基于撤药分析法的当归系列药对在新生化颗粒中的作用贡献研究

庞汉青+王军+唐于平+吴亮+许会芹+金益+朱振华+黄胜良+孙大正+段金廒

[摘要]比較评价新生化颗粒缺失当归系列药对前后对急性血瘀大鼠血液流变学和凝血功能的影响，探讨当归系列药对在新生化颗粒中的活血作用贡献。采用冰水浴和皮下注射盐酸肾上腺素共同复制急性血瘀大鼠模型。根据全血黏度（WBV）、血浆黏度（PV）、血沉（ESR）和红细胞压积（HCT）等指标，观察新生化颗粒缺失当归系列药对前后对急性血瘀大鼠血液流变学的影响；以血小板最大聚集率（ADP）、凝血酶时间（TT）、凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、血浆纤维蛋白原含量（FIB）观察新生化颗粒缺失当归系列药对前后对血瘀大鼠的血小板聚集和凝血功能的影响。采用多指标综合指数法和主成分分析法综合评价当归系列药对在新生化颗粒中的活血作用贡献。研究结果显示，与正常组比较，模型组的各血液流变学和凝血功能指标均有统计学差异（P<0.01）；与模型组比较，新生化颗粒缺失当归系列药对前后对急性血瘀大鼠的血液流变学和凝血功能的多个指标皆有一定的改善作用。多指标综合指数法和主成分分析法综合评价得出，新生化颗粒对血瘀大鼠的调节作用优于拆方组和生化汤组；新生化颗粒缺失当归系列药对后，各给药组的活血效应均有一定程度的降低；缺失不同的当归药对后对原方的活血效应影响不同，当归系列药对在新生化颗粒中的活血作用贡献的顺序为：当归-益母草>当归-川芎>当归-红花>当归-炙甘草>当归-桃仁>当归-姜炭。该研究表明，当归系列药对是新生化颗粒的重要组成部分，不同的当归系列药对在新生化颗粒中的活血作用贡献不同；且当归-益母草药对在全方中的活血作用贡献最大，与新生化颗粒的组方结构（重用益母草）以及益母草“活血行滞、祛瘀生新”的功效相一致，该方法为新生化颗粒的临床合理应用提供了科学依据，并为复杂方剂的配伍作用研究提供了一定的方法参考。

[关键词]新生化颗粒； 当归； 药对； 活血化瘀； 多指标综合指数法； 主成分分析； 撤药分析法

[Abstract]Xin-Sheng-Hua granule （XSHG） is a popular remedy commonly used in clinic for the treatment of lochiostasis after delivery. To comparatively investigate the roles of herb pairs containing Angelicae Sinensis Radix （Danggui） upon the formula by evaluating the blood coagulation and hemorheology function in acute blood stasis rats， acute blood stasis rat model was established by ice water bath and subcutaneous injection of adrenaline. And the blood stasis mice were administrated intragastrically with different samples of the formula minus herb pairs containing Danggui and the whole formula （XSHG， SHD， DY， DC， DT， DH， DJ and DZ）. The whole blood viscosity （WBV）， plasma viscosity （PV）， erythrocyte sedimentation rate （ESR） and haematocrit （HCT） were applied to evaluate the effects of the formula minus herb pairs containing Danggui on hemorheology of blood stasis rats. The thrombin time （TT）， activated partial thromboplastin time （APTT）， prothrombin time （PT）， and plasma fibrinogen （FIB） were used to observe the effects of the formula minus herb pairs containing Danggui on blood coagulation function of blood stasis rats. Additionally， the maximum aggregation induced by adenosine diphosphate （ADP） was tested to observe the effect of different samples on platelet aggregation index of blood stasis rats.Afterwards， multi-attribute comprehensive index methods and principal component analysis were both applied to comprehensively assess the total effects of the formula minus herb pairs containing Danggui on promoting blood circulation and dissipating blood stasis. Compared with normal group， the hemorheological parameters and coagulation indexes of model group had statistical differences （P<0.01）. Compared with model group， different samples （XSHG， SHD， DY， DC， DT， DH， DJ and DZ） could improve the blood hemorheology indexes， coagulation parameters and platelet aggregation in acute blood stasis rats. According to multi-attribute comprehensive index methods and the principal component analysis， the effects of promoting blood circulation by removing blood stasis became poor when excluding herb pairs containing Danggui from the formula， the sample DY and DC had the weakest effect of activating blood circulation and dissipating blood stasis， and the effect of sample DY was slightly poorer than DC. The orders of contribution of herb pairs containing Danggui on the formula were Danggui-Yimucao>Danggui-Chuanxiong>Danggui-Honghua>Danggui-Zhigancao>Danggui-Taoren>Danggui-Jiangtan. In conclusion， various herb pairs containing Danggui played different roles on the effects of improving the abnormality of hemorheology and coagulation function. And the herb pairs Danggui-Yimucao were particularly important for the formula， which was consistent with the characteristics of XSHG and the traditional effect of Yimucao. Moreover， it could lay foundation to further reveal the compatibility mechanism of XSHG.

