注射用阿莫西林钠/克拉维酸钾中两组分成盐率的分析

王松 于明艳 赵海云 于升平 陈德俊

摘要：目的 建立離子色谱法同时测定注射用阿莫西林钠/克拉维酸钾中钠离子与钾离子的含量，通过计算其成盐率，对不同企业样品的成盐工艺进行评价。方法 采用IonPac CS12A阳离子交换色谱柱（4 mm×250 mm）和IonPac CG12A保护柱（4 mm×50 mm），检测器为电导检测器，抑制器电流为20 mA，以6.7 mmol/L甲烷磺酸溶液为淋洗液，流速为1.0 mL/min。结果  钠离子浓度在6.01～18.04 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9999，n=5）；平均回收率为100.4%（RSD=0.4%，n=9）；钾离子浓度在3.33～9.98 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9998，n=5）；平均回收率为100.2%（RSD=0.5%，n=9）。测定了37批注射用阿莫西林钠/克拉维酸钾中钠和钾的含量，其成盐率分别为1.00～1.13和0.94～1.05。结论 本方法可用于注射用阿莫西林钠/克拉维酸钾中钠离子与钾离子的含量测定，各企业样品成盐情况较好，但需关注成盐剂的残留。

关键词：注射用阿莫西林钠/克拉维酸钾；成盐率；离子色谱法；钠离子；钾离子

中图分类号：R978.1 文献标志码：A

Analysis of the salt-forming rate of two components in amoxicillin sodium and clavulanate potassium for injection

Wang Song， Yu Mingyan， Zhao Haiyun， Yu Shengping， and Chen Dejun

（Shandong Institute for Food and Drug Control， NMPA Key Laboratory for Research and Evaluation of Generic Drugs， Shandong Research Center of Engineering ang Technology for Consistency Evalution of Generic Drugs， Ji'nan 250101）

Abstract    Objective    This research established an ion chromatographic method for simultaneous determination of sodium and potassium ions in amoxicillin sodium and clavulanate potassium for injection. According to the salt-forming rate， the salt-forming processes of different enterprises were evaluated. Methods    A cation exchange chromatography column of IonPac CS-12A （4 mm×250 mm） and a protection column of IonPac CG-12A （4 mm×50 mm） were used. The detector was a suppressed conductivity detector， and the suppressor current was 20 mA. An isocratic eluent of 6.7 mmol/L of methane sulfonic acid （MSA） solution was chosen as the mobile phase， with a flow rate of 1.0 mL/min. Results    The linear correlation of sodium ions was good within the range of 6.01～18.04 μg/mL （r=0.9999， n=5）. The average recovery was 100.4% （RSD=0.4%， n=9）. The linear correlation of potassium ions was good within the range of 3.33～9.98 μg/mL （r=0.9998， n=5）. The average recovery was 100.2% （RSD=0.5%， n=9）. The content of sodium and potassium ions in 37 batches of amoxicillin sodium and clavulanate potassium for injection were determined， with salt-forming rates ranging from 1.00 to 1.13 and 0.94 to 1.05， respectively. Conclusions    This method could be used for the determination of sodium and potassium ions in amoxicillin sodium and clavulanate potassium for injection. The salt-forming rate of samples from various enterprises was promising， but attention should be paid to the residue of salt-forming agents.

Key words    Amoxicillin sodium and clavulanate potassium for injection; Salt-forming rate; Ion chromatography;Sodium ions; Potassium ions

注射用阿莫西林钠/克拉维酸钾（5：1）由葛兰素史克（GSK）公司研发，于1985年在英国首次上市。本品为阿莫西林钠与克拉维酸钾按标示比例混合制成的复方制剂，未添加辅料，适用于产β-内酰胺酶的敏感菌所致的感染。两者合用，可保护阿莫西林免遭β-内酰胺酶水解[1]，同时本品的抗菌谱较阿莫西林有所扩大。

注射用阿莫西林钠/克拉维酸钾中两组分均以成盐的形式存在，成盐是改善药物分子理化性质、提高成药性的有效手段之一[2]。通过成盐提高了本品的水溶性，适用于制备静脉注射剂。药物成盐不完全，将影响药物在体内的吸收与分布[3]；结晶工艺不完善，致使成盐剂过量残留，都会影响药物的安全性和有效性。

