拐枣汁加工工艺及二氢杨梅素含量测定方法研究

李晓杰 麻纪斌 舒泉湧 翟帆 李宗霖

摘要 ［目的］研究拐枣汁的加工工艺及果汁中二氢杨梅素的含量测定方法。［方法］采用单因素试验筛选拐枣汁的加工工艺，对比煎煮法及浸提法，考察粉碎粒度、加水量、浸泡时间，建立果汁中二氢杨梅素的含量测定方法并进行方法学考察。［结果］浸提法所得果汁口感好，拐枣粉粒度为过8目筛，加水量为1.3～1.5倍，浸泡时间为18 h。二氢杨梅素含量测定方法：色谱柱为Ajilent HC-C18色谱柱，流动相为0.1%磷酸水-乙腈=18∶82，流速1 mL/min，检测波长290 nm，柱温30 ℃，进样量10 μL。［结论］果汁加工工艺简单易行，口感较好，易于实现工业化生产。建立的二氢杨梅素含量测定方法准确度、精密度高，专属性好，为拐枣汁质量标准的制定提供了依据。

关键词 拐枣汁；二氢杨梅素；加工工艺；含量测定

中图分类号 TS255  文献标识码 A  文章编号 0517-6611（2024）10-0168-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2024.10.037

Study on the Processing Technology of Hovenia dulcis Juice and Determination Method of  Dihydromyricetin Content

LI Xiao-jie1， MA Ji-bin1， SHU Quan-yong2 et al

（1.Shaanxi Pharmaceutical Holding Pharmaceutical Research Institute Co.， Ltd.， Xian， Shaanxi 710075;2. Shaanxi Institute of Traditional Chinese Medicine （Shaanxi Pharmaceutical Information Center），Xianyang，Shaanxi 712000）

Abstract ［Objective］To study the processing technology of Hovenia dulcis juice and the determination method of dihydromyricetin content in the juice.［Method］A single factor experiment was used to screen the processing technology of Hovenia dulcis juice， and the decoction method and extraction method were compared. The crushing particle size， water addition amount and soaking time were examined. The determination method of dihydromyricetin content in Hovenia dulcis juice was established and methodological studies were conducted.［Result］The Hovenia dulcis juice obtained by the extraction method had a good taste， with the crushing particle size of 8 mesh sieves，the water addition amount of 1.3-1.5 times and the soaking time of 18 hours. The determination method for dihydromyricetin content was as follows： chromatographic column was Ajilent HC-C18， mobile phase was 0.1% phosphoric acid solution∶acetonitrile=18∶82， flow rate was 1 mL/min， detection wavelength was 290 nm， column temperature was 30 ℃， injection amount was 10 μL.［Conclusion］The juice processing technology is simple and feasible， the juice has a good taste and is easy to achieve industrial production. The determination method of dihydromyricetin content has high accuracy， precision and specificity， this provides a basis for the formulation of quality standards for Hovenia dulcis juice.

Key words Hovenia dulcis juice;Dihydromyricetin;Processing technology;Content determination

作者簡介 李晓杰（1982—），女，陕西富平人，工程师，硕士，从事中药新剂型及质量标准研究。

收稿日期 2023-10-08

拐枣，学名枳椇（Hovenia  dulcis），是鼠李科拐枣属落叶乔木植物［1］，其果梗膨大，是一种特色水果，俗称“拐枣”。文献资料显示，拐枣中含有丰富的可溶性糖类、蛋白质、有机酸及人体所必需的维生素、矿物质［2］。中医认为拐枣有清热、利尿、解酒毒之功效，民间亦有“千杯不醉枳椇子”的说法［3-4］。我国拐枣的药食两用历史已近2 000年。大量试验结果证明拐枣具有消除宿醉、保肝护肝、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤、免疫调节等作用［5-12］。目前拐枣的研究主要集中在国内，以拐枣为原料加工的产品主要有拐枣醋、拐枣酒等，其加工未形成规模，产品的形式还是以初级加工为主，附加值不高［13］。拐枣营养成分丰富，解酒保肝的作用公众认可度较高，加之独特的风味，适合开发成拐枣果汁。拐枣鲜果涩味较重，不易保存，但经霜后变甜，没有涩味。笔者以经霜后干燥的拐枣为原料，采用浸提法加工拐枣果汁，并建立了拐枣中解酒保肝成分二氢杨梅素的含量测定方法，为拐枣果汁的开发提供了依据。

1 材料与方法

1.1 试验药材及试剂

拐枣（购于陕西省旬阳县）；二氢杨梅素对照品（含量98%，北京索莱宝科技有限公司）；棒曲霉素标准品（含量99.47%，MCE）；黄曲霉毒素B1检测卡（检测限10 ng/mL，深圳芬德技术有限公司）；乙腈（色谱纯，Honeywell）；磷酸、乙酸、乙酸钠、甲醇、甲酸、碳酸钠、乙酸乙酯均为分析纯。

