自制核桃酱改善气血两虚小鼠的作用

颜红娇，杨定法，赵声兰

云南中医药大学，药食资源开发实验室（昆明 650500）

核桃仁，为胡桃科植物胡桃Juglans regiaL.的干燥成熟种子[1]，是一种药食同源植物[2]，具有丰富的营养价值和药理作用[3]。通过抗氧化[4]、调节海马体中的NMDAR[5]、降低海马体中AchE水平[6]等改善记忆。另外，核桃仁还具有降糖[7]、降脂[8]、护肝[9]、预防心脑血管疾病[10]等作用。在中医上，核桃也被认为具有温补肾阳、润肺肝、补益气血、益智开发脑力等功效，常与其他药物配伍以改善人体由于气血两虚导致的各类疾病，如国家卫生健康委药品标准中药成方制剂收录的理气舒心片[11]、二仙口服液、参茸延龄片等，以及中国药典收录的培坤丸、复方皂矾丸[12]等。试验将自制核桃酱用于气血两虚小鼠，通过脏器指数、血常规检测等初步探讨其补气血作用。

1 材料与方法

1.1 试验动物

SPF级昆明种雄性小鼠60只，6～8周龄，体重20±2 g，云南洛宇生物科技有限公司，许可证编号SYXK（滇）K2017-0005。

1.2 药物

核桃酱配方中的所有原料脱皮核桃仁（云南其众食品有限公司）；龙眼肉、人参、当归、芦根（广东逢春制药有限公司）；菊粉、低聚果糖（江门市德昂生物科技有限公司）；蜂蜜（北京百花蜂产业科技发展公司）。上述材料由线上购得，经核实均属于道地药材。环磷酰胺（四川绿叶制药股份有限公司，安道生）；乙酰苯肼（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）。

1.3 试验仪器与设备

兽用全自动血液细胞分析仪（BC-2800Vet，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）；动物实验跑台（MH19-DSPT-202，上海富康达有限公司）。

1.4 试验方法

1.4.1 气血两虚小鼠模型的建立及给药

模型的建立：小鼠适应性饲养3 d后，将随机分为5组，每组12只，分别名为空白组、模型组、补气血核桃酱低剂量组、补气血核桃酱中剂量组、补气血核桃酱高剂量组。除空白组外，所有小鼠在1～7 d均在实验跑台上进行跑步疲劳试验，电流刺激强度4.5 mA，并采用人为驱赶方式确保每只小鼠在跑道上跑步，直至小鼠最后宁愿待在电流刺激区受电击也不愿或不能上跑道跑步为止。在第2和第4天给4个小组小鼠分别皮下注射的乙酰苯肼剂量为20和40 mg/kg。在第4天开始到第7天的4 d中，每天腹腔注射环磷酰胺剂量为50 mg/kg。

给药：从造模第1天开始给药，至第13天结束。空白对照组和模型组给与等体积的生理盐水。

1.4.2 指标检测

1.4.2.1 小鼠跑步力竭试验

小鼠在处死的前1 d，通过动物实验跑台，考察小鼠的耐疲劳能力。具体方法：让小鼠在动物实验跑台上跑步，直至小鼠最后宁愿待在电流刺激区受电击也不愿或不能上跑道跑步为止，记录小鼠的跑步路程。

1.4.2.2 小鼠外周血象检测

在最后一次注射完环磷酰胺的第6天，摘眼球取血，小鼠血液放置在紫色EDTA-2抗凝管中并轻摇10～20次，防止溶血或凝血，用兽用血液分析仪检测红细胞数目、血红蛋白浓度。

1.4.2.3 其他指标

1.4.2.3.1 脏器指数

小鼠脱颈处死，取小鼠胸腺和胰腺并称重，于液氮中速冻5 min以上再转移至-80 ℃冰箱保存。

1.4.2.3.2 体重

分别记录小鼠造模前、造模后、处死前的体重。

1.4.2.3.3 肛温

在处死前1 d，按照体温计说明书测量小鼠肛温并做记录。

1.4.2.3.4 摄食量、饮水量

以小鼠处死前1 d的食量和水量减去处死时剩余的食量和水量为小鼠24 h的摄食量和饮水量。

2 结果与分析

2.1 体重增长量

如图1所示，与正常组相比，模型组小鼠体重显著负增长。与模型组相比，给药组只有中剂量组能维持正增长，但与正常组相比仍有显著差距。说明产品尚不能完全遏制乙酰苯肼、环磷酰胺导致的体重减轻。

图1 补气血核桃酱对小鼠体重增长量的影响

2.2 力竭跑步路程、摄食量、饮水量

如表1和图2所示，与正常组相比，模型组的跑步路程、摄食量、饮水量显著降低。与模型组相比，除补气血核桃酱低剂量组的摄食量有显著差异外，其余给药的3个剂量组在跑步路程、摄食量、饮水量数据上差异不显著。

表1 补气血核桃酱对小鼠力竭跑步路程、摄食量、饮水量的影响

图2 补气血核桃酱对小鼠力竭跑步路程、摄食量、饮水量的影响

2.3 肛温

如图3所示，正常组小鼠的平均肛温为36.96 ℃，模型组只有35.05 ℃，说明该模型能显著降低小鼠的肛温，而在给药后，给药组均能不同程度提高小鼠的肛温，具有显著意义。

图3 补气血核桃酱对小鼠肛温的影响

2.4 脏器指数

如图4所示，与正常组相比，模型组小鼠胸腺指数显著降低，核桃酱中剂量组能显著抑制小鼠的胸腺萎缩。

图4 补气血核桃酱对小鼠胸腺指数的影响

2.5 外周血象

如图5所示，与正常组相比，模型组小鼠红细胞数目和血红蛋白浓度显著负增长。与模型组相比，3个给药组均能显著升高由造模药引起的红细胞数目和血红蛋白浓度的降低。

图5 补气血核桃酱对小鼠外周血象的影响

3 讨论与结论

试验采用乙酰苯肼+环磷酰胺+跑步力竭以建立小鼠的气虚双虚模型，通过体重增长量、肛温、跑步力竭路程、摄食量、饮水量来考察补气血核桃酱对小鼠气虚的改善作用，通过对外周血象的检测和胸腺脾脏指数来评判补气血核桃酱对小鼠血虚的改善作用。

该模型能显著降低小鼠的体重增长量、摄食量、饮水量、胸腺指数、红细胞数目、血红蛋白浓度、肛温、力竭跑步距离。然而，该产品并不能显著改善小鼠的摄食量、饮水量、力竭跑步距离这些气虚指标，仅有中剂量组能够抑制造模药带来的体重下降。然而，虽然气虚指标效果不显著，但是通过对小鼠的肛温检测，该产品能显著升高由造模药引起的肛温下降情况。