中国药典2020年版二部中阿莫西林有关物质控制的杂质总量为不得过3.0%，而阿莫西林钠的杂质总量为不得过9.0%。另有文献报道[4]注射用头孢曲松钠由于成盐工艺的差异，不同企业产品中，产生于成盐工序的杂质12的含量可相差8倍。可见成盐工艺是影响杂质种类和含量的关键因素。离子色谱法广泛应用于药物分析中无机离子的检测[5-7]，且可同时测定多种离子。本研究建立了离子色谱法同时测定注射用阿莫西林钠/克拉维酸钾中钠离子与钾离子的含量，通过摩尔数比计算成盐率，考察不同企业产品的成盐情况，對评价其药品质量具有重要价值。

1 仪器与试药

ICS-5000型离子色谱仪（美国Thermo Fisher Scientific公司）；XPR205型电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

纯净水（广州屈臣氏食品饮料有限公司）；甲烷磺酸（批号A0419723）（美国Thermo Fisher Scientific公司）99%；氯化钠基准试剂（批号2018710）、硫酸钾基准试剂（批号2019110）（天津市科密欧化学试剂有限公司）100%。

注射用阿莫西林钠/克拉维酸钾：14家企业共36批样品；1批参比制剂（GSK，批号SR2M）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

用阳离子交换色谱柱（IonPac CS12A柱，

4 mm×250 mm，或效能相当的色谱柱；保护柱：IonPac CG12A，4 mm×50 mm）；检测器为电导检测器；检测方式为抑制电导检测，抑制器电流为

20 mA；柱温35 ℃；检测池温度35 ℃；以6.7 mmol/L

甲烷磺酸溶液为淋洗液；流速：1.0 mL/min；进样体积25 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 供试品溶液的配制

取本品约24 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液的配制

取氯化钠基准试剂与硫酸钾基准试剂适量，置105 ℃干燥至恒重，再分别取氯化钠约305 mg和硫酸钾约148 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验

取对照品溶液、溶剂（屈臣氏水）分别注入离子色谱仪，记录色谱图。结果表明，对照品溶液中钠离子和钾离子色谱峰之间的分离度符合要求（图1），空白溶剂中未检出与钠离子和钾离子保留时间一致的色谱峰，对样品测定无干扰。

2.3.2 线性关系

分别取氯化钠基准试剂约305 mg和硫酸钾基准试剂约148 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加水溶解并定量稀释制成每1 mL中约含钠离子1.2 mg和钾离子0.66 mg的溶液，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液适量，分别加水稀释制成每1 mL中约含钠离子6.0、9.6、12.0、14.4和18.0 μg，含钾离子3.3、5.3、6.6、7.9和9.9 μg的系列对照品溶液，依次注入离子色谱仪，记录色谱图。以离子浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得出钠离子的线性方程为Y=0.2479X-0.2953（r=0.9999），钾离子的线性方程为Y=0.1339X-0.1367（r=0.9998），结果表明钠离子与钾离子在配制的浓度范围内与峰面积线性关系良好。

2.3.3 定量限与检测限

取“2.3.2”项下的系列对照品溶液继续逐级稀释，注入离子色谱仪，记录色谱图。以离子峰的信噪比为10时所对应的离子浓度作为定量限，钠离子的定量限为0.03 μg/mL，钾离子的定量限为0.33 μg/mL；以离子峰的信噪比为3时所对应的离子浓度作为检测限，钠离子的检测限为0.01 μg/mL，钾离子的检测限为0.10 μg/mL。

2.3.4 精密度试验

取对照品溶液，连续进样6次，记录色谱图，钠离子与钾离子峰面积的RSD分别为0.13%与0.15%，仪器的精密度良好。

2.3.5 重复性试验

取注射用阿莫西林钠/克拉维酸钾样品（批号K1201203），平行制备6份供试品溶液，分别注入离子色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，钠离子的平均含量为5.23%，RSD为1.1%；钾离子的平均含量为2.98%，RSD为1.8%，结果表明方法的重复性良好。

