‘玉露香梨’生长素烟酰胺合成酶基因GH3 克隆及其生物信息特征研究

摘要：［目的］‘玉露香梨’果实萼片宿存严重降低其商品价值，筛选并鉴定其果实萼片发育关键基因，可为从分子水平培育萼片脱落的梨果实提供参考基因。［方法］以棚架栽培的‘玉露香梨’为试材，结合前期BSA 基因定位测序数据，对候选基因表达特征进行验证、克隆并分析2 个生长素酰胺合成酶基因GH3 家族生物信息特征。［结果］基因PbGH3. 3（Pbr007550）和PbGH3. 4（Pbr030571）在萼片的表达量排名第二；PbGH3. 3 和PbGH3. 4 CDS 长度均为1806 bp，编码601 个氨基酸，其中二者存在7 个氨基酸序列的差异，编码的蛋白PbGH3. 3 和PbGH3. 4 序列与苹果MdGH3. 1 的同源性最高；属于不稳定性蛋白，无信号肽的存在，定位于细胞质；利用NCBI 网站CCD 工具分析发现均具有GH3 蛋白家族的GH3 superfamliy 保守结构域，蛋白质三级建模后发现为GH3. 1 AUXIN 缀合酶，涉及生长素稳态，属于GH3 蛋白家族。STRING 互作网络蛋白成员GO 和KEGG 功能富集分析表明PbGH3. 3 参与植物激素尤其是生长素信号通路，推测PbGH3. 3 和PbGH3. 4 可能在‘玉露香梨’果实萼片脱落中通过IAA 信号通路发挥生物学功能。

关键词：梨； 萼片； 生长素烟酰胺合成酶； 基因克隆； IAA

中图分类号：S722.3；S661.2 文献标识码：A 文章编号：1671-8151（2024）03-0014-10

‘ 玉露香梨’传统分类上属白梨系统，是山西农业大学果树研究所培育而成的‘库尔勒香梨’型中熟红梨品种，分别继承其母本新疆‘ 库尔勒香梨’、父本‘ 雪花梨’汁多味甜、皮薄肉细及果个大等优点［1-2］，同时部分克服了香梨果形不正等缺点，具有抗逆性强、丰产稳产、地域适应性强等优点［3-5］。‘玉露香梨’2014 年被国家农业部确定为梨果树发展主导品种，并于2019 年入选中国农业品牌目录，隰县玉露香梨又被农业部选为2023 年农业品牌精品培育名单。

根据梨果实成熟时萼片脱宿状态，可将其分为宿萼果和脱萼果［6］。‘玉露香梨’虽优点众多，但果实萼片存在部分宿存现象。萼片位于花器官的最外层，主要包含上下表皮、维管束和叶肉细胞部分，进化上其为叶的变态器官。萼片发育初期可保护内部结构，减少生殖器官受到外界诸如雨水冲刷及机械损伤的影响［7］。然而，‘玉露香梨’萼片宿存可致其果形不整齐、表面平整度下降、易生果锈等问题。

植物器官脱落与遗传生理特性、栽培调控技术、环境因子等有关［8-11］。其中，植物激素生长素在器官脱落中发挥重要作用，如Meir 等［12］报道，当组织内游离生长素（IAA）含量下降到一定阈值后，离区组织（Abscission zone， AZ）对乙烯（ETH）存在的敏感性增加，进而诱导器官开始脱落。在模式植物番茄脱落的研究中，用IAA 处理外植体后，生长素烟酰胺合成酶基因（Gretchen Hagen 3，GH3）表达上调，且能诱导外植体开始脱落。以上研究均表明基因GH3 是IAA 诱导花脱落延迟的有效负调控因子［13］。本课题组前期利用‘ 玉露香梨’的双亲‘库尔勒香梨’与‘雪花梨’杂交获得F1萼片脱宿性状分离群体，将构建的萼片脱落与宿存的极端混池群体进行全基因组集群分离测序（Whole genome bulked segregation analysis，DNA-BSA），定位到与其果实萼片脱落宿存关联的基因GH3［14］，在‘库尔勒香梨’数字表达图谱数据中发现GH3 在脱落萼片内表达上调，进一步表明基因GH3 可能参与梨果实萼片脱落过程［15］。

