羊藿三七胶囊质量标准的提升研究

蔡远东 何羽 李天佑

【摘 要】   目的：  采用高效液相色谱（HPLC）法同时测定羊藿三七胶囊中朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ和宝藿苷Ⅰ的含量，为羊藿三七胶囊质量标准的提升提供依据。 方法： 采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液，梯度洗脱，流速为1 mL/min，检测波长为270 nm，柱温为30 ℃，进样量为10 μL。 结果： 线性和范围分别为朝藿定C： Y=1.9838x+48.464，r=0.9997（n =8），421.60～3372.80 μg；淫羊藿苷： Y=2.2299x+43.786，r=0.9997（n=8），433.60～3468.80  μg ；淫羊藿次苷Ⅰ：Y=2.3527x+1.6429，r=0.9994（n =8）74.64～597.12 μg；宝藿苷Ⅰ： Y=3.1305x+9.4286，r=0.9996（n =8），在481.64～653.12 μg范围内线性关系良好。朝藿定C的平均回收率为100.06%，RSD为0.3%；淫羊藿苷的平均回收率为100.51%，RSD为0.8%；淫羊藿次苷Ⅰ的平均回收率为100.16%，RSD为0.8%；宝藿苷Ⅰ的平均回收率为100.21%，RSD为0.8%。 结论： 建立的方法简便快捷、重复性良好、准确度较高、分离度较好，可用于羊藿三七胶囊中朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ的含量测定。

【关键词】  羊藿三七胶囊；HPLC法；黄酮类化合物；质量标准

【中图分类号】R927.2   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2024）08-0050-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.08.zgmzmjyyzz202408011

Study on Improving the Quality Standards of  Yanghuo Sanqi  Capsules

CAI Yuandong HE Yu * LI Tianyou

Bijie Inspection and Testing Center of Administration for Maeket Superrvision，Bijie 551700，China

Abstract：  Objective   High performance liquid chromatography （HPLC） was used to simultaneously determine the contents of epimedin C、icariin、epimedium glycoside Iand baohuoside I in  Yanghuo Sanqi  capsules，Provide a basis for improving the quality standards of  Yanghuo Sanqi  Capsules.  Methods   Chromatographic column with octadecyl silane bonded silica gel as filler，The mobile phase is acetonitrile -0.05% phosphoric acid solution，gradient elution，The flow rate is 1mL/min，The detection wavelength is 270 nm，The column temperature is 30 ℃， Injection volume is 10 L. Results   The linearity and range are：epimedin C： Y=1.9838x+48.464， r=0.9997 （n=8），  421.60-3372.80  μg ；cariin： Y=2.2299x+43.786， r=0.9997 （n =8），  433.60-3468.80 μg；Epimedium glycoside I： Y=2.3527x+1.6429， r=0.9994 （n =8）， 74.64-597.12 μg；Baohuoside I  Y=3.1305x+9.4286， r=0.9996 （n =8）， between 481.64 and 653.12 μg The linear relationship within the range of g is good.The average recovery rate of epimedin C is 100.06%， with an RSD of 0.3%；The average recovery rate of icariin is 100.51%， with an RSD of 0.8%；The average recovery rate of epimedium glycoside I was 100.16%，with an RSD of 0.8%；The average recovery rate of Baohuoside I is 100.21%， with an RSD of 0.8%.  Conclusion   The established method is simple and fast、with good repeatability， high accuracy， and good separation，It can be used for the content determination of epimedin C，icariin，epimedium glycoside I and pogoside I in Yanghuosanqi capsules.

Key words：  Yanghuo Sanqi  Capsule；HPLC Method；Flavonoid；Quality Standard

羊藿三七胶囊由淫羊藿和三七经煎煮、浓缩、提取制成，具有温阳通脉、化瘀止痛的功效，用于阳虚血瘀所致胸痹，症见胸痛、胸闷、心悸、 乏力、气短等；冠心病、 心绞痛属上述证候者  ［1］ 。方中淫羊藿含朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ等黄酮类化合物，淫羊藿黄酮类化合物有增加冠脉流量、耐缺氧、保护心肌缺血、降压等作用，并具有 一定的免疫抑制作用  ［2］ ，而淫羊藿苷具有降低动脉粥样硬化患者血栓形成几率及调节血脂、保护受损神经元及恢复记忆力等药理活性，朝藿定C则显示出一定的雌激素活性  ［3］ ，宝藿苷Ⅰ则具有抗肿瘤及提高免疫力的作用  ［4］ 。淫羊藿药材中朝藿定C含量较高  ［5］ ，仅以淫羊藿苷作为其质量控制指标不尽合理，不能全面反映制剂整体质量。本文采用HPLC法同时测定羊藿三七胶囊中朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ的含量，为羊藿三七胶囊质量标准的提升提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent1260高效液相色谱仪，2998二极管阵列检测器。电子天平：MSE3.6P-OCE-DM，由赛多利斯科学仪器（北京）有限公司生产；电子天平：AY120、BX420H由梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司生产。洁康超声波清洗机（超声功率：360W，超声频率：40KHz，规格型号：JM-20D-28/45）由东莞市洁康超声波设备有限公司生产。