2.3.6 回收率

取注射用阿莫西林钠/克拉维酸钾样品（批号K1201203）约1.2 g，精密称定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为供试品贮备液；精密量取该溶液1.0 mL，置100 mL量瓶中，再分别精密加入“2.3.2”项下对照品贮备液0.3、0.5和0.7 mL，加水稀释至刻度，摇匀，制成相当于80%、100%和120%浓度水平的溶液，每种浓度分别制备3份，注入离子色谱仪，记录色谱图。计算结果见表1，结果表明回收率良好。

2.3.7 溶液稳定性试验

取同一供试品溶液，在室温状态下分别于0、2、4、6、8和12 h注入色谱仪，记录色谱图。钠离子峰面积的RSD为0.13%，钾离子峰面积的RSD为0.22%。结果表明，供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.4 样品测定与成盐率结果

照“2.1”与“2.2”项下的方法，测定37批样品中钠离子和钾离子的含量，同时照中国药典2020年版二部注射用阿莫西林钠/克拉维酸钾含量测定的方法[8]，测定样品中阿莫西林和克拉维酸的含量。钠离子成盐率%=（钠含量%/22.99）/（阿莫西林含量%/365.4），钾离子成盐率%=（钾含量%/39.10）/（克拉维酸含量%/199.16）。

国产样品中阿莫西林的成盐率在1.00～1.13之间，平均成盐率1.07，克拉维酸的成盐率在0.94～1.05之间，平均成盐率1.00；原研样品中阿莫西林的成盐率为1.09，克拉维酸成盐率为1.00，结果见图2。

3 讨论

经调研，该品种各企业的生产工艺均为购进混粉原料直接无菌分装制得，目前国内混粉原料的生产企业仅有3家（分别以企业A、B、C命名）。由测定结果可知，一是国产样品的成盐率与原研样品无显著差异；二是阿莫西林的成盐率普遍过高，其中以B企业为原料来源的样品成盐率最好，接近理论值；克拉维酸方面，成盐率在理论值上下浮动，但部分企业样品离散程度较大，可能与该企业产品存在多家原料来源有关。

本文结果显示，样品中两个组分的成盐率良好，基本可以保证成盐完全，此时需要关注工艺过程中过量成盐剂的去除。生产工艺显示，3家原料生产企业使用的成盐剂均为2-乙基己酸钠与2-乙基己酸钾，两种物质提供钠离子或钾离子后生成的2-乙基己酸对皮肤、黏膜有强烈刺激作用[9]。从另一个角度继续考察本品种的成盐工艺，参照中国药典2020年版四部通则2-乙基己酸测定方法[10]，对样品中2-乙基己酸的残留量进行测定。结果显示，各企业样品均有不同程度的残留，以C企业为原料来源的样品2-乙基己酸的含量为0.39%～0.51%，残留量相对较高，提示其成盐工艺需进一步优化。

目前，测定药物中钠含量和钾含量的常用方法有原子吸收分光光度法、ICP-MS法与离子色谱法等。其中，原子吸收分光光度法误差较大，测定不同元素需要更换光源，无法同时测定；ICP-MS法样品预处理复杂、干扰多、成本高；而离子色谱法具有高选择性和灵敏度、经济环保、结果准确可靠，可同时测定样品中钠、钾两种离子的含量。本文建立的离子色谱法，通过同时测定钠离子与钾离子含量，考察了不同企业产品的成盐情况。这对成盐工艺的逐步优化，制剂质量的持续提高具有积极意义。

参 考 文 献

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作者简介：王松，男，生于1987年，硕士，副主任药师，主要从事抗感染类药物、抗肿瘤药物及药用辅料的检验及质量研究，E-mail： 277486921@qq.com

*通信作者：E-mail： chendejunweiwei@sina.com

第一作者：王松，副主任药师，2013年毕业于山东大学，主要从事抗感染类药物、抗肿瘤药物及药用辅料的检验及质量研究工作。

通信作者，陈德俊，主任药师，山东省食品药品检验研究院抗生素室主任。长期从事抗感染类药物、抗肿瘤药物及药用辅料的检验及质量研究工作，多次主持完成药品标准的制修订及复核工作、国家药品评价抽验工作，获省级科技奖二等奖1项，获国家级学会科技奖三等奖1项。获省级学会科学技术二等奖、三等奖多项。