基于此，本研究以棚架式栽培的‘玉露香梨’为研究材料，基于前期课题组萼片脱落宿存极端混池分析测序技术，成功定位到基因GH3，该基因参与梨果实萼片发育。为进一步研究此基因家族成员功能，对筛选的2 个GH3 家族成员的表达量进行验证。同时，对候选的2 个家族成员基因进行克隆，并分析其生物信息学特征，为从分子水平研究‘玉露香梨’萼片脱落提供参考基因。

1 材料与方法

1. 1 试验材料

材料来源于山西省晋中市太谷区的山西农业大学果树研究所（N37°21'17\"，E112°30'12\"）。‘玉露香梨’的栽培模式为双臂平行式。

主要试剂：克隆酶试剂盒Taq DNA、 DNA 分子Marker-DL2000、反转录酶试剂盒PrimeScript™RT reagent Kit 购于TaKaRa（中国）公司，凝胶回收试剂盒Simgen、荧光定量PCR 实验用品与卡那霉素分别选自新景生物试剂开发有限（杭州）公司，山西睿然科技有限公司和北京美亿美生物技术有限公司。qRT-PCR 引物合成和DNA 序列测序均由生物工程技术有限公司（上海）完成。

载体与菌株：大肠杆菌菌株（E. coli）DH5α、载体pMD-19T 来自TaKaRa。

1. 2 试验方法

试验处理：选取树势相近，树体健壮的‘ 玉露香梨’，于4 月上旬盛花初期，上午9 时，使用浓度为1000 mg·L-1 生长延缓剂PP333 和蒸馏水，一次性喷施至整朵花全湿、有药液滴落为止，用于诱导‘玉露香梨’果实萼片脱落。实验处理2 周后选取3个长势一致的‘玉露香梨’的枝条，作为3 次生物学重复，脱萼与宿存果的果皮、果肉、萼筒离区组织以及脱落幼果前的花瓣、萼片、叶片、叶芽的单个组织分别收集，作为RNA 提取材料。

RNA 的提取：采用实验室改良成熟的CTAB法分别提取梨不同组织部位样品的总RNA。

cDNA 的合成：根据试剂盒说明操作手册，使用TaKaRa 公司的PrimeScript™ RT reagent Kit 合成cDNA，去除核基因组DNA 反应。

qRT-PCR 检测方法：基于Primer Premier 5. 0软件，参考中国白梨基因组（http：//gigadb. org/search/new？keyword=Pyrus+bretschneideri+），设计GH3 引物， 内参基因为ACTIN（KT943411. 1），对‘ 玉露香梨’萼筒的定量用cDNA 校准，引物序列见表1。

基于ChamQTMSYBR®qPCR Master Mix的三步法扩增，同时采用Light Cycler 96 进行实时荧光定量检测，3 次重复，反应结束后分析溶解曲线并评估引物的特异性。反应体系为20. 0 μL：包含2×ChamQ SYBR qPCR Master Mix 10 μL，Forward Primer（10uM）0. 6 μL，Forward Primer（10uM）0. 6 μL，cDNA 2. 0 μL，Nuclease-free Wa⁃ter 6. 8 μL。

