金贵兵,杨 丁,金仕强,邹仲航,牟燕平,青云峰,闫雪锋,赵明德,古从伟,何绿琴*
(1.宜宾市叙州区动物疫病预防控制中心,四川宜宾 645250;2.宜宾市动物疫病预防控制中心,四川宜宾 645250;3.宜宾市叙州区城区屠宰检疫工作站,四川宜宾 645250;4.广元市昭化区动物疫病预防控制中心,四川广元 628000;5.西南医科大学体育学院,四川泸州 646000;6.西南医科大学实验动物中心,四川泸州 646000)
猪高热综合征是一种发病率和致死率都很高的传染病[1,2],该病暴发之初,常被称之为猪高热病或猪无名高热病,后经中国农业大学杨汉春教授建议统一称之为猪高热综合征[3]。猪高热综合征不是单纯一种疾病,而是由猪瘟病毒、猪圆环病毒2 型以及猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪伪狂犬病毒、链球菌、副猪嗜血杆菌、附红细胞体等多种病原微生物混合感染所引起。猪高热综合征传染性极强,3~7d 便可传遍整个猪群,随之向周围猪场扩散,呈区域暴发流行。猪高热综合征可发生于各年龄、各品种的猪[4],育肥猪与保育猪患病后表现出持续高热、呼吸急促、四肢抽搐及呕吐等症状。猪高热病综合征缺乏特效疫苗和治疗药物[1],长期使用抗生素会造成生猪机体免疫力下降,容易诱发各类疾病[2]。中兽医往往使用提高动物机体抵抗力、消炎解毒的方法展开治疗,以清热除湿、去火解毒、通腑泄热、扶正固本为治疗原则[5]。中草药作为饲料添加剂不仅可以减少西药使用频率和剂量,还可降低猪群抗生素耐药性。
本研究采用酶联免疫吸附试验(Enzymelinked Immunosorbent Assay,ELISA),对猪血清中猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬、猪圆环病毒、猪附红细胞体、猪链球菌、副猪嗜血杆菌、猪丹毒、猪多杀性巴氏杆菌和非洲猪瘟抗体水平进行检测,评价3 种中草药方剂(连解毒散3kg+清瘟败毒散3kg、金美康2kg+生泰蓝2kg、金黄连枝颗粒1kg+青蒿常山颗粒1kg)作为饲料添加剂对生猪的保健效果,为生猪中草药饲料添加剂的应用提供参考依据,从而促进生猪健康生长。
本研究中所用的猪瘟抗体检测试剂盒的生产厂家为中国兽医监察所;猪繁殖与呼吸综合征抗体检测和猪圆环病毒2 型抗体检测试剂盒的生产厂家为中国农业科学院哈尔滨兽医研究所;猪伪狂犬gE、gB 抗体检测试剂盒的生产厂家为北京爱德士生物科技有限公司;猪附红细胞体抗体检测、猪链球菌抗体检测、副猪嗜血杆菌抗体检测、猪丹毒抗体检测和猪多杀性巴氏杆菌抗体检测试剂盒的生产厂家均为上海科艾博生物;非洲猪瘟抗体检测试剂盒的生产厂家为河南普泰生物科技有限公司。酶标仪购自赛默飞世尔科技公司,微量移液器购自Eppendorf 公司。
1.2.1 试验分组及用药
选择四川省宜宾市叙州区规模化猪场3 月龄健康猪群。将60 头试验猪随机分为4 组,每组15 头,试验组(A、B、C 组)在1000kg 基础饲粮中添加中药制剂,对照组(D 组)饲喂基础日粮。A、B、C 组分别添加连解毒散3kg+清瘟败毒散3kg、金美康2kg+生泰蓝2kg、金黄连枝颗粒1kg+青蒿常山颗粒1kg。试验程序如下:用药14d,停药10d,再用药14d,再停药15d,试验期共60d。
1.2.2 样品采集和检测
分别采集使用中药作为饲料添加剂前后各组动物的血液,离心后收集血清。ELISA 检测猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬、猪圆环病毒、猪附红细胞体、猪链球菌、副猪嗜血杆菌、猪丹毒、猪多杀性巴氏杆菌病的抗体水平。