[Key words]Xin-Sheng-Hua granule； Angelicae Sinensis Radix； herb pair； promoting blood circulation； multi-attribute comprehensive index method； principal component analysis； withdrawal analysis

doi：10.4268/cjcmm20162120

新生化颗粒来源于清代傅青山的妇科名著《傅青主女科》的“生化汤”，由当归、益母草、川芎、桃仁、红花、干姜（碳）、甘草（炙）7味中药组成，历来被称为“产后第一方”^[1-2]。当归补血活血、调经止痛，为方中君药；川芎活血行气、祛风止痛，桃仁活血化瘀，共为臣药；炮姜走血分、温中散寒，为佐药；炙甘草调和诸药，为使药。新生化颗粒在此基础上，加入益母草和红花后，大大加强了原“生化汤”活血祛瘀的作用，共奏温经活血，化瘀生新，调经止痛功效^[3]。临床上，当归常与其他许多药味配伍使用，体现出良好的协调或制约作用，从而产生了一系列与当归相关的药对^[4]。在新生化颗粒中，君药当归分别与其他6味药都能形成药对，可能对新生化颗粒的疗效发挥了重要的作用。课题组前期对当归-川芎、当归-红花药对的配伍均有研究，发现其在活血、养血等方面皆具有协同增效的作用^[5-6]。然而，不同当归系列药对在新生化颗粒中具体的作用贡献大小仍不得而知，从而制约了该方的进一步发展。近年来，整方研究和拆方研究策略已经被广泛用于中药复方配伍研究中^[7-8]。其中，“撤药分析法”通过缺失复方中的1味药或1组药后，进而比较评价撤出的药味对原方功效的贡献度，对揭示中药复方的配伍规律发挥了重要的作用。

本文采用“撤药分析法”分析当归系列药对在新生化颗粒中的功能和作用机制，以新生化颗粒（XSHG）、新生化颗粒缺失各当归系列药对的样品：DY样品（新生化颗粒缺失当归-益母草）、DC样品（缺失当归-川芎）、DT样品（缺失当归-桃仁）、DH样品（缺失当归-红花）、DJ样品（缺失当归-姜炭）、DZ样品（缺失当归-炙甘草）和生化汤（SHD）为研究对象，观察不同给药组对急性血瘀大鼠活血效应的影响，活血效应包括血液流变学、凝血功能及血小板聚集等指标。并通过多指标综合指数法进行效应整合与比较分析，结合主成分分析法，以期在整体动物水平探讨当归系列药对在新生化颗粒中的活血作用贡献大小，从药对层面揭示新生化颗粒配伍作用规律，从而促进该方在中医临床更有效地应用，并为中药配伍药物相互作用现代基础研究提供思路与方法的参考。