生长素酰胺合成酶基因PbGH3 的克隆：引物见表2，按照试剂盒说明分别进行目的基因扩增、回收纯化片段、载体构建、转化并进行测序验证。

基因PbGH3. 3 与PbGH3. 4 的生物信息学分析：首先，在线分析GH3 蛋白序列的理化性质（http：//www. expasy. ch/tools/protparam. Htm）；其次，预测蛋白GH3 结构（http：//www. ebi. ac.uk/Tools/InterProScan/）；随后，分析GH3 蛋白结构域（https：//www. ncbi. nlm. nih. gov/Structure/cdd/wrpsb. cgi），结合DNAMAN 软件，进行多序列比对（https：//blast. ncbi. nlm. nih. gov/Blast）；之后，利用SOPMA（http：//meta-database. org/wiki/SOPMA）和Interactive（http：//swissmodel.expasy. org/interactive）预测GH3 蛋白质二、三级结构；然后，分别利用TMHMM（http：//www.cbs. dtu. dk/services/TMHMM/） 、SignalP（http：//www. cbs. dtu. dk/services/SignalP/）和PSORT Predition （http：//psort1. hgc. jp/form.html）进行跨膜结构、信号肽及亚细胞定位预测与分析；最后，基于STRING 进行蛋白网络互作分析（https：//version-12-0. string-db. org/）

2 结果与分析

2. 1 生长素烟酰胺合成酶基因GH3 在‘ 玉露香梨’中的表达特性分析

‘ 玉露香梨’基因PbGH3. 3 和PbGH3. 4 染色体定位发现均位于Chr5（图1A）。基因表达分析结果发现在叶芽组织中的表达量显著高于其他组织内，在萼片中表达量次之，除‘玉露香梨’宿萼果果肉、宿萼果果皮和脱萼萼筒的基因表达量差异不显著外，其余组织表达差异均显著（图1B）。基因PbGH3. 4 在‘ 玉露香梨’各个组织部位表达由高到低的顺序依次为：脱萼果果肉gt; 萼片gt; 脱萼萼筒gt;宿萼果果皮gt;叶芽gt;花瓣gt;宿萼果果肉gt;脱萼果果皮gt; 宿萼萼筒gt; 叶片，其中在脱萼果果肉中表达最高。与此同时，与其它各组织比较，均存在显著差异（图1C）。此外，发现‘玉露香梨’基因PbGH3. 3 和PbGH3. 4 二者均在叶片组织中表达最低。对基因PbGH3. 3 在砀山酥梨组织表达分析发现，其在梨各个组织及果实发育不同时期中均有表达（图1D）。

2. 2 ‘ 玉露香梨’PbGH3 家族成员cDNA 全长序列的克隆分析

提取梨果实萼片离区组织（图2A）RNA，反转录后并基于T-A 克隆技术（图2B），成功克隆出2个家族成员PbGH3. 3 和PbGH3. 4。以‘ 玉露香梨’萼片离区组织为材料提取并反转录得到cDNA，经PCR 扩增（图2C）检测测序，获得目的基因的全长CDS，长度均为1806 bp，起始密码子为ATG，终止密码子为TAA。编码蛋白分析发现存在7 个氨基酸序列差异，如在1081 bp 处存在G/A变异而导致编码的氨基酸不同（图2D 和2E）。

2. 3 ‘玉露香梨’蛋白PbGH3. 3 和PbGH3. 4 进化树构建结果分析

PbGH3. 3 蛋白与苹果（XP_008373075. 1）的同源性为97. 84%，与甜樱桃（XP_021827312. 1）的同源性为92. 15%，与李（XP_008236406. 1）的同源性为91. 82%，与桃（XP_007199763. 1）的同源性为91. 82%，与杏（XP_034228093. 1）的同源性为91. 65%；PbGH3. 4 与苹果、甜樱桃、李、桃和月季的相似性分别为97. 17%、92. 49%、92. 49%、92. 49% 和87. 85%。利用MEGA 7. 0，PbGH3. 3和PbGH3. 4 蛋白与其他蔷薇科等15 种物种的系统进化结果发现‘玉露香梨’PbGH3 二者蛋白与苹果MdGH3. 1 的同源性最高（图3B）。

