丝生长速度次之，菌落直径分别为7.38、7.80、7.80和7.02 cm;在pH为9和10时，菌丝生长显著减慢，菌落直径分别为6.04和4.40 cm。表明pH过高会抑制菌株PE3的菌丝生长。

2.5不同杀菌剂对余甘子果实斑点病病原菌的抑制作用

杀菌剂对余甘子果实斑点病病原菌的抑制作用测定结果（表5）显示，不同杀菌剂对菌株PE3菌丝生长均有不同程度的抑制作用，各药剂对菌丝的抑制率均随着处理浓度的增加而增大，其中，450 g/L咪鲜胺对菌株PE3菌丝抑制作用最强，EC50为0.019 mg/L，其次为8%氟硅唑、10%苯醚甲环唑、25%吡唑醚菌酯、3%中生菌素、33.5%喹啉铜和75%抑霉唑硫酸盐；70%丙森锌和80%克菌丹的抑制作用较差；30%噁唑菌酮、30%王铜和2%春雷霉素的抑制效果最差，EC50均大于100.00 mg/L。

3讨论

斑点病是近年来余甘子主要果实病害之一，在广东省汕尾市等产区发生较普遍，田间发病率约18%，严重时病情指数达60%以上，导致余甘子产量降低，品质和商品性受到影响。本研究田间调查发现，该病害主要为害果实，在果面形成散生小点或连接成放射状的红褐色病斑，中间呈规则的圆形黑色凹陷，发病严重的果面病斑呈块状，果实干枯，甚至引起果实畸形、脱落。

间座壳属真菌引起的病害在经济作物、粮食作物和果蔬作物生产中均有发生，严重影响了农业的可持续发展。该属真菌包括有性型和无性型2种状态，有物种名记录的就有1000多个，但目前未能完全对其无性型和有性型的物种完成一一对应（豆明珠等，2021）。目前，间座壳属真菌的形态分类存在着物种界限模糊的问题（Udayanga et al.，2014a，2014b），因此，其属下相近种的准确描述和鉴定存在较大困难。近年来，随着分子生物学技术的不断发展，核苷酸序列扩增和系统发育分析在间座壳菌分类中被广泛应用，多个核苷酸序列或基因片段被用于间座壳菌的系统发育分析，如ITS、TEF、CAL、HIS、TUB、ACT、EF1-a、FG1093和Apn2等（Udaya-nga et al.，2014a，2014b;Guo et al.，2020;Wang et al.，2021）。本研究通过对余甘子果实斑点病病原菌的分离、纯化、致病性测定和柯赫氏法则验证，同时结合ITS、TUB和EFI-α基因序列对间座壳菌的系统发育进行研究，首次明确了引起余甘子果实斑点病的病原菌为间座壳菌D.phoenicicola。

以往研究报道表明，间座壳属真菌具有广泛的寄主，可侵染向日葵（Thompson et al.，2011）、石栎（Gao et al.，2015）、柑橘（Huang et al.，2015）、蓝莓（李媛等，2017）、猕猴桃（石浩等，2020）、梨（Guo et al.，2020;Wang et al.，2021）、大豆（豆明珠等，2021）、烟草（潘勇等，2022）、甘薯（唐伟等，2022，2023）、樱桃（周悦妍等，2022）、柿子（Geng and Wang，2023）等多种植物的枝叶、茎干和果实，造成植物胴枯病、枝枯病、黑点病、软腐病、溃疡病、黑腐病、茎腐病等多种病害。但本研究中侵染余甘子果实的间座壳菌是否侵染其他植物有待进一步探究。此外，间座壳属真菌不仅可通过菌丝和孢子侵染寄主，还可在果实上分泌促微管解聚A及致癌物质赭曲霉毒素A等多种毒素（Kunz et al.，2022），而染病果实中所含的真菌毒素对人体健康安全造成了严重威胁。因此，应对由D.phoenicicola侵染造成的余甘子果实斑点病引起足够重视。

化学防治一直以来是有效控制果蔬病害的重要措施，但目前对杀菌剂应用于D.phoenicicola引起的植物病害防治的毒力筛选报道不多。本研究在室内筛选出咪鲜胺对余甘子果实斑点病的病原菌D.phoenicicola的菌丝生长抑制活性最强，其EC50为0.019 mg/L，其次为氟硅唑、苯醚甲环唑和吡唑醚菌酯，EC50均小于0.200 mg/L，而春雷霉素的抑制作用最差。在这些具有良好抑制活性的供试药剂中，咪鲜胺、氟硅唑和苯醚甲环唑均属于甾醇脱甲基酶抑制剂（DMIs），可能与间座壳菌对这类药剂敏感有关。虽然这些杀菌剂的作用位点相对单一，但对扩充药剂库，轮换使用不同作用机制的药剂，延长使用寿命具有重要指导意义。本研究仅在室内测定了不同杀菌剂对D.phoenicicola的毒力，对于田间防控效果还有待进一步验证。

4结论

余甘子斑点病主要危害果实，通过形态学和ITS、TUB和EFI-α基因序列分析，明确余甘子果实斑点病的病原菌为间座壳菌D.phoenicicola;该病原菌在25℃和pH7条件下生长最好，对碳源甘油和蔗糖、氮源酵母提取物的利用率最高；450 g/L咪鲜胺乳油、8%氟硅唑微乳剂、10%苯醚甲环唑微乳剂和25%吡唑醚菌酯悬浮剂能有效防治余甘子果实斑点病，可在余甘子种植中推广应用。

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（责任编辑 麻小燕）