姜状三七水提物活血化瘀作用研究

蒙国懿　郭文娟　付晶凤　高丽　许银凤

【摘 要】 目的：初步探讨姜状三七的活血化瘀作用，为今后资源的开发利用及深入研究奠定基础。方法：实验分为生理盐水组、阿司匹林阳性对照组及姜状三七水提物低、中、高浓度组，采用重量法测定各组体外兔血栓、血块溶解率；采用ADP诱导体外兔血小板聚集，并测定各组聚集率。结果：姜状三七水提物低浓度组对体外兔血栓的溶解率明显高于生理盐水组，差异具有统计学意义（P<0.05），且具有时间依赖性，其中8 h的溶解率达到了72.0%；而姜状三七水提物各浓度组对体外兔血块的溶解率影响不明显（P>0.05）；此外，各浓度的姜状三七水提物及阳性药阿司匹林明显抑制体外兔血小板聚集（P<0.01），其中，中浓度组的血小板聚集抑制率可达53.9%，与阿司匹林组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：姜状三七水提物在一定浓度范围内能促进体外兔血栓溶解和抑制血小板聚集，提示姜状三七具有一定的活血化瘀作用。

【关键词】 姜状三七；活血化瘀；血小板；ADP

【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2024）10-0046-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.10.zgmzmjyyzz202410010

Promoting Blood Circulation and Removing Blood Stasis of Water Extract from Panax zingiberensis

MENG Guoyi1 GUO Wenjuan1 FU Jingfeng1 GAO Li2 XU Yinfeng1*

1.Yunnan University of Business Management，Kunming 650032，China;

2.Yunnan Institute of Materia Medica，Kunming 650100，China

Abstract：Objective The effect of Panax zingiberensi on promoting blood circulation and removing blood stasis was preliminarily discussed in order to lay a foundation for further development and utilization of resources.Methods The experiment is divided into normal saline group， aspirin positive control group， low， medium and high concentration groups of water extracts from Panax zingiberensis. The dissolution rate of thrombus and blood clot in vitro in rabbit was determined by gravimetric method. Platelet aggregation was induced by ADP. The platelet aggregation rate of each group was measured by microplate reader. Result The dissolution rate of rabbit thrombus in vitro in the low concentration group of Panax zingiberensis water extract was significantly higher than that in normal saline group， the difference was statistically significant （P<0.05） and it is time dependent， the dissolution rate of 8h reached 72.0%. The effect of different concentration groups on the dissolution rate of blood clots was not obvious（P>0.05）. The inhibition rate of platelet aggregation in the medium concentration group was 53.9% and compared with aspirin group the difference was not statistically significant （P>0.05）.Conclusion In a certain concentration range， the water extract of Panax zingiberensis can promote thrombolysis and inhibit platelet aggregation in vitro， It is suggested that Panax zingiberensis has certain effect of promoting blood circulation and removing blood stasis.

Key words：Panax zingiberensis; Promoting Blood Circulation and Removing Blood Stasis; Platelets; ADP

血瘀是中医辨证中的一种证型，中医认为血行不畅，壅滞于血脉或停留于脏腑组织器官之内，或离经之血不能及时消散或排出，瘀滞于某一处，呈凝滞状态均为血瘀，常表现为疼痛、肿块、出血及瘀血等病症［1-2］，使用活血化瘀药则是治疗血瘀证的主要手段［2］。西医学［3］认为，血栓与血块是血瘀证的基本病理变化和客观性指标，当凝血功能异常时，血液在组织器官内呈瘀滞状态，此外，血小板的活化、聚集和释放功能异常，均可使血液处于高凝状态，从而易于形成血栓［4］，引发心肌梗塞、脑梗塞及肺栓塞等血栓性疾病，因而，活血化瘀对于该类疾病的治疗具有重要意义。

姜状三七（Panax zingiberensis C.Y.Wu et K.W.Feng.）为五加科人参属植物，系云南特有的物种之一，主要产于云南蒙自、思茅、马关等地区［5］。《中华本草》记载姜状三七味苦，性温，其根及根茎入药，具有活血化瘀、止血、定痛的功效，民间常用于跌打损伤、虚痨咳嗽、外伤出血等病症的治疗［6］。目前，国内外学者对姜状三七的化学成分有较多的研究，主要含有人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg2、人参皂苷Re、竹节参皂苷Ⅳa（4）、姜状三七苷R1、三七素等化学成分［7-9］。但姜状三七药材的药理学研究相对较少，仅见吴其国等学者［10］报道姜状三七水提物具有一定的镇痛与止血作用；然而其活血化瘀作用尚未见报道。因此，本研究通过观察姜状三七水提物对体外兔血栓、血块溶解率的影响，以及对血小板聚集率的影响，初步探讨姜状三七的活血化瘀作用，旨在为姜状三七的进一步研究与利用提供实验和理论依据。

