大蓟与小蓟饮片的鉴别研究

宋晓光 刘晓静 康帅 刘学杰 王军栋 张惠惠 孙福东 许红

【摘 要】   目的： 对大蓟和小蓟饮片进行鉴别研究，为其质量标准的完善和提升提供思路参考。 方法： 应用体式显微镜和光学显微镜等设备及数码成像技术，从叶片、茎、苞片、冠毛等细节特征，以及横切面、粉末的显微特征，对大蓟与小蓟饮片进行鉴别研究；采用硅胶GF254薄层板，以乙酸乙酯-甲酸-水（8∶ 1∶ 1）为展开剂，在紫外灯254nm下检视，建立薄层鉴别方法。 结果： 通过研究发现，大蓟和小蓟的叶片、茎、苞片、冠毛存在明显差别，显微特征差异性较小，粉末特征只在下表皮细胞上存在一定差异，薄层鉴别方法灵敏度高、重现性好，专属性强。 结论： 通过研究归纳了大蓟和小蓟饮片的鉴别特征，可为二者的鉴别提供一定的实验基础支持，并为其质量标准的完善提供有益思路。

【关键词】  大蓟；小蓟；鉴别；薄层鉴别

【中图分类号】R282.5   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2024）08-0054-07

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.08.zgmzmjyyzz202408012

Studyonthe Identification of Traditional Chinese Medicine Pieces of Cirsii Japonici Herba and Cirsii Herba

SONG Xiaoguang 1 LIU Xiaojing 1 KANG Shuai  2*  LIU Xuejie 1 WANG Jundong 1 ZHANG Huihui 1 SUN Fudong 3 XU Hong 1

1.Yantai Institutes for Food and Drug Control，Yantai 264003，China;

2.National Institutes for Food and Drug Control， Beijing 100050，China;

3.Yantai Yuhuangding Hospital， Yantai 264000，China

Abstract：  Objective  To study the identification of Cirsii Japonici Herba and Cirsll Herba and toprovide ideas for the improvement of their quality standards. Methods  Stereo microscope and optical microscopeanddigital imaging technologywere used to observe and record the characters of Cirsii Japonici Herba and Cirsii Herba，including leaves， stems， bracts， crown hairs，powder，transverse section.Using silica gel Gf254 thin-layer plate， ethyl acetate-formic acid-water（8∶ 1∶ 1） as developing agent and examined under UV lamp 254 nm. Results  There are obviously differences in leaves， stems， bracts， crown hairs between them， andlittle difference in lower epidermal cell;the TLC method has high sensitivity，good reproducibilityand more specificity. Conclusion  Through research， the identification characteristics of Cirsii Japonici Herba and Cirsii Herba decoction pieces were summarized， it can provide some experimental support for the identification of them， and provide useful ideas for the improvement of their quality standards.

Key words： Cirsii Japonici Herba; Cirsii Herba;Identification;TLC

大蓟为菊科植物蓟 Cirsium japonicum  Fisch．ex DC．的干燥地上部分，具有凉血止血、散瘀解毒消痈的功效，用于衄血、吐血、尿血、便血、崩漏、外伤出血、痈肿疮毒  ［1］ 。蓟属植物在我国分布有50余种，其中10余种可作药用  ［2］ 。小蓟为菊科蓟属植物刺儿菜 Cirsium setosum （Willd.）MB.的干燥地上部分  ［3］ 。大蓟和小蓟饮片外形相似，成分相近  ［4］ ，但临床应用各有侧重，不可混淆使用。《新修本草》载“大蓟生山谷，根疗痈肿；小蓟生平泽，不能消肿也”；《本草备要》载“小蓟力微，不能如大蓟之消痈毒”  ［5-6］ 。笔者根据近期市场调研发现，商品药材及饮片中存在小蓟冒用大蓟的情况。