1 材料

1.1 动物 SD大鼠，110只，雌性，SPF级，体重230～250 g，购于上海杰思捷实验动物有限公司，合格证号SCKY（沪）2013-0004。大鼠购入后检疫与驯化1周，使其适应环境并剔除体质差异较大的动物，实验期间动物自由进食、饮水，昼夜节律正常。

1.2 试剂 盐酸肾上腺素注射液（上海禾丰制药有限公司，批号150609）；复方丹参滴丸（天士力制药集团股份有限公司，批号151227）；氯化钠（国药集团试剂有限公司，批号150928）；水合氯醛（国药集团试剂有限公司，批号20160109）；柠檬酸钠（国药集团试剂有限公司，批号20151105）。

1.3 仪器 LG-PABER-1型血小板聚集凝血因子分析仪（北京世帝科学仪器公司）；LG-R-80-B电脑血液黏度测试仪（北京世帝科学仪器公司）；YRE-301型旋转蒸发仪（巩义市予華仪器有效责任公司）；超纯水仪（南京易普易达科技发展有限公司）；电子分析天平（BT125D，sartorius，德国）；Anke LXJ-ⅡB离心机。

1.4 样品制备 当归（产地甘肃岷县，批号151021）、益母草（产地广东汕头，批号150916）、川芎（产地四川彭州，批号151018）、桃仁（产地安徽亳州，批号150906）、红花（产地新疆，批号140816）、姜炭（产地山东安丘，批号160108）、炙甘草（产地内蒙古，批号151108）等药材均由江苏省仁寿药业有限公司提供，经南京中医药大学严辉老师鉴定，符合《中国药典》（2015年版）项下标准。

新生化颗粒提取物的制备：称取当归、益母草、川芎、桃仁、红花、炙甘草和姜炭的混合药材共699 g，7味药材的比例依次为80∶100∶30∶8∶5∶5∶5。用8倍量水热回流提取3次，第1次2 h，后2次各1.5 h（模拟临床上新生化颗粒的制备）。自然冷却后，倾出药液，过滤药渣，合并3次水提液，得到新生化颗粒的水提物。将新生化颗粒水提液于60 ℃下减压浓缩，得到新生化颗粒提取物（XSHG）样品。

新生化颗粒缺失各当归系列药对的样品制备：从全方中分别减掉当归-益母草、当归-川芎、当归-桃仁、当归-红花、当归-姜炭、当归-炙甘草，其他5味药的比例皆与原方相同。用8倍量水提取3次，分别用时2，1.5，1.5 h，合并3次水提液，分别得缺失各当归系列药对的新生化颗粒样品的提取物。将各样品的水提液分别于60 ℃下减压浓缩，分别得到DY（缺失当归-益母草）、DC（缺失当归-川芎）、DT（缺失当归-桃仁）、DH（缺失当归-红花）、DJ（缺失当归-姜炭）和DZ（缺失当归-炙甘草）提取物。

生化汤提取物品的制备：按照当归-川芎-桃仁-姜炭-炙甘草24∶9∶6∶2∶2配比，称取生化汤组方药材共430 g。用8倍量水提取3次，用时依次为2，1.5，1.5 h，合并3次水提液，将生化汤样品的水提液于60 ℃下减压浓缩，则得到生化汤（SHD）提取物。以上所有样品均4 ℃冷藏备用。

2 方法

2.1 大鼠血瘀模型的复制 除空白组外，模型组和各给药组的大鼠分别于大鼠皮下注射盐酸肾上腺素注射液，剂量均为0.8 mg·kg^-1，共2次，2次间隔时间4 h。大鼠第1次皮下注射盐酸肾上腺素2 h后，将其置于0～2 ℃的冰水中游泳4 min，复制大鼠急性血瘀模型。最后1次皮下注射盐酸肾上腺素后，所有组的大鼠均禁食不禁水，12 h后颈总动脉采血测血液流变学和凝血功能的相关指标^[9-11]。