2. 4 ‘玉露香梨’PbGH3. 3 和PbGH3. 4 蛋白特性分析

PbGH3. 3 和PbGH3. 4 均编码601 个氨基酸，蛋白分子式均为C5319H8834N1806O2178S520，相对分子质量均是14. 96 kDa，等电点相同为4. 90，同时编码氨基酸内的负电荷残基（Asp+Glu）和正电荷的残基（Arg+Lys） 均为0。此外，PbGH3. 3 和PbGH3. 4 蛋白的半衰期均为10 h，表现为不稳定，而蛋白质不稳定性指数（II）、脂肪指数和亲水性的平均值（GRAVY）分别为43. 33 与54. 41、86. 96 与24. 75、−0. 237 与0. 916，其中前者蛋白为亲水性，后者则为疏水性。

PbGH3. 3 与PbGH3. 4 主要分别由37. 10%与38. 27% 的α-螺旋、6. 32% 与5. 16% 的β-折叠、42. 26% 与41. 93% 的无规则卷曲以及14. 31% 与4. 64% 的延伸链组成（图4A 和4B）。蛋白质结构功能域预测其保守结构域发现，二者蛋白结构域中均具有GH3 蛋白家族的GH3 super family保守结构域（图4C 和4D）。

蛋白PbGH3. 3 无信号肽（图4E），而蛋白PbGH3. 4 存在信号肽（Sec/SPI）的可能性为0. 000 6（图4F）。PbGH3. 3 和PbGH3. 4 蛋白定位于细胞质、细胞核、线粒体、过氧化物酶体、内质网、溶酶体的可能性分别为47. 8% 与45. 0% 、26. 1% 与0% 、13. 0% 与10. 0% 、8. 7%与30. 0% 、4. 3% 与0% 、0% 与10. 0% 。因此，预测二者定位于细胞质的可能性最大。

选取结构相似性最高的VvGH3. 1 蛋白（吲哚-3- 乙酸烟酰胺基合酶）晶体结构（GMQE 为84. 56% ，QMEAN 为− 1. 17）建模（ 图5A），PbGH3. 3 和PbGH3. 4 蛋白质三级建模后发现，两者蛋白均为GH3-1 AUXIN 缀合酶（图5B 和图5C），二者含有生长素稳态、无多聚体的形成，均具有1xV1N 配体（图5D）与1x［（（2S ，3R ，4R ，5R）-5-（6- 氨基嘌呤-9- 基）-3，4-（双氧化蒽基）氧杂戊基-2- 基］2-（1H- 吲哚-3- 基）磷酸氢乙酯相同配体（ 图5E），其中前者的V1N. 3 包括4Å 内的19 个残基和16 种PLIP 交互（ 图5F），后者则有18 种PLIP 交互（ 图5G）。

2. 5 ‘ 玉露香梨’PbGH3. 3 蛋白网络互作分析

PbGH3. 3 全基因组的蛋白互作网络如图6A 所示，节点数11，边数24 ，平均节点度4. 36，平均局部聚类系数为0. 762 ，PPI 富集P 值为1. 37×10-4 。对互作基因GO 功能分析发现，富集生物学过程前三的通路为激素介导的信号通路（GO ：0009755 ， 4. 26e-5），细胞内信号转导（GO ：0035556 ， 4. 6e-4）和细胞分裂素激活的信号通路（GO ：0009736 ， 4. 6e-4）（图6B）；分子功能富集于酸性氨基酸连接酶活性（GO ：0016881 ， 4. 6e-4）。基因网络互作成员KEGG功能分析富集于植物信号转导通路（map04075 ， 5. 33e-14）（图6C）。