1.2 试验仪器

果汁压榨机（CSOL-LX13L，长沙市欧龙机械设备有限公司）；高效液相色谱仪（Ultimate 3000，赛默飞世尔科技有限公司）；电子天平（Aj135 & PB3002-S，METTLER TOLEDO）；移液枪（1 000 μL & 100 μL，Eppendoff）；数显糖度计（SW-32D，广州市速为电子科技有限公司）；台式离心机（TGL-16G，上海安亭科学仪器厂）；氮吹仪（MTN-2800W，天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；數显鼓风干燥箱（101型，北京科伟永兴仪器有限公司）；快速水分测定仪（MA37-1CN，赛多利斯科学仪器有限公司）；旋转黏度计（NDJ-5S，上海恒平科学仪器有限公司）；pH计（pHS-3C型，上海雷磁仪器厂）；超声清洗仪（KQ-250DE，昆山市超声仪器有限公司）；高速多功能粉碎机（1000Y，永康市铂欧五金制品有限公司）；标准筛（8、10、14、18、200、500、800、1 000目）。

1.3 拐枣汁加工工艺

拐枣经挑选去除杂质及劣质果，清洗，80 ℃干燥至含水量在10%～15%，粉碎，过8目筛网，加入1.3～1.5倍量煮沸后的饮用水，浸泡18 h，压榨果汁。果汁加热煮沸，密闭沉降12 h，取上清液灌装，即得拐枣浓缩果汁。

果汁得率按公式Y=（M×B）/m×（1-W）进行计算，式中，Y表示果汁得率，M表示果汁质量，B表示糖度，m表示拐枣质量，W表示拐枣含水量。

1.4 拐枣汁中二氢杨梅素含量测定方法

1.4.1 色谱条件。色谱柱为Ajilent HC-C18色谱柱（5 μm，4.6 mm×250 mm），流动相为乙腈∶0.1%磷酸溶液=18∶82（V∶V），流速1 mL/min，检测波长290 nm，柱温30 ℃，进样量10 μL［14-15］。

1.4.2

对照品溶液的制备。取二氢杨梅素对照品5 mg，精密称定，加甲醇溶解并定容至10 mL，摇匀，作为储备液。精密量取储备液1 mL置50 mL容量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀。

1.4.3 供试品溶液的制备。取拐枣汁2 g，精密称定，置10 mL 容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。备用。

1.4.4

含量测定。取供试品溶液和对照品溶液分别过0.45 μm 滤膜过滤，精密量取10 μL注入液相色谱仪，按照“1.4.1”色谱条件测定，记录峰面积，外标法计算含量。

2 结果与分析

2.1 拐枣汁加工工艺验证

取拐枣3份，各1 kg，按照“1.3”方法加工拐枣汁，分别测定pH、黏度、二氢杨梅素含量及棒曲霉素含量［16］，限量检查黄曲霉毒素B1和微生物菌落数［17］，结果见表1，显示该加工工艺稳定性较好。

2.2 二氢杨梅素含量测定方法学考察

2.2.1 线性关系。

取二氢杨梅素储备液2 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。分别吸取0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、5.00 mL置10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，0.45 μm滤膜过滤，按“1.4.1”色谱条件测定，记录峰面积。以二氢杨梅素浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，得线性方程y=259.42x+0.047（R2=0.999 9），线性范围为0.52～51.65 μg/mL。

2.2.2 专属性。

取流动相空白溶剂、二氢杨梅素对照品溶液、拐枣汁样品溶液，按照“1.4.1”色谱条件分别进样，记录色谱图，如图1所示。从图1可以看出，流动相空白无干扰，样品中二氢杨梅素与相邻色谱峰分离度良好，表明该HPLC含量测定方法专属性较好。

2.2.3 准确度试验。

分别取拐枣汁1 g（二氢杨梅素含量为0.005 4%），精密称定，共9份。第1～3份精密加入二氢杨梅素储备液50 μL，第4～6份精密加入二氢杨梅素储备液100 μL，第7～9份精密加入二氢杨梅素储备液150 μL，分别加流动相定容至刻度，0.45 μm滤膜过滤，按“1.4.1”色谱条件测定，记录峰面积，代入线性方程中计算二氢杨梅素含量，结果见表2。从表2可以看出，平均回收率为96.06%，RSD为1.61%，说明该方法准确度较高。

2.2.4 精密度试验。

取10.40 μg/mL二氢杨梅素对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积，计算6次峰面积的RSD为0.324 1%，表明仪器精密度良好。

2.2.5 稳定性试验。

取10.40 μg/mL二氢杨梅素对照品溶液及拐枣汁供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12 h进样，记录峰面积，计算峰面积的RSD分别为0.761 5%、1.324 3%，结果表明12 h内对照品溶液和拐枣汁供试品溶液稳定。