本文应用体式显微镜、光学显微镜对大蓟和小蓟进行了性状和显微鉴别研究，通过体式显微镜及其数字化成像系统对大蓟和小蓟的叶片、茎、苞片、 冠毛进行鉴别研究；通过光学显微镜及其数字化成像系统对二者的叶片、茎的横切面及其粉末进行鉴别研究。在此基础上，以两者差异成分柳穿鱼叶苷为对照物质，建立薄层色谱鉴别方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器 尼康D780型数码相机（尼康公司）；Olympus BX51 型透射光显微镜及DP74 型CCD 成像系统（OLYMPUS 公司）； Olympus SZX7型体式显微镜（OLYMPUS 公司）；CM1950型冷冻切片机（徕卡公司）；METTLER TOLEDO XPE205D电子天平（梅特勒-托利多国际贸易（上海）有限公司）；KQ-500B型超声清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；CAMAG TLC Visualizer 2 薄层色谱数码成像系统（瑞士卡玛公司）；CAMAG ATS 4全自动点样仪（瑞士卡玛公司）。

1.2 试剂 水合氯醛（中国医药集团上海化学工业公司），丙三醇（国药集团化学有限公司），乙醇等试剂为分析纯试剂（北京化工厂）；薄层层析硅胶GF254板（烟台市化学工业研究所），聚酰胺薄膜（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）。乙醇、三氯化铝、硫酸、甲苯、乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酰丙酮、丁酮，以上均购于国药集团化学试剂有限公司；甲酸（天津市标准科技有限公司），以上均为分析纯。甲醇（国药集团化学试剂有限公司），为色谱纯。

蒙花苷（中国食品药品检定研究院，批号：111528-201911）；大蓟对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121411-201903）；柳穿鱼叶苷（中国食品药品检定研究院，批号：111728-201703）；小蓟对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121436-201803）。

1.3 样品 5批大蓟样品均来自中心内合格检品。5批小蓟样品为自采及市场收集，由烟台市食品药品检验检测中心王军栋副主任中药师分别鉴定为菊科植物蓟 Cirsium japonicum  Fisch. ex DC.、菊科植物刺儿菜 Cirsium setosum （Willd.）MB.的干燥地上部分。

2 方法

2.1 性状特征

2.1.1 整体性状观察 将样品放在白色背景台面上，用数码相机进行拍摄。

2.1.2 特征性状观察 挑选样品中叶片、苞片，放入水中浸软后，用擦镜纸吸去表面水分，压平后盖上载玻片，在Olympus SZX7型体式显微镜下观察并拍摄记录特征；将冠毛压平后盖上载玻片，在Olympus SZX7型体式显微镜下观察并拍摄记录特征。将茎在Olympus SZX7型体式显微镜下，分别对表面和断面进行观察并拍摄特征。

2.2 显微特征

2.2.1 横切面 挑选样品中叶片、茎，放入水中浸泡4 h后，用擦镜纸吸去表面水分，切制成大小适宜的块片，在冷冻切片机冷台底部滴加少量包埋剂，放入冷冻机中，待温度降至-20 ℃包埋剂基本固化后，将样品置于包埋剂中，包埋剂逐层包埋至样品被完全包埋为止。将样品预冻后，置于-40 ℃样平台上冷冻10 min后，将冷冻好的样品固定好，在-20 ℃下进行切制，选取平整薄片置于载玻片上，加水合氯醛2滴，加热，透化，盖上盖玻片，放冷后置显微镜下观察并拍摄特征。

2.2.2 粉末特征 将各样品粉末过5号筛，挑取少许置载玻片上，滴加水合氯醛试液1～2滴，盖上盖玻片，置于 OLYMPUS BX51-DP74透射光显微镜及CCD数码成像系统下观察并拍摄特征。

2.3 薄层鉴别

2.3.1 对照品溶液的制备 取柳穿鱼叶苷对照品、蒙花苷对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1 mL含1 mg的对照品溶液，即得。

2.3.2 对照药材溶液的制备 称取大蓟对照药材、小蓟对照药材各1 g，加甲醇10 mL，超声处理  30 min ，滤过，即得。

2.3.3 供试品溶液的制备  ［8］  采用中国药典大蓟薄层色谱方法进行试验，柳穿鱼叶苷斑点清晰，所以继续沿用甲醇为溶剂，超声提取的方法，即“取本品粉末1 g，加甲醇10 mL，超声处理30 min，滤过，滤液作为供试品溶液”。