3 讨论

生长素烟酰胺合成酶基因GH3 在早期响应植物生长素信号通路发挥重要功能作用。曾文芳在对不同GH3 基因协同控制桃果实各个发育阶段生长素动态平衡的研究中发现，PpGH3. 3 和PpGH3. 4 在果实成熟阶段明显表达上调，暗示它们可能参与了桃果实成熟衰老阶段的发育［ 16］。根据周苹的研究，GH3. 9 基因过表达植株中，雄蕊个数比雌蕊少且雄蕊明显偏短，不利于拟南芥的自花授粉，进而影响花器官衰败［ 17］。刘妮等研究指出低IAA 水平有利于‘ 砀山酥梨’果实萼片脱落［ 4］。本实验‘ 玉露香梨’基因PbGH3. 3 在萼片中存在高表达，由于本实验萼片取样处于盛花末期，为梨果实萼片脱落临界期。因此，该时期基因PbGH3. 3 的高表达，可能诱导其萼片衰老脱落。本实验克隆的‘ 玉露香梨’基因PbGH3 尤其PbGH3. 3 可能通过负调控IAA 通路诱导梨果实萼片脱落。

‘ 玉露香梨’PbGH3. 3 和PbGH3. 4 长度均为1806 bp ，二者具有7 个氨基酸序列的差异，编码601 个氨基酸，进行同源性氨基酸序列对比后发现，与苹果、甜樱桃、李、桃、杏的同源性均在90% 以上，表明PbGH3. 3 和PbGH3. 4在进化上比较保守；对编码的蛋白结构域分析后发现PbGH3. 3 和PbGH3. 4 具有GH3 super⁃family 结构域，说明它们属于生长素烟酰胺合成酶类。不同物种基因GH3 在序列长度、理化特性存在差异［ 18］，但均具有保守的GH3 结构域，与Ostrowski 等人报道的结果一致，说明GH3 蛋白家族在进化上存在保守结构域［ 19］。

‘ 玉露香梨’蛋白PbGH3. 3 和PbGH3. 4 无信号肽，说明2 个蛋白属于非分泌蛋白；对蛋白的一级结构进行理化性质分析，发现本实验克隆的基因编码蛋白不具稳定性。蛋白质三级建模后发现PbGH3. 3 和PbGH3. 4 蛋白为GH3-1 AUXIN 缀合酶，与VvGH3 的吲哚-3-乙酸酰胺基合酶的晶体结构相似性最高，涉及生长素稳态，与前人研究结果一致，具有生长素结合特性［ 20］。

SignalP 预测‘ 玉露香梨’PbGH3. 3 和PbGH3. 4 蛋白信号肽功能时，当预测分值大于阈值0. 5 时，默认为该蛋白含有信号肽；反之，分值小于阈值时，则不具信号肽［ 21-22］。‘ 玉露香梨’的PbGH3. 4 的生长素烟酰胺蛋白合成酶的蛋白信号肽（Sec/SPI）的预测分值是0. 000 6 ，表明‘ 玉露香梨’的PbGH3. 4 序列含有信号肽的可能性极低，不具备蛋白信号指引的功能。说明本实验克隆的‘ 玉露香梨’PbGH3. 3 和PbGH3. 4 基因属于编码生长素烟酰胺合成酶，但无信号肽功能。‘ 玉露香梨’PbGH3. 3 蛋白网络互作GO 和KEGG 功能富集分析表明其可能通过植物激素尤其是生长素信号通路参与梨果实组织的发育。

4 结论

基因PbGH3. 3 与PbGH3 在‘ 玉露香梨’果实萼片等组织中存在差异表达，成功克隆出2个IAA 信号通路关键生长素烟酰胺合成酶基因，明确了生长素酰胺合成酶基因GH3 的2 个关键基因生物信息特征，均含GH3 superfamily保守结构域，属GH3 蛋白家族。本实验可为从生长素信号通路研究‘ 玉露香梨’萼片的脱落分子机理提供参考基因。基因GH3 如何通过IAA 通路影响萼片发育的机制有待进行更深入的功能验证。

致谢

感谢大连理工大学的Noman Ali 博士对本文英文摘要的修改润色。

We thank Dr. Noman Ali， from School of Bioengineering， DalianUniversity of Technology， Dalian， 116024， Liaoning， People'sRepublic of China， for his revision in English abstract.

