2016-2020年云南省部分猪场猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体检测分析

张振兴,胡 骑,杨钦鸿,2,薛晓岩,2,赵孝慈,3,宋建领*

(1.云南省畜牧兽医科学院,云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,农业农村部部省共建跨境动物疫病防控重点实验室,云南昆明 650224;2.西南林业大学生命科学学院,云南昆明 650224;3.永平县动物疫病预防控制中心,云南永平 672600)

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)又称“猪蓝耳病”,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种急性、高度传染的病毒性传染病,严重威胁生猪养殖业[1-3]。PRRS主要传播方式为空气传播、精液传播、垂直传播等[4],感染后临床症状为母猪繁殖性障碍,母猪早产、流产、产木乃伊胎、死胎等,甚至导致母猪死亡,会造成仔猪严重的呼吸系统疾病甚至死亡[5]。生猪被PRRSV感染后会导致猪免疫功能紊乱,从而引起猪群继发性感染,甚至造成与其他传染病的混合感染,从而加重疫情[6-8]。2017年我国农业部印发《国家高致病性猪蓝耳病防治指导意见(2017-2020)》,明确表示2017-2020年为PRRS免疫预防退出的过渡阶段,2022年农业农村部又印发《国家动物疫病强制免疫指导意见(2022-2025)》,要求各地方可根据本辖区内生猪疫病发生情况对PRRS实行强制免疫[9]。为掌握云南省PRRS疫苗免疫政策转折、过渡阶段实际免疫情况,从而进一步发现PRRS风险防控的薄弱环节,本实验室对2016-2020年云南省部分生猪养殖场PRRS疫苗免疫效果进行动态化监测,以期为云南省PRRS防控提供科学依据,为云南省生猪养殖业健康可持续发展提供保障。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品 样品采集时间为2016年1月至2020年12月,采集范围包括云南省9个州市188个未受野毒感染的健康猪场(包含180个PRRS免疫场和8个非免场),以随机抽样为原则,每个猪场采集样品10～50份,共采集血液样品4 179份(PRRS免疫场4 098份)。

1.1.2 主要试剂 猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒(IDEXX PRRS X3),北京爱德士元亨生物科技有限公司产品,购自昆明中云美生物技术有限公司。

1.1.3 主要仪器 酶标仪(HTX),美国伯腾仪器有限公司产品;离心机(X-15R),美国贝克曼库尔特有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 血清分离与样品检测 用采血管采集血液后在恒温箱中斜放静置4～6 h,待血液完全凝固后放置在4 ℃冰箱2 h,2 h后吸取血清至已灭菌的1.5 mL离心管中并进行编号,保存在-20 ℃冰箱待检。按照猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒说明书进行操作,操作过程基本如下[10]:试验所需试剂恢复至18～26 ℃后在抗原包被板中依次加入稀释后的样品血清、阴性血清和阳性血清后在18～26 ℃条件下进行孵育→连续洗涤3次→加入酶标抗体后在18～26 ℃条件下孵育→连续洗涤5次→加入底物后在18～26 ℃条件下孵育→加入终止液→测定并且分析样品和对照的OD650。试验有效性判定标准为阳性标准样品OD650平均值-阴性标准样品OD650平均值≥0.150、阴性标准样品OD650平均值≤0.150,PRRSV抗体检测结果判定标准按说明书标准(表1)。样品与阳性对照比值(S/P)=(被检样品OD650-阴性对照OD650)/(阳性对照OD650-阴性对照OD650)。

表1 猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测结果的判定标准

1.2.2 数据处理 样品检测结果运用Excel 2007进行统计学处理与分析。

2 结果

2.1 2016-2020年云南省PRRSV抗体检测结果

2016-2020年,采集的云南省保山、楚雄、大理、红河、昆明、普洱、曲靖、西双版纳、玉溪等9个地州(市)188个未受野毒感染的健康猪场共4 179份血清样品,PRRSV抗体阳性样品2 932份,PRRSV抗体阴性样品1 247份,云南省2016-2020年猪场PRRSV抗体阳性率为70.16 %。

2.2 不同年份猪场PRRSV抗体检测结果

不同年份PRRSV抗体检测结果显示,整体上,PRRSV抗体阳性率在2016-2020年呈现逐年下降的趋势,其中2016年度PRRSV抗体阳性率最高,全年度共检测32个猪场的712份血清样品,PRRSV抗体阳性样品数量为548份,PRRSV抗体阳性率为76.97%;2020年度PRRSV抗体阳性率最低,全年度共检测30个猪场754份血清样品,PRRSV抗体阳性样品数量为426份,PRRSV抗体阳性率为56.50%(表2)。