1.2 试药 朝藿定C对照品（批号：11780-201905，含量以94.3%计）、淫羊藿苷对照品（批号：111852-202104，含量以99.2%计）、淫羊藿次苷Ⅰ对照品（批号：11 2084-202101）、宝藿苷Ⅰ对照品（批号：110737-202017，含量以98.1%计）均由中国食品药品检定研究院提供。乙腈为色谱纯（美国TEDIA天地试剂公司），实验用水为超纯水机（规格型号：ATSmole1850C，生产厂家：重庆市安特生环保设备有限公司）制取的一级水。羊藿三七胶囊（重庆三峡云海药业股份有限公司，批号分别为：2211011、2201011、220701）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Waters SymmetryC 18   5 μm   4.6 mm ×250 mm Column；流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液，梯度洗脱；流速为1 mL/min；检测波长为270 nm；柱温为30 ℃；进样量： 10 μL 。梯度洗脱程序见表1，色谱图如图1所示，各成分分离度皆大于1.5。

2.2 混合对照品溶液的制备 精密称取对照品朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ适量，加甲醇制成每1 mL含朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ分别为0.2108 mg、0.2168 mg、0.03732 mg、0.04082 mg的混合对照品溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取羊藿三七胶囊装量差异项下的内容物，混匀，取约 0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，称定重量， 超声（ 功率： 500 W，频率： 40 kHz） 处理60 min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得  ［1］ 。

2.4  阴性对照溶液的制备 取按处方及工艺制备的缺淫羊藿阴性对照品0.5 g，照 2.3 项下的供试品溶液制备方法处理，制成缺淫羊藿阴性对照溶液。

2.5  线性关系考察 分别精密吸取“2.2”项下的混合对照品溶液2 μL、4 μL、6 μL、8 μL、10 μL、12 μL、14 μL、16 μL按“2.1”项下的色谱条件测定，每个样品进样2次。以对照品浓度 （X）为横坐标，峰面积积分值（Y） 为纵坐标进行线性回归。得到朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ线性回归方程、相关系数。结果见表2。

2.5 精密度试验 取“2.2”项下的混合对照品溶液，按“2.1”项下的色谱条件重复测定6次，分别计算4种成分的峰面积积分值。结果朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ峰面积的RSD值分别为0.9%、1.0%、1.3%、1.4%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验 取同批样品（批号：2211011）按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液，每份平行测定2次，按“2.1”项下的色谱条件测定并计算各成分的含量。结果显示朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ的平均值分别为6.8 mg/粒、6.0 mg/粒、0.3 mg/粒、0.2 mg/粒；RSD值分别为0.8%、0.8%、1.2%、1.1%。表明方法重复性良好。

2.7 稳定性试验 取同批样品（批号：2211011）按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别在0 h、4 h、8 h、12 h、24 h、36 h、48 h进样，按“2.1”项下的色谱条件测定并计算各组分峰面积的RSD值，结果朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ峰面积的RSD值分别为0.9%、1.0%、1.2%、1.1%。说明供试品溶液在48 h内稳定性良好。

2.8 加样回收试验 精密称取已测定含量的样品（批号：2211011）6份，每份约0.25 g，分别加入朝藿定C、淫羊藿苷浓度分别为1.5578 mg/mL、1.5029 mg/mL的混合对照品溶液1 mL；淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ浓度分别为0.0720 mg/mL、0.0707 mg/mL的混合对照品溶液1 mL，按“2.3”项下制备供试品溶液，按“2.1”项下测定并计算回收率。回收率平均值分别为100.06%、100.51%、100.16%、100.21%，RSD分别为0.3%、0.8%、0.8%、0.8%。结果见表3。

2.9 样品含量的测定 取3批羊藿三七胶囊（批号分别为：2211011、2201011、220701），按“2.3”项下方法制备供试品溶液，每份平行测定2次，按“2.1”项下的色谱条件测定并计算各成分的含量。测定结果见表4。

3 讨论

3.1 流动相的选择 本研究分别采用乙腈-水，乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，结果选用乙腈-0.05％磷酸溶液时，目标峰峰形较好，且与相邻杂质峰达到完全分离，取得了满意的效果。

3.2 供试品溶液制备考察 采用稀乙醇为溶剂，分别考察了超声处理30 min、60 min，结果超声处理30 min时，样品含量较低，超声处理60 min时样品含量较高，说明超声处理30 min时，目标成分未提取完全，超声处理60 min时目标物提取较完全，为保证充分提取完全，本次研究选择超声处理60 min。分别取稀乙醇、甲醇和75%甲醇作为溶剂，超声处理60 min，结果发现稀乙醇提取时目标物含量较高，故本研究采用稀乙醇为提取溶剂。

从羊藿三七胶囊三批样品检测的结果来看，处方淫羊藿中朝藿定C的含量略大于淫羊藿苷，原标准  ［1］ 中淫羊藿的含量只以淫羊藿苷计不尽合理，建议厂家淫羊藿的含量以朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ的总量来计，这样才能全面反应制剂的质量。本研究采用HPLC法同时测定了羊藿三七胶囊中朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ含量，取得了较为满意的结果。该方法较为简便，重复性较好，可用于羊藿三七胶囊的含量测定及质量评价，为羊藿三七胶囊质量标准的提升提供方法依据。

参考文献

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2020：919.

［2］康廷国，阎玉凝，吴德芳，等.《中药鉴定学》新世界［M］.2版.北京：中国中医药出版社，2003（1）：389.

［3］沈洁，王琴，熊维建，等.HPLC——测多评法测定参芪延肾颗粒中淫羊藿药材中的6个黄酮类成分的含量［J］.中国药房，2019，30（17）：2327-2331.

［4］王雷，李军民，卢迪，等.淫羊藿及其复方有效成分的提取和抗衰老作用探析［J］.药物与人，2014，27（3）：10-11.

［5］汪杨丽，邓开英，郑小平，等.HPLC同时测定羊藿三七胶囊中朝藿定C和淫羊藿苷的含量［J］.中国现代中药，2015，17（5）：485-487，496.

（收稿日期：2023-08-04 编辑：刘 斌）