2.2 分组与给药 大鼠饲养10 d后，将110只大鼠随机分为11组，每组10只，分别为正常组（K）、模型组（M）、复方丹参滴丸阳性药组（DSDW）、生化汤组（XSD）、新生化颗粒组（XSHG）和新生化颗粒缺失各当归系列药对的样品组（DY，DC，DT，DH，DZ，DJ）。阳性药组灌胃给予复方丹参滴丸，灌胃剂量为0.10 g·kg^-1；正常组与模型组大鼠给予等容积生理盐水；XSHG给药组（通常，新生化颗粒的临床用量为36 g，本实验依此为基准，设定新生化颗粒的临床1倍量，总量为36 g），XSHG组按新生化颗粒的临床1倍量，继而通过人与大鼠体表面换算公式计算大鼠的灌胃剂量，即以4.86 g·kg^-1的剂量灌胃给药。考虑到其他因素的影响，其他各给药组（SHD，DY，DC，DT，DH，DZ，DJ）的给药剂量均与XSHG给药组相同，以评价当归系列药对在新生化颗粒中的作用贡献。所有大鼠均统一灌胃0.01 mL·g^-1，每日早晚各1次，共7次。于第5次给药后除正常组外，其余各组大鼠均按照相应的造模方法复制急性血瘀模型。各组大鼠第7次给药30 min后颈总动脉取血，及时测定血液流变学和凝血功能相关指标。给药剂量按照动物体表面换算系数计算：人临床用量×0.018/200×1 000×临床等效量的倍数。

2.3 血液流变学和凝血功能指标检测 各组大鼠均于末次给药30 min后，在10%水合氯醛麻醉下，颈总动脉插管取血，以枸橼酸钠（3.8%）1∶9抗凝。吸取1 mL全血置于压积管中，静置1 h记录血沉（ESR）。然后3 000 r·min^-1离心30 min，记录红细胞压积（HCT）。取全血800 μL采用LG-R-80 B电脑血液黏度测定仪测定各切变率下的全血黏度（WBV）。余下的全血，先800 r·min^-1离心10 min吸取富血小板血浆（PRP），然后3 000 r·min^-1离心10 min吸取贫血小板血浆（PPP）。血小板聚集率[ADP（%）]的测定采用PRP，凝血4项[APTT（s），PT（s），TT（s），FIB（g·L^-1）]的指标采用PPP，仪器均为LG-PABER-1型血小板聚集凝血因子分析仪。血浆PT，TT，APTT，FIB的测定按照试剂盒说明书进行。

2.4 统计学分析 实验数据采用 SPSS 19.0软件中的Descriptives进行统计，实验结果采用±s表示；与空白组和模型组的比较，采用ANOVA中的Dunnett法进行组间两两比较，P< 0.05表示差异具有统计学意义。

2.5 效应整合 采用多指标综合指数法，对PV，WBV，HCT，ESR，APTT，TT，PT，FIB，ADP多个指标进行单一化处理，计算各给药组总的活血效应值。首先，对各个指标数据进行标化^[12]。相比于模型组，若正常组的各指标值（Value）升高，则V标化=（V给药-V模型）/V模型；若正常组的指标值降低，则V标化=（V模型-V给药） /V模型。标化指标权重的确定首先根据各指标在临床中的重要性，赋予各指标以相应的权重。查阅近10年关于急性血瘀的文献150余篇，其中144篇检测了WBV，137篇检测了PV，131篇检测了HCT，98篇检测了FIB，72篇检测了ESR，59篇检测了PT，56篇检测了TT，89篇检测了HCT，43篇检测了ADP，31篇检测了APTT。其次结合同行专家对所测指标在活血化瘀效应中的重要程度打分，最后再结合变量重要性投影值（variable importance in the projection， VIP）處理实验结果，综合给出各指标的权重系数，总活血效应值等于各个指标的标化值乘以相应权重的加和值。各指标VIP的计算如下：首先将每组大鼠的所有指标导入MassLynx v4.1（Waters公司）软件的EZ info中，采用主成分分析法（principal components analysis， PCA）中的Pareto处理得到各组活血疗效的得分图；然后采用偏最小二乘法（partial least squares method， PLS）分析得到各指标的VIP。根据VIP的大小判断各个指标的相对重要程度，若VIP>1，则一般认为该指标的贡献比较大^[12-13]。最终各指标取权重系数如下：APTT，TT，ADP，PT，ESR的权重系数为1；FIB的权重系数为2；PV，WBV，HCT的权重系数为3。采用多指标综合指数法中的总活血化瘀效应值与主成分分析法的得分图综合评价当归系列药对在新生化颗粒中的活血效应贡献。

