显微技术在牛黄清心丸（局方）质量控制中的应用

聂黎行+张烨+张南平+胡晓茹+康帅+侯建忠+戴忠+马双成

[摘要]探讨显微技术在牛黄清心丸（局方）质量控制中的应用。对执行标准规定的显微特征进行了总结，并新建了未规定检验项目的山药、羚羊角、肉桂、防风4味药材的显微鉴别方法。首次采用显微技术检查中成药掺伪，建立了牛黄清心丸（局方）中山药混伪品山薯的检查方法。1个厂家的2批次样品未检出羚羊角，2个厂家的3批次抽样检出山薯。所建方法准确、简便、快速、直观、经济，可更加全面地控制牛黄清心丸（局方）的质量。传统的显微技术能够在指标成分缺乏或含量过低的中药的鉴别方面发挥重要作用。

[关键词]牛黄清心丸（局方）； 显微； 鉴别； 检查； 掺伪

[Abstract]Application of microscopic spectroscopy in quality control of Niuhuang Qingxin pills was discussed. First， microscopic characteristics specified by the statutory standard of Niuhuang Qingxin pills were summarized. Then new identification method was established for Dioscoreae Rhizoma， Saigae Tataricae Cornu， Cinnamomi Cortex and Saposhnikoviae Radix. Finally， microscopic spectroscopy was used for test of Dioscoreae Rhizoma′s adulterant Dioscoreae Fordii Rhizoma.It was the first time for this technology being applied in adulteration test of Chinese patent medicine.The results showed that Saigae Tataricae Cornu was not detected in 2 batches of Niuhuang Qingxin pills from 1 manufacturer while Dioscoreae Fordii Rhizoma was detected in 3 batches of samples from 2 manufacturers. The proposed methods were accurate， simple， rapid， objective and economic， which offered a more comprehensive approach for quality control of Niuhuang Qingxin pills. It was indicated that conventional technology such as microscopic spectroscopy could play an important role in identification of traditional Chinese medicine whose index ingredient was deficient or tiny.

[Key words]Niuhuang Qingxin pills； microscopic spectroscopy； identification； test； adulteration

doi：10.4268/cjcmm20162007

牛黄清心丸（局方）由牛黄、当归、川芎、甘草、山药、黄芩、炒苦杏仁、大豆黄卷、大枣、炒白术、茯苓、桔梗、防风、柴胡、阿胶、干姜、白芍、人参、六神曲（炒）、肉桂、麦冬、白蔹、蒲黄（炒）、人工麝香、冰片、水牛角浓缩粉、羚羊角、朱砂、雄黄等29味中药材粉碎配研制成，具有清心化痰，镇惊祛风的功效，用于风痰阻窍所致的头晕目眩、痰涎壅盛、神志混乱、言语不清及惊风抽搐、癫痫^[1]。2014年我院承担了该品种的国家药品监督抽验任务，执行标准收载于《中国药典》2010年版一部第一增补本，除制剂通则外，包括【性状】、【鉴别】、【检查】3项。其中显微鉴别项涉及14个药味，包括茯苓、白芍、炒白术、麦冬、甘草、黄芩、桔梗、炒苦杏仁、大枣、大豆黄卷、蒲黄（炒）、朱砂、雄黄、水牛角浓缩粉等原料药材；薄层鉴别4项，包括牛黄、黄芩、人参、当归的鉴别。另有猪去氧胆酸的【检查】项，防止人工牛黄冒充牛黄投料。牛黄清心丸（局方）处方药味众多，且辅料炼蜜干扰严重，显微鉴别难度较大，尚无相关资料或文献可供参考，故对执行标准规定的显微特征进行了研究和总结。为更全面地控制本品质量，研究并新建了执行标准未规定检验项目的山药、羚羊角、肉桂、防风四味药材的显微鉴别方法。此外，针对检验过程中发现的个别样品使用山药混伪品投料的现象，首次采用显微技术建立了中成药中掺伪检查的新方法。所建方法准确、简便、快速、直观、经济，可为大处方原粉制剂的质量控制提供参考。

1 材料与方法

奥林巴斯BX50-32H01生物显微镜。分析纯水合氯醛购于国药集团化学试剂有限公司。9个厂家生产的牛黄清心丸（局方）38批次，均为2014年国家药品监督抽验样品。山药、羚羊角、肉桂、防风对照药材来自中国食品药品检定研究院。牛黄、当归、川芎、甘草、山药、黄芩、炒苦杏仁、大豆黄卷、大枣、炒白术、茯苓、桔梗、防风、柴胡、阿胶、干姜、白芍、人参、六神曲（炒）、肉桂、麦冬、白蔹、蒲黄（炒）、人工麝香、冰片、水牛角浓缩粉、羚羊角、朱砂、雄黄、炼蜜等原辅料由天津中新药业集团股份有限公司达仁堂制药厂提供。山药伪品山薯由酒泉市药品检验检测中心收集，经侯建忠主任药师鉴定为薯蓣科植物山薯Dioscorea fordii Prain et Burkill.的干燥根茎。

取牛黄清心丸（局方），按执行标准检验。另取质量较好的天津中新药业集团股份有限公司达仁堂制药厂生产的样品3批，山药、羚羊角、肉桂、防风对照药材，水合氯醛液加热透化后，置显微镜下观察。通过与对照药材对比，并结合文献分析^[2-5]，新建牛黄清心丸（局方）中山药、羚羊角、肉桂、防风的显微鉴别方法。再取问题样品、山薯、分别以山药对照药材和山薯投料的模拟制剂，透化后置显微镜下观察，经比较和验证，新建牛黄清心丸（局方）中山薯混伪投料的显微检查方法。38批次抽样均按标准方法和新建的鉴别和检查方法测定、观察，记录结果。