参考文献

［1］张晓伟， 白牡丹， 郝国伟， 等. 玉露香梨生长期内干物质和氮磷钾元素积累规律分析［J］. 山西农业科学， 2020， 48（11）：1758-1762.

Zhang X W， Bai M D ， Hao G W， et al. Analysis on theaccumulation law of dry matter， nitrogen， phosphorus andpotassium during the growth period of Yuluxiang pear［J］.Shanxi Agricultural Science， 2020， 48（ 11）：1758-1762.

［2］李晓梅， 郭黄萍， 黄军保. 玉露香梨及其在黄土高原地区建园技术［J］. 中国果树， 2004， 5（1）： 23-24.

Li X M， Guo H P， Huang J B. Yuluxiang pear and its gardeningtechnology in the Loess Plateau［J］. China Fruits， 2004， 5（1）：23-24.

［3］陆凤勤. 玉露香梨的引种表现及栽培技术要点［J］. 中国农业信息， 2015， 174（6）：81-82.

Lu F Q. Introduction performance and cultivation techniques ofYuluxiang pear［J］. China Fruit News， 2015， 174（6）： 81-82.

［4］刘妮， 陶书田， 张绍铃， 等. 授粉品种对'库尔勒香梨'果实萼片宿存及品质的影响［J］. 南京农业大学学报， 2011， 34（3）：43-47.

Liu N， Tao S T， Zhang S L， et al. Effect of different pollinizervarieties on calyx retention and quality for 'Kuerlexiangli' fruit［J］. Journal of Nanjing Agricultural University， 2011， 34（3）：43-47.

［5］陈园园， 罗嘉亮， 李凯， 等. 梨脱萼果与宿萼果品质比较［J］.北京农学院学报， 2018， 33（1）：15-21.

Chen Y Y， Luo J L， Li K， et al. Compatine studies on qualityand texture of leaving calyx and persistent calyx fruits in pear［J］. Journal of Beijing University of Agriculture， 2018， 33（1）：15-21.

［6］张光富， 李玲. 植物的萼片与苞片［J］. 生物学教学， 2011，36（7）：71.

Zhang G F， Li L. Sepals and bracts of plants［J］. BiologyTeaching， 2011， 36（7）：71.

［7］何子顺， 牛建新， 吴忠华， 等. 库尔勒香梨花萼发育规律研究［J］. 新疆农业科学， 2007， 44（03）：377-381.

He Z S， Niu J X， Wu Z H， et al. A Study on development lawof calyx of Korla fragrant pear（Pyrus brestschneideri Rehd）［J］.Xinjiang Agricultural Sciences， 2007， 44（03）：377-381.

［8］木合塔尔·扎热. 库尔勒香梨树光能利用效率及宿萼果和粗皮果形成因子的研究［D］. 乌鲁木齐：新疆农业大学， 2012.

Muhetal Z A. Study on light use efficiency and related factorswith calyx fruit and rough fruit of Korla Fragrant Pear［D］.Urumqi：Xinjiang Agricultural University， 2012.

［9］衡伟， 陈捷， 叶振风， 等. 砀山酥梨幼果花萼发育及其调控技术研究［J］. 合肥：安徽农业大学学报， 2010， 37（02）：238-243.

Heng W， Chen J， Ye Z F， et al. Development of calyx and itscontrolling techniques of young fruit of Dangshansu pear［J］.Hefei：Journal of Anhui Agricultural University， 2010， 37（02）：238-243.

［10］陈园园， 李凯， 宋宇琴， 等. PBO 对玉露香梨果实脱萼及品质的影响［J］. 中国南方果树， 2018， 47（5）：55-58.

Chen Y Y， Li K， Song Y Q， et al. Effects of PBO on calyxfalling and fruit quality of Yuluxiangli pear［J］. South ChinaFruits， 2018， 47（5）：55-58.

［11］丁家鸣. 花期气温变化对库尔勒香梨脱萼果和宿萼果形成的影响［D］. 乌鲁木齐：新疆农业大学， 2015.