3 结果

3.1 新生化颗粒缺失当归系列药对前后对急性血瘀大鼠全血黏度和血浆黏度的影响 不同给药组的全血黏度实验结果见表1，图1，新生化颗粒缺失当归系列药对前后对血浆黏度的影响见图2。与正常组相比，模型组的WBV和PV均明显升高，差异有统计学意义（P<0.01）。相比于模型组，各给药组的PV和WBV均有不同程度的降低；其中，阳性药组（DSDW）于不同切变率下的WBV和PV较模型组均显著降低（P<0.01）。WBV中，DY组和DC组在不同切变率下的全血黏度均无显著性差异；DH组在切变率为30和1 s^-1时的黏度有显著性差异（P<0.05）；其他各给药组在不同切变率下的全血黏度均显著降低（P<0.05）。PV中，除了DY给药组外，其他各给药组的差异较模型组均有统计学意义（P<0.01）。与XSHG组比较，DSDW组在不同切变率下的WBV和PV均无显著性差异，表明新生化颗粒与复方丹参滴丸在改善血液流变学方面具有相似的疗效；DY组和DC组在各切变率下的全血黏度均有显著性差异（P<0.05）；DH组除了切变率30 s^-1下没有统计学差异外，其余切变率下的全血黏度显著升高（P<0.05）；SHD组和DZ组在切变率1 s^-1的WBV均较XSHG组明显升高（P<0.05）；DY组和DH组PV均显著升高（P<0.01）。

3.2 新生化颗粒样品缺失当归系列药对前后对急

性血瘀大鼠ESR和HCT的影响 各给药组的ESR和HCT结果见图3。与正常组比较，模型组的ESR，HCT均有明显升高，两者差异皆具有统计学意义（P<0.01）。与模型组相比，DSDW组的ESR和HCT显著性降低（P<0.01）；各给药组的ESR和HCT均有不同程度的降低；各给药组的ESR均明显降低（P<0.01）；除了DC和DT组外，其他各给药组的HCT显著降低（P<0.05）。与XSHG组比较，DSDW组的ESR和HCT有所升高，但两者无统计学差异；DY，DH和DZ组的ESR明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；DY，DC和DH组的HCT均显著升高（P<0.05）。

3.3 新生化颗粒缺失当归系列药对前后对急性血瘀大鼠凝血功能和血小板聚集的影响 各给药组对急性血瘀大鼠的凝血功能和血小板聚集功能影响的实验结果见图4。与正常组相比，模型组的凝血功能指标（TT，APTT，PT，FIB）和ADP均有显著性差异（P<0.01），其中TT，APTT，PT，ADP均明显降低，FIB和ADP含量显著升高。与模型组相比，DSDW组和XSHG组对急性血瘀大鼠的凝血4项和ADP有明显的改善作用，差异皆有统计学意义（P<0.05）；SHD组的TT，PT和ADP均有明显的改善作用（P<0.05）；DY组TT显著延长（P<0.01）；DC组的相关指标均无明显改善作用；DT组和DH组的APTT均明显增加，ADP均显著降低，差异皆有统计学意义（P<0.05）；DJ组和DZ组的TT，PT和APTT均显著延长，ADP含量均显著降低，且差异具有统计学意义（P<0.05）。此外，新生化颗粒缺失当归系列药对后的各给药组对急性血瘀大鼠的FIB指标均无明显的改善作用。与XSHG组比较，TT中，除了DY组外，其他各给药组均显著缩短（P<0.05）；PT中，SHD，DY和DC组明显缩短（P<0.05）；APTT中，DY，DC和DH组均显著缩短（P<0.05）；FIB中，除DT组外，其他各给药组均明显升高（P<0.01）；ADP中，DY，DC和DH组均显著升高（P<0.05）。此外，DSDW组的TT，APTT和FIB较XSHG组均有所降低，PT和ADP有所升高，但皆无显著性差异。