2.2.6 检测限及定量限。

取0.52 μg/mL二氢杨梅素对照品溶液，定量稀释，以S/N=10左右为定量限，S/N=3左右为检测限。结果显示，溶液浓度为500.78 ng/mL时S/N=10.2，溶液浓度为200.31 ng/mL时S/N=2.1，以此确定该含量测定方法的检测限为200.31 ng/mL，定量限为500.78 ng/mL。

2.3 二氢杨梅素稳定性研究

参考台湾中药典（第三版）枳椇子项下含量测定方法进行拐枣汁中二氢杨梅素含量测定并进行优化。该标准中对照品及供试品均以甲醇为溶剂进行溶解并定容，试验过程中发现二氢杨梅素峰型较差，不稳定。连续监测16 h，发现7.5 min左右有一杂质峰，随时间推移，峰面积逐渐增大，以时间为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，得线性方程y=0.007 9x+0.005 2（R2=0.994 9），杂质的增长具有线性规律，二氢杨梅素的峰面积也相应变小。参考文献［14-15］及香港中药材标准枳椇子项下方法，分别以甲醇、流动相及50%甲醇（内含0.1%甲酸）为溶剂进行定容，进行液相检测，二氢杨梅素峰型得到显著改善，12 h内稳定。色谱图见图2。

2.4 拐枣果汁加工工艺参数优化

2.4.1 煎煮法与浸提法对比。

取拐枣粉（8～18目）2份，各1 kg，分别加入2 kg水，一份浸泡18 h，压榨果汁。另一份煎煮1 h，压榨果汁，果渣再加入2 kg水，煎煮1 h，合并2次煎煮的果汁，测定糖度，计算果汁得率，结果如表3所示。从表3可以看出，煎煮法果汁得率高，但果汁颜色深，焦糖味重，因此果汁提取工艺选择浸提法。

2.4.2 拐枣粉碎粒度考察。

将干燥后的拐枣粉碎，分别过8、10、14、18目标准筛网，得到≤8目的颗粒、>8～10目的颗粒、>10～14目的颗粒、>14～18目的颗粒、>18目的颗粒。取不粉碎的拐枣500 g，加入3倍量水，浸泡18 h。5种不同粒径的拐枣颗粒各500 g，加入2倍量水浸泡18 h，比较糖度、果汁得率、不溶性固形物含量（高速离心后，倒出上清液，测定不溶性固形物含量，以此反映果汁澄清度）、二氢杨梅素含量及口感。结果如表4所示。

从表4可以看出，不粉碎的拐枣，口感差，果汁得率低；其余粒径拐枣压榨的果汁糖度及得率差别不大。不溶性固形物含量随着拐枣粒度的减小呈缓慢增加趋势。二氢杨梅素含量以>10～18目含量最高，≤8目、>18目的分别为0.001 6%、0.003 5%。根据这些指标确定拐枣的粉碎粒度为过8目筛。

2.4.3 浸提时间考察。

取拐枣粉3份，加入2倍量水，分别浸泡12、16、18 h，压榨果汁，测定果汁糖度和果汁得率，结果如表5所示。从表5可以看出，果汁糖度差别不大，果汁得率以18 h最高，以此确定浸提时间为18 h。

2.4.4 加水量考察。

取拐枣粉3份，分别加入1.3、1.5、2.0、2.5 倍量水，浸提18 h，压榨果汁，测定果汁糖度和果汁得率，结果如表6所示。从表6可以看出，加水量越多，果汁得率越高，但所得果汁糖度越低，若要得到相同的糖度，需加热浓缩，耗能较高，操作不便，且加热后果汁有焦糖味。结合微生物检测结果，糖度大于30%的拐枣汁具有抑菌性，易于保存，以此确定加水量为1.3～1.5倍。

2.4.5 拐枣果汁澄清工艺研究。

压榨后的果汁为棕红色黏稠液体，静置后有沉淀物。采用高速离心（转速8 000 r/min）可得到澄清溶液，但该方法工业生产中不易实现。直接过滤（1 000目），果汁混浊，静置后仍有沉淀析出。果汁加热煮沸后，不溶物沉淀速度加快，静置过夜后基本沉淀完全，上部液体澄清。以此确定果汁澄清工艺为：压榨后的果汁加热煮沸，密闭沉降12 h，取上清液。

3 结论

拐枣鲜果涩味重，难以保存，有季节性限制，压榨果汁得率低。该研究采用经霜后的拐枣进行果汁压榨，工艺简单，适合工业化生产，避免了果汁脱涩的工艺流程，解決了鲜果压榨季节性限制的问题。压榨的果汁保留了拐枣特有的口感，未添加任何辅料，可直接饮用或根据个人口味加水稀释后饮用，也可作为其他复合果汁或食品的原料，为拐枣系列产品的开发奠定了基础。

建立的二氢杨梅素含量测定方法准确度、精密度高，专属性好，可作为拐枣籽或拐枣其他产品含量测定的依据，但拐枣汁中二氢杨梅素含量较低，不建议纳入果汁质量标准中。

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