2.3.4 展开与检视照 《中国药典2020年版》四部中薄层色谱法 （通则0502）试验，吸取上述对照品溶液、供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶GF254板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（8∶ 1∶ 1）为展开剂，饱和20 min，展开，取出，晾干，置紫外灯（254 nm）下检视。

3 结果

3.1 性状特征 大蓟：呈不规则的段。茎短圆柱形，表面绿褐色，有数条纵棱，被丝状毛；切面灰白色，髓部疏松或中空。叶皱缩，多破碎，边缘具不等长的针刺；两面均具灰白色丝状毛。头状花序多破碎。气微，味淡。叶片叶脉突出，叶刺是从叶脉延伸出来，长的叶刺比较粗硬；冠毛主干毛比较直，分支出更细的枝干毛；苞片边缘具三角状的缘毛；茎的断面具较大的裂隙，木部具针眼状孔洞，相连成环状。如图1、图2所示。

小蓟：呈不规则的段。茎呈圆柱形，表面灰绿色或带紫色，具纵棱，极少数被白色柔毛。切面中空。叶片多皱缩或破碎，叶齿尖具针刺；两面均具白色柔毛。头状花序，总苞钟状；花紫红色。气微，味苦。叶片叶脉不突出，叶刺不从叶脉延伸出来，叶刺比较细小；冠毛主干毛波状弯曲，分支出更细的枝干毛；苞片边缘无缘毛；茎的断面呈淡黄色，木部具针眼状孔洞，相连成环状。如图1、图2所示。

3.2 显微特征

3.2.1 横切面特征

3.2.1.1 大蓟 茎横切面：茎表皮细胞1列，大多皱缩，有时可见非腺毛。在棱脊处的厚角组织明显。皮层薄壁细胞径向延长。维管束外韧型，排列较为紧密。韧皮纤维和木纤维均微木化。韧皮部由数列薄壁细胞组成。髓部常中空。如图3所示。

叶横切面：叶片细胞通常皱缩。上下表皮均为1列细胞，多断裂，非腺毛易于脱离。上下表皮内侧均有下皮厚角组织，突起处尤为明显。叶下部波浪状弯曲，靠近中脉下表皮处凸起尤其明显。维管束外韧型，散在。韧皮纤维和木纤维均微木化。如图4所示。

3.2.1.2 小蓟 茎横切面：茎表皮细胞1列。棱脊处略有下皮厚角组织。皮层由多列细胞组成，径向延长。维管束外韧型，排列十分紧密，微木化。韧皮部由数列小方形薄壁细胞组成。髓部常中空。如图3所示。

叶横切面：上下表皮均为1列细胞，非腺毛易于脱离。上下表皮内侧均有下皮厚角组织，突起处尤为明显。叶肉细胞主要由海绵细胞组成。维管束外韧型，连接较为紧密。韧皮纤维和木纤维均微木化。如图4所示。

3.2.2 粉末特征

3.2.2.1 大蓟 粉末特征：粉末黄棕色。多细胞非腺毛多断裂，顶端甚细长，弯曲或扭曲。单细胞非腺毛长短不一，先端较尖或稍钝圆。叶上表皮细胞类多角形，垂周壁稍增厚或者略成连珠状；下表皮细胞类长方形，壁波状弯曲，上下表皮都有细微的角质纹理。上下表皮均有气孔，保卫细胞3～5个。叶肉细胞中含有草酸钙结晶，偏光下显天蓝色。花粉粒类圆形，表面有刺。苞片下表皮细胞表面观条形，垂周壁连珠状增厚。茎纤维细长。导管为螺纹、网纹和具缘纹孔导管。如图5所示。

3.2.2.2 小蓟 粉末特征：粉末黄棕色或棕绿色。与大蓟粉末特征基本一致，只在叶下表皮细胞特征上略有差别，小蓟下表皮细胞类方形或类长方形，壁稍波状弯曲，角质纹理不明显。如图6所示。

3.3 薄层色谱鉴别 在薄层色谱中显示，大蓟对照药材有两个斑点，上斑点为蒙花苷，下斑点为柳穿鱼叶苷，小蓟对照药材有1个斑点，斑点为蒙花苷，斑点清晰，专属性强，可用于两者的薄层鉴别。如图7所示。