3.4 基于主成分分析法的当归系列药对的活血化瘀效应评价 将所有血瘀相关指标的原始数据导入MassLynx v4.1软件（Waters公司）的EZ info中，通过降维矩阵建立包含2个主成分轴t[1]和t[2]的平面空间的PCA分类模型，见图5。主成分轴t[1]是源数据矩阵方差最大方向，主成分轴t[2]是方差的次大方向，降维过程中，最大限度保留有用信息，寻找能够使不同组别指标得到最大分离的方向。从图5中可以看出，正常组的中心大约是（6，-0.5），模型组的中心大约是（-5.5，1），复方丹参滴丸组的中心大约是（2，-0.5），新生化颗粒组的中心大约是（2.5，0.5），生化汤组的中心约在（1，-0.25），新生化颗粒缺失当归系列药对的DY，DC，DT，DH，DJ，DZ样品组的中心依次大约是（-3.5，1），（-4.5，-1），（1，-1.5），（-1.5，-1），（0.5，0），（0，1）。模型组的中心离正常组的中心最远，说明血瘀模型造模成功；DSDW组离空白组较近，表明DSDW对急性血瘀大鼠的改善作用较好；较其他拆方组，新生化颗粒组距离空白组最近且离阳性药DSDW组较近，说明新生化颗粒组的活血化瘀效应最好，在活血化瘀方面具有与复方丹参滴丸相似的治疗效果；DJ组、DT组和生化汤组位于正常组和模型组中间位置，表明它们对急性血瘀大鼠的改善作用弱于新生化颗粒组；DY，DC和DH组距离模型组较近，表明DY，DC和DH组的改善作用较差；其中DY组距离模型组最近，说明DY组对急性血瘀大鼠的改善作用最差。

3.5 基于多指标综合指数法的当归系列药对的活血化瘀效应整合 将各组大鼠的所有指标导入Mass Lynx v4.1（Waters公司）软件的EZ info中，采用偏最小二乘法（PLS-DA）分析每个指标的VIP，VIP越大，说明该指标对分类的贡献越大。WBV200，WBV30，WBV5，HCT，FIB，TT，APTT，ADP和ESR的VIP均較大，PT和WBV1的数值较小，见图6。依据本课题组前期的多指标综合指数法对WBV200，WBV30，WBV5，WBV1，PV，HCT，FIB，TT，PT，APTT，ADP和ESR各指标进行归一化处理，得到各组的总活血化瘀效应值，见表2，结果表明新生化颗粒较生化汤的活血效应好，缺失当归系列药对后，各样品总的活血效应值均有一定程度的减少。新生化颗粒缺失各当归系列的总活血效应值的大小顺序依次为：DJ>DT>DZ>DH>DC>DY，这说明DJ和DT给药组的总活血效应最好。这些研究结果表明，生化汤中增加益母草和红花2味药后（新生化颗粒），大大加强生化汤的活血化瘀疗效；而新生化颗粒中缺失当归系列药对后，原方的活血化瘀疗效均有不同程度的降低，尤其是缺失当归-益母草药对后，活血化瘀效应大大减弱，侧面说明当归-益母草药对在新生化颗粒中的活血化瘀的作用贡献最大。