Ding J M. Effects of flowering temperature changes of abscisiccalyx and persistent calyx fruit of Korla fragrant pear formation［D］. Urumqi： Xinjiang Agricultural University， 2015.

［12］Meir S， Hunter D A， Chen J C， et al. Molecular changesoccurring during acquisition of abscission competence followingauxin depletion in Mirabilis Jalapa［J］. Plant Physiology，2006， 141（4）：1604-1616.

［13］Zuo X， Xu T， Qi M， et al. Expression patterns of auxinresponsivegenes during tomato flower pedicel abscission andpotential effects of calcium［J］. Australian Journal of Botany，2012， 60（1）：68.

［14］丁保朋. 梨果实萼片对果形的影响及其发育相关基因分析［D］. 太谷：山西农业大学， 2020.

Ding B P. Study on the effect of the sepals of Pyrus fruit onfruit shape and its molecular mechanism［D］. Taigu： ShanxiAgricultural University， 2020.

［15］Qi X， Wu J， Wang L， et al. Identifying the candidate genesinvolved in the calyx abscission process of 'kuerlexiangli'（Pyrus Sinkiangensis Yu） by digital transcript abundancemeasurements［J］. BMC Genomics， 2013， 14（1）：727.

［16］曾文芳， 潘磊， 牛良， 等. 桃GH3 基因家族的生物信息学分析及其在果实发育中的表达［J］. 园艺学报， 2015， 42（05）：833-842.

Zeng W F， Pan L， Niu L， et al. Bioinformatics analysis ofpeach GH3 gene family and its expression in fruit development［J］. Acta Horticulture Sinica， 2015， 42（05）：833-842.

［17］周苹， 唐冬英， 郭明， 等. 拟南芥GH3.9 基因的过表达及其表型分析［J］. 西北植物学报， 2015， 35（3）：5.

Zhou P， Tang D Y， Guo M， et al. Overexpression andphenotype Analysis of GH3.9 gene in Arabidopsis thaliana［J］.Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica， 2015， 35（3）：5.

［18］张晓峰， 焦锋， 聂浩， 等. 桑树MaGH3.6 基因的克隆与诱导表达及时间特异性［J］. 蚕业科学， 2013（2）：8.

Zhang X F， Jiao F， Nie H， et al. Cloning， induced expressionand temporal specificity of MaGH3.6 gene in Mulberry.Science of Sericulture， 2013（2）：8.

［19］Ostrowski M， Mierek-Adamska A， Porowińska D E T， et al.Cloning and biochemical characterization of indole-3-acetic acidaminoacid synthetase PsGH3 from pea. Plant PhysiolBiochem. 2016， 107：9-20.

［20］Wei L J， Yang B， Jian H J， et al. Genome-wide identification22and characterization of Gretchen Hagen3 （GH3） family genesin Brassica napus［J］. Genome， 2019， 62（9）：597–608.

［21］高利敏， 王鹏飞， 杜俊杰， 等. 欧李ChCCD1 基因的克隆与生物信息分析［J］. 分子植物育种， 2018， 16（05）：1426-1432.

Gao L M， Wang P F， Du J J， et al. Cloning andbioinformatics Analysis of CCD1 gene in Cerasus humilis［J］.Molecular Plant Breeding， 2018， 16（05）：1426-1432.

［22］邢磊， 郭园艺， 汪自庆， 等. 羊草GST 基因的克隆及序列分析［J］. 山西农业大学学报（自然科学版）， 2020， 40（5）：48-56．

Xing L， Guo Y Y， Wang Z Q， et al. Cloning andbioinformatics analysis of GST gene of Leymus chinensis［J］.Journal of Shanxi Agricultural University （Natural ScienceEdition）， 2020， 40（5）：48-56.

（编辑：吕俊俐）

基金项目：国家自然科学基金青年基金项目（32102364）