4 结论

4.1 性状特征 大蓟和小蓟药材通过叶片形状、大小等特征很容易区分，但经切制等工艺制成饮片后，叶片多皱缩破碎，不易观察整体叶形和大小，本文通过体式显微镜对叶片叶脉、叶刺的长出方式进行观察，发现大蓟的叶片叶脉突出，叶片边缘的刺是从叶脉延伸出来，长的叶刺比较粗硬，而小蓟叶片叶脉不突出，叶片边缘的刺是不从叶脉延伸出来，叶刺比较细小。通过体式显微镜对冠毛、苞片边缘及茎进行观察，发现大蓟的主干毛比较直，小蓟的主干毛呈波状弯曲；大蓟苞片边缘有缘毛，而小蓟没有；大蓟的茎多被白色丝状毛，切面灰白色，而小蓟大多数茎不被白色毛，切面淡黄色，针眼状孔洞十分密集。以上区别点可作为两者饮片鉴别的简便方法。

4.2 显微特征 通过研究发现，大蓟茎的厚角组织较小蓟明显，小蓟在棱脊处略有下皮厚角组织，小蓟茎的维管束个数较少，木质部内侧纤维数量也较少。大蓟叶上部较为平坦，叶下部波浪状弯曲，靠近中脉下表皮处凸起尤其明显，小蓟叶肉为海绵细胞，木纤维数量较大蓟少。大蓟和小蓟的粉末均具备多细胞非腺毛、单细胞非腺毛、叶上表皮细胞、下表皮细胞、草酸钙结晶、花粉粒、苞片下表皮细胞、茎纤维、导管等特征，差异性不大，在叶上下表皮细胞的形状及特征上略微有差别，大蓟的上、下表皮细胞均有明显的波状角质纹理，下表皮多呈类长方形，小蓟的上表皮角质纹理较为明显，下表皮多呈类方形或类长方形，壁稍波状弯曲，角质纹理不明显。

4.3 薄层鉴别 本试验通过对不同显色检视方法、展开剂等进行了系统考察，并对展开条件进行了优化。参照文献  ［9-13］ 分别采用10%硫酸乙醇溶液，于105 ℃加热显色日光下检视和紫外灯（254 nm）下检视，紫外灯（254 nm）下检视斑点更清晰，灵敏度更高，操作简便，故采用其为检视方法。试验对多种展开剂进行筛选，选用甲苯-乙酸乙酯- 甲酸（9∶ 3∶ 1）、甲苯-甲酸乙酯-甲酸（ 10∶ 8∶ 1 ）、乙酸乙酯-水-甲酸-甲苯（ 17∶ 2∶  2∶ 0.8  ）、乙酸乙酯-乙醇-水（5∶ 1∶ 1）、乙酸乙酯-甲酸-水（8∶ 1∶ 1）进行了考察，结果表明，乙酸乙酯-甲酸-水（8∶ 1∶ 1）为展开剂时，专属性好，斑点清晰。此外，不同展开温度及相对湿度对展开效果无明显影响。

5 讨论

《中国药典》2020年版中对大蓟饮片叶的特征描述为“叶皱缩，多破碎，边缘具不等长的针刺。”建议标准中对叶刺的描述细化为边缘具从叶脉延伸出来的不等长针刺。细化后大蓟和的叶刺特征更明显，也易与小蓟进行区别。

《中国药典》2020年版中大蓟与小蓟的薄层鉴别项下使用的提取溶剂及方法、薄层展开条件、显色条件完全相同，且经显色剂显色后，薄层色谱中蒙花苷斑点变成黄色荧光斑点，柳穿鱼叶苷斑点不变色，这就失去了显色的作用，大蓟的判别标准为显相同颜色的荧光主斑点，则易忽视差异成分柳穿鱼叶苷的黑色斑点，易将小蓟误判为大蓟，如图8所示。为防止以上问题发生，建议对中国药典中大蓟薄层色谱进行修订，在标准中添加柳穿鱼叶苷对照物质，并更改薄层展开及显色条件。

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（收稿日期：2023-08-07 编辑：刘 斌）