表2 不同年份猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测结果

2.3 不同地区猪场PRRSV抗体检测结果

对来源于9个州(市)猪场的血清样品进行PRRSV抗体检测结果进行统计,结果显示,9个州市样品的PRRSV抗体阳性率存在差异,其中保山市的PRRSV抗体阳性率最高,330份血清样品中PRRSV抗体阳性样品280份,PRRSV抗体阳性率为84.85%;其次为玉溪市和普洱市,分别检测317份、450份,PRRSV抗体阳性样品数量为258份、363份,PRRSV抗体阳性率率分别为81.39%、80.67%;PRRSV抗体阳性率最低的为曲靖市,1 225份血清样品中PRRSV抗体阳性样品数量为709份,PRRSV抗体阳性率为57.88%(表3)。

表3 不同地区猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测结果

3 讨论

PRRS是危害生猪养殖的重要传染病之一,目前市面上还没有能有效根治该病的药物和方法[11],且由于PRRSV具有高度变异性,使的变异毒株毒力进一步增强,导致PRRS具有了更加广泛的传播途径和更高的病死率[12]。疫苗免疫是预防和控制PRRS的主要方法,通过对采集自云南省9个州市188个健康猪场的血清样品进行PRRSV抗体检测,结果表明,2016-2020年的5年中,2016-2018年云南省部分地区PRRS疫苗抗体阳性率分别为76.97%、76.32%、75.75%,达到了我国农业农村部要求的PRRS疫苗抗体阳性率70%的标准;2019-2020年云南省部分地区PRRS疫苗抗体阳性率分别为63.68%、56.50%,并没有达到70%的标准,而且从整体来看,5年的PRRS抗体阳性率呈现出持续下降的趋势。分析原因,一是受到我国2017年取消了PRRS强制性免疫政策影响[13],很多生猪养殖场会根据自身养殖经营情况和经验制定符合自身发展的免疫防护策略;二是2018年以来,非洲猪瘟传入我国,很多生猪养殖场由于人力和资源有限,防控重点转移到非洲猪瘟上,导致PRRS免疫无法做到全覆盖;三是可能由于有些州市因自身财政紧缺,无法根据辖区内动物疫病流行情况将PRRS疫苗采购纳入财政预算有关[14]。

云南省9个州(市)不同猪场PRRSV抗体检测结果显示,部分地区PRRSV抗体阳性率保持在较高水平如保山市、玉溪市、普洱市,PRRSV抗体阳性率分别达到了84.85%、81.39%、80.67%;也有个别州市PRRSV抗体阳性率偏低,如昆明市、大理州、曲靖市,PRRSV抗体阳性率分别为67.42%、61.89%、57.88%。原因可能有:一是可能与各州市生猪养殖场PRRS防疫水平、防疫理念等不一有关,很多生猪养殖场工作人员没有经过系统的兽医培训,在进行PRRSV疫苗免疫过程中未按照相关规范程序进行免疫,也可能由于没有充分考虑免疫频率、免疫剂量、疫苗质量对疫苗免疫的影响[15];二是可能与各州市生猪养殖场选择疫苗免疫程序不同有关,孙雪通过研究发现不同免疫程序对PRRS疫苗免疫效果有不同的影响,其通过试验发现PRRS弱毒苗免疫后猪体内能迅速产生抗体,而PRRSV灭活苗免疫后产生抗体较晚,在加强免疫后才产生特异性抗体,PRRS弱毒苗能更有效的激发生猪只产生体液免疫和细胞免疫反应[16];三是可能是由于考虑到PRRSV的变异和重组使得不同疫苗毒株无法提供有效的交叉保护,甚至会产生应激反应等副反应,很多防护较好的健康猪场没有使用PRRS疫苗有关[7]。在本次调查中,PRRS非免场抗体阳性率达到80%以上,确认为感染PRRSV弱毒株导致,但由于生猪为隐性带毒,不影响生猪生产性能,未再进行PRRSV疫苗免疫。

4 结论

对云南省9个州市进行了PRRSV抗体检测,通过5年的探究和数据分析初步摸清了这些地区的PRRS疫苗免疫情况。云南省9个州(市)不同猪场PRRSV抗体检测结果能一定程度上反映出不同地区对PRRS的重视程度以及疫苗免疫的普及程度和免疫效果[17]。对于PRRS的预防,应加强生产管理,保持健康饲养,在生产中坚持自繁自养、整进整出,把好种源关头,科学合理用药[18]。科学合理选择疫苗、制定疫苗免疫程序,提高疫苗免疫效果仍然是预防PRRS的首选策略,各地区各猪场应该重视PRRS疫苗接种,加强PRRS血清学、病原学检测,多管齐下,才能更加利于PRRS疫情的防控。