2 结果

2.1 标准规定的显微鉴别特征 不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛试液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6 μm（茯苓）。草酸钙簇晶直径18～32 μm，存在于薄壁细胞中，常排列成行，或1个细胞中含有数个簇晶（白芍）。草酸钙针晶细小，长10～32 μm，不规则地充塞于薄壁细胞中（炒白术）。草酸钙针晶束长24～50 μm，存在于类圆形或椭圆形黏液细胞中（麦冬）。纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维（甘草）。韧皮纤维淡黄色，梭形，壁厚，孔沟细（黄芩）。联结乳管直径14～25 μm，含淡黄色颗粒状物（桔梗）。石细胞橙黄色，贝壳状，壁较厚，较宽一边纹孔明显（炒苦杏仁）。果皮表皮细胞黄棕色至红棕色，表面观多角形，断面观角质层厚约10 μm（大枣）。种皮栅状细胞淡黄色，长45～80 μm（大豆黄卷）。花粉粒黄色，类圆形或椭圆形，直径约30 μm，外壁有微细疣状突起（蒲黄）。不规则细小颗粒暗棕红色，有光泽，边缘暗黑色（朱砂）。不规则碎块金黄色或橙黄色，有光泽（雄黄）。不规则碎块灰白色或浅灰黄色，稍具光泽，表面有灰棕色色素颗粒，并有不规则纵长裂缝（水牛角浓缩粉）。结果38批次样品均符合规定，14味药材的显微鉴别特征见图1。

2.2 山药、羚羊角、肉桂、防风的显微鉴别 牛黄清心丸（局方）中山药、羚羊角、肉桂、防风的显微鉴别特征：草酸钙针晶束存在于黏液细胞中，长约至240 μm，针晶粗2～5 μm。淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径24～40 μm，脐点短缝状或人字状（山药）。不规则透明碎块稍有光泽，均匀分布裂缝状或长圆形空隙（羚羊角）。石细胞类方形或类圆形，直径32～88 μm，壁一面菲薄。纤维大多单个散在，长梭形，长195～920 μm，直径约至50 μm，壁厚，木化，纹孔不明显（肉桂）。油管含金黄色分泌物，直径约30 μm（防风）。上述显微鉴别特征见图2。按拟定的鉴别方法考察了9个企业的38批次抽样，结果均检出山药、肉桂和防风，1个厂家的2批次抽样未检出羚羊角，不排除未投料的可能性。

2.3 山药混伪品山薯的检查 在检验过程中发现，个别样品检出不属于处方药味的异常石细胞，见图3。文献报道山药的混淆品及伪品较多，除地方标准收载的褐苞薯蓣、参薯、日本薯蓣、山薯外，还有用木薯、番薯等冒充山药使用，其中褐苞薯蓣、山薯、木薯、参薯均含石细胞^[6-8]。经与文献比较^[9-10]，认为为验证上述结论，收集来源明确的山薯，粉碎成细粉，观察其显微特征。同时按牛黄清心丸（局方）处方比例，分别以山药对照药材和山薯细粉投料，加入其他原料和辅料炼蜜，制成模拟制剂，置显微镜下观察。结果以山药投料的模拟制剂未检出异常石细胞，山薯和以山薯代替山药投料的模拟制剂均检出与文献描述基本一致的石细胞。说明采用显微技术检查牛黄清心丸（局方）中山薯掺伪投料，方法可行。拟定方法要求不得检出山薯石细胞（类方形、类多角形、类圆形，直径10～50 μm，纹孔、孔沟细密而明显，内含草酸钙方晶）。按上述方法对38批次的牛黄清心丸（局方）抽样进行检查，结果2个厂家的3批抽样检出山薯石细胞。2.2项下鉴别结果表明，所有样品均检出山药显微特征，故推测这3批样品并非纯粹以山薯替代山药投料，而是山薯混伪山药投料。山薯、以山薯代替山药投料的模拟样品及问题样品中观察到的石细胞见图3。

3 讨论

牛黄清心丸（局方）是由29味原料药材制成的原粉制剂，处方药味众多，化学成分复杂，指标成分含量偏低，且不乏山药、羚羊角这类指标成分尚未明确的药味。在此情况下，传统的显微技术反而能够在鉴别方面发挥很好的作用，与化学方法互为补充。本文总结了牛黄清心丸（局方）执行标准规定的14味药材的显微鉴别特征，为相关检验工作提供了参考。进一步新建了4味药材的显微鉴别项目，填补了质量控制项目的缺失，为标准增修订提供了科学依据。近年来采用薄层色谱、高效液相色谱、液质联用法检查中药掺伪的研究较多，但采用显微技术进行相关研究尚未见报道。本文创新性地采用显微技术建立了牛黄清心丸（局方）中山薯混伪山药投料的检查方法，为中药掺伪检查提供了新的思路。

化学分析的飞速发展使其成为中药质量控制的最主要手段，经典的显微鉴别方法往往未受到足够重视，事实上后者在中药材和原粉投料中成药的真伪鉴别方面仍旧发挥着独特而不可或缺的作用。随着显微透射、显微定量、超高分辨率显微、激光显微切割等分析方法的发展和应用，这一技术必将焕发新的活力。

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[责任编辑 吕冬梅]