3.6 结合主成分分析法和多指标综合指数法综合评价当归系列药对在新生化颗粒中的活血作用贡献 综合多指标综合指数法和主成分分析法中的总活血化瘀效应结果可得，样品DY和DC的总活血效应最差，样品DJ和DT的总活血效应最好，2种分析方法所得结果相一致。当归系列药对在新生化颗粒中的活血作用贡献的顺序为：当归-益母草>当归-川芎>当归-红花>当归-炙甘草>当归-桃仁>当归-姜炭。其中，药对当归-益母草在全方中的活血作用贡献度最大，与新生化颗粒的组方结构（重用益母草）以及益母草“活血行滞、祛瘀生新”的功效相一致。

4 讨论

中药复方配伍规律的研究有助于揭示复方配伍的科学内涵及相关的物质基础，并为药物的临床合理应用指明方向。目前，中药复方的研究方法主要有2种，整方研究和拆方研究。整方研究即将复方视为整体后进行化学分析和药理学研究，尽管能够反映其药效和临床应用的相关程度，然而由于复方组成的复杂性，该方法难以解释其真正的药效物质。而拆方研究对于阐明经方配伍的科学性、确定方中的主要药效物质和新药的研制都有一定的指导作用^[8]。本研究中，同时结合整方研究和拆方研究，以新生化颗粒为研究对象，通过比较新生化颗粒缺失各当归系列药对前后的活血化瘀功效，以揭示药对在新生化颗粒中的配伍作用，进而阐明新生化颗粒组方的科学内涵。

为了综合反映新生化颗粒及其拆方的活血化瘀药效，本实验选择了血液流变学（WBV，PV，HCT，ESR）、凝血功能（TT，PT，APTT，FIB）与血小板聚集功能（ADP）等多个效应指标来分别评价其药效。然而针对同一指标，不同的药物对其反应灵敏度往往不同，导致很难直观评价不同样品的活血效应。因此，需要采用“标化”的方法统一所有效应指标的计量单位，形成整合效应以综合评价不同样品的活血效应。多指标综合指数法可以将量纲不同的效应指标转化成无量纲的相对评价值，是一种能反映事物相对水平和整体变动的一种综合评价方法^[10]。多指标综合指数法的核心在于赋予指标一定的权重。与传统的权重系数确定的方法相比，本实验不仅仅采用了通常采用的专家评分法，进而考虑了不同指标在临床中出现的频次，同时结合了PLS-DA中的VIP对血液流变学和凝血功能指标的评分，最后综合确定其权重系数，使权重系数的确定更加趋于合理^[14-16]。为了验证多指标综合指数法的合理性，笔者又采用了PCA的方法分析了各组所有血瘀相关的源数据，PCA通过将复杂因素归结为几个主成分，使得问题简单化，同时可以得到更加科学有效的结果，有助于客观地反映各样本间的现实关系^[17]。

通过多指标综合指数法结合PCA对急性血瘀大鼠的血液流变学和凝血功能指标进行了效应整合。结果显示，新生化颗粒和生化汤样品均能一定程度改善急性血瘀大鼠的血液流变学及凝血功能相关指标，新生化颗粒的活血效应明显优于生化汤，说明生化汤中加入益母草和红花2味药组成新生化颗粒后，明显增加了原生化汤的活血效应。在新生化颗粒中，缺失不同的当归系列药对后对原方的活血效应有不同程度的影响，缺失药对当归-益母草和当归-川芎后，原方的活血效应大大减弱。益母草有活血调经、利尿消肿的作用，川芎有活血行气的作用，两者与当归配伍组成相应药对后，在活血方面会产生协同增效的作用，这与本实验得到的结果具有一致性。后期将进一步比较新生化颗粒与当归-益母草药对的化学化瘀药效作用，并基于分子生物学和代谢组学等方法，以期揭示当归-益母草药对在新生化颗粒中活血作用的物质基础。这些研究结果有利于从药对角度揭示新生化颗粒的配伍效应，为新生化颗粒在临床中更好的应用提供了科学依据，也为复杂方剂的配伍作用研究提供了一定的方法参考。

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[责任编辑 陈玲]