1 材料与方法

1.1 动物 健康家兔30只，雌雄各半，体重（2.5±0.5）kg，由沅江市惠源科教工程有限公司提供，生产许可证号：SCKK（湘）2019-0011。

1.2 供试品与试剂 姜状三七采自云南省腾冲市界头镇黄家寨，由云南天江一方药业有限公司赵仁主任药师鉴定；阿司匹林为拜耳医药保健有限公司产品，国药准字J20171021，批号BJ57405；无水氯化钙购自国药集团化学试剂有限公司，批号20211009；牛血纤维蛋白原购自南京都莱生物技术有限公司，CAS号9001325；凝血酶购自安徽酷尔生物工程有限公司，CAS号9002044；ADP钠盐购自南京都莱生物技术有限公司，CAS号16178486。

1.3 仪器 HH.S21-4型水浴锅为上海博讯实验有限公司产品；Multiskan sky 型全波长酶标仪：美国 Thermo Fisher Scientific 公司产品；Motic M150B 生物显微镜：厦门麦克奥迪电气股份有限公司产品。

1.4 供试品溶液制备 取姜状三七根部171.5 g，粉碎，称取粉末30 g于圆底烧瓶中，加入8倍量的蒸馏水，常温浸泡30 min，100℃下回流提取了3次，每次1 h［11］，合并、浓缩、抽滤得到浓度为 250 mg/mL的浓缩液备用，使用时加蒸馏水分别稀释至 50 mg/mL、120 mg/mL和200 mg/mL，即为低浓度、中浓度和高浓度的姜状三七水提供试溶液。

1.5 姜状三七水提物对体外兔血栓溶解率的测定［12］ 家兔耳缘静脉注射25%乌拉坦（4 mL/kg）麻醉动物，分离右侧颈总动脉，取血10 mL，注入预先加有 0.5% 纤维蛋白原溶液300 μL、50 g/L 氯化钙溶液200 μL、1.0×105 U/L凝血酶溶液300 μL的20 cm硅化胶管中；止水夹夹闭两端管口，恒温水浴（37℃）放置20 min，形成实验性血栓，将血栓切成1 cm的小段，称重，分别放入5 mL西林瓶中，随机分为生理盐水组、阿司匹林阳性对照组以及姜状三七水提物低浓度组（50 mg/mL）、中浓度组（120 mg/mL）和高浓度组（200 mg/mL），每组给药 4 mL，恒温水浴（37℃），分别在1 h、2 h、4 h、6 h和8 h时取出血栓，吸干水分，称重，按下式计算溶解率：

溶解率（%）=[（W-G）/W]×100%

（W：血栓初始质量；G：实验后血栓质量）

1.6 姜状三七水提物对体外兔血块溶解率的测定［12］ 家兔颈总动脉取血 20 mL至空培养皿中，恒温水浴（37℃）15 min，血液凝固后取出，切成 0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm 的实验性血块，用生理盐水冲洗 3 次，吸干水分，称重，放入西林瓶中，按照上述分组分别加入对应药物溶液4 mL，恒温水浴（37℃），分别在24 h、48 h时取出血块，吸干水分，称重，按下式计算溶解率：

溶解率（%）=[（W-G）/W]×100%

（W：血块初始质量；G：实验后血块质量）

1.7 姜状三七水提物对体外兔血小板的聚集实验［13］ 家兔颈总动脉取血15 mL，注入枸橼酸钠润洗过的离心管中，1200 r/min离心10 min，取上清即为富集血小板血浆（PRP），剩余血液4000 r/min离心10 min，取上清即为贫血小板血浆（PPP）。用PPP调整PRP细胞密度至 3.0×108个/mL，将PRP加入96孔板，每孔200 μL，按照前述实验分组，每组给药5 μL，移液枪吹打20 s混匀，37℃孵育5 min，各组分别加入40 μmol/LADP17 μL诱导血小板聚集，立即放入酶标仪，波长655 nm，动态测定吸光度A，每30 s测定1次，间歇振摇20 s，直至吸光度A不再变化，按下式分别计算血小板聚集率与抑制率：

血小板聚集率（%）=（At0-At）/At0×100%

血小板聚集抑制率（%）=（生理盐水组聚集率-给药组聚集率）/生理盐水组聚集率×100%

1.8 统计学分析 数据采用均值加减标准差（x±s）表示，使用IBM SPSS 27.0软件进行统计分析。多组比较使用One-way ANOVA单因素方差分析，方差齐时使用LSD统计方法进行组间两两比较，方差不齐时用Dunnetts T3法检验，以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 姜状三七水提物对体外兔血栓溶解率的影响 表1显示，姜状三七水提物组的血栓溶解率有明显升高趋势，且具有时间依赖性，但与生理盐水组比较，仅低浓度组的差异具有统计学意义（P<0.05），8 h的血栓溶解率达到了72%，较生理盐水组高约1倍；阿司匹林组的血栓溶解率与生理盐水组比较，差异没有统计学意义（P>0.05）。

2.2 姜状三七水提物对体外兔血块溶解率的影响 表2显示，与生理盐水组比较，姜状三七水提物低、中和高浓度组的血块溶解率虽无统计学差异（P>0.05），但均有明显升高趋势，在48 h时，分别达到了61.5%、63.3%和55.4%，而阿司匹林组的血块溶解率与生理盐水组比较亦无统计学显著差异（P>0.05）。

2.3 姜状三七水提物对体外兔血小板聚集率的影响 表3显示，与生理盐水组相比，姜状三七水提物各浓度组及阳性对照药阿司匹林组的血小板聚集率显著降低（P<0.01），其中姜状三七水提物中浓度组的血小板聚集抑制率高达53.9%，与阿司匹林组相比，差异无统计学意义（P>0.05），提示姜状三七水提物能够抑制体外兔血小板的聚集，且作用强度与水提物浓度有关。

3 讨论

血栓是由于血管内膜受损，血液中的不溶性纤维蛋白、沉积的血小板、积聚的白细胞和红细胞沉积于受损处，造成血流部分或完全瘀塞，导致组织血液供应障碍，引发血栓性疾病，西医通常采用溶栓药进行治疗［14］，中医则常用活血化瘀药物治疗该类疾病。在本实验条件下，发现低浓度的姜状三七水提物对血栓具有一定的促血栓溶解作用，而中高浓度的姜状三七水提物仅有促溶趋势，表明姜状三七水提物在一定的浓度范围内对血栓有溶解作用。血块是由于血管损伤破裂，血液外渗流出，凝积于组织内或皮肤表面形成的血肿块，临床上也常用活血化瘀药进行治疗［1，15-17］；本研究结果显示，姜状三七水提物对血块仅有促溶趋势，并未达到统计学意义，说明姜状三七水提物对血栓的溶解作用更强。此外，血小板聚集在血栓的形成过程中起到重要作用，本研究采用血小板聚集诱导剂ADP诱导体外兔血小板凝集，发现姜状三七水提物能够抑制ADP诱导的血小板聚集，其中浓度组的效价与阿司匹林组相当，提示姜状三七水提物还具有一定的抗血小板聚集作用；据报道人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg2、人参皂苷Re，以及竹节参皂苷Ⅳa（4）也具有一定的抗血小板聚集作用［18-20］，但姜状三七的抗血小板聚集作用是否与所含的这些化学物质有关还有待进一步研究。此外，吴其国等［10］学者观察到灌胃给予小鼠姜状三七水提物还具有一定的止血作用。这些研究结果均初步提示姜状三七水提物具有溶栓、抗栓和止血作用，其相应的物质基础值得深入研究。

4 结论

姜状三七水提物具有一定的溶栓和抗栓作用，为姜状三七的活血化瘀功效提供了实验依据。

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（收稿日期：2023-11-03 编辑：陶希睿）

基金项目：云南省教育厅科学研究基金（2019J0973）。

作者简介：蒙国懿（1991—），男，壮族，硕士，讲师，研究方向为药理学教学与研究。E-mail：mgyfifa7@163.com

作者简介：许银凤（1982—），女，汉族，硕士，副教授，研究方向为中药学教学与研究。E-mail：95432849@qq.com