动物试验后,A、C 组猪瘟抗体阳性率分别减少42.86%、0.89%,B 组猪瘟抗体阳性率增加6.25%,对照组试验后猪瘟抗体阳性率不变;A组非洲猪瘟抗体阳性率不变,B 组、对照组非洲猪瘟抗体阳性率分别减少7.14%、6.25%,C 组动物试验后非洲猪瘟抗体阳性率增加7.14%;A 组蓝耳抗体阳性率增加14.29%,B、C 及对照组蓝耳抗体阳性率分别减少27.68%、26.79%以及28.57%(见表1)。
表1 不同病毒及细菌抗体阳性率结果单位:%
动物试验后,A、B 组伪狂犬gE 抗体阳性率分别增加13.99%、18.75%,C 组伪狂犬gE 抗体阳性率减少18.75%,对照组gE 抗体阳性率增加4.46%;A 组伪狂犬gB 抗体阳性率增加41.67%,B、C 及对照组动物试验后伪狂犬gB 抗体抗体阳性率分别减少12.50%、43.75%以及12.50%;A、C 组圆环2 型抗体阳性率不变,B 组、对照组圆环2 型抗体阳性率分别减少12.50%和50.00%(见表1)。
动物试验后,A、B 组附红细胞体抗体阳性率分别增加23.81%、1.79%,C 组、对照组动物试验后附红细胞体抗体阳性率分别减少25%、9.82%;A、C 组动物试验后链球菌抗体阳性率分别减少8.33%、6.25%,B 组、对照组试验后链球菌抗体阳性率基本没有改变;A、C 组动物试验后副猪嗜血杆菌抗体阳性率分别减少30.65%、28.57%,B 组、对照组试验后副猪嗜血杆菌抗体阳性率均增加18.75%(见表1)。
A 组动物试验后猪丹毒抗体阳性率增加7.14%;B、C 和对照组试验后猪丹毒抗体阳性率没有变化。A 组、对照组动物试验后猪多杀巴氏杆菌抗体阳性率分别增加10.42%和7.14%;B、C 组试验后猪多杀性巴氏杆菌抗体阳性率没有明显变化(见表1)。
黄连解毒散加清瘟败毒散组猪群血清中猪瘟、链球菌、副猪嗜血杆菌抗体阳性率分别降低了42.86%、8.33%、30.65%。猪瘟是世界动物卫生组织所规定的必须通报的猪重要传染病[6],其预防控制的好坏直接影响养殖场的猪群健康[7,8]。猪链球菌病是一种人畜共患病,能引起猪的败血症、肺炎、脑膜炎、多发性关节炎和多发性浆膜炎[9]。猪链球菌2 型溶菌酶释放蛋白(Muramidase-released protein,MRP)可诱导上皮细胞融合及凋亡,破坏上皮细胞屏障功能,是猪链球菌感染过程中突破血脑屏障的关键机制之一[10]。
金美康加生泰蓝组猪群血清中非洲猪瘟、蓝耳、伪狂犬gB 抗体、圆环2 型抗体阳性率分别降低7.14%、27.68%、12.50%、12.50%。蓝耳病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)可引起妊娠母猪繁殖障碍及仔猪呼吸道疾病、免疫抑制及持续性感染[11]。Allende等研究发现,猪“高热病”的主要致病病原为Nsp2 缺失30 个氨基酸的高致病性PRRSV[12]。圆环病毒2 型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染引起的疾病主要是断奶后多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syn drome,PMWS),在仔猪培后期及育肥猪可出现皮炎和肾病综合症(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome,PDNS)[13-15]。临床PCV2 常与猪肺炎支原体混合感染[16],也经常与蓝耳病、伪狂犬病、链球菌等混合感染[17]。猪圆环病毒感染属于病毒性疾病,单用抗生素药剂治疗效果较差,采用中兽医的方法治疗猪圆环病毒病具有良好的治疗效果,可将疾病危害降至最低[18]。非洲猪瘟病毒感染后会造成易感动物大批量死亡[19,20],其疫苗还处于研发阶段[21,22]。我国自2018 年非洲猪瘟疫情暴发,生猪存栏量与能繁母猪存栏量骤然下降,给养猪行业造成巨大经济损失[23]。
金黄连枝颗粒加青蒿常山颗粒组猪群血清中蓝耳、伪狂犬gB、伪狂犬gE、附红细胞体、链球菌、副猪嗜血杆菌抗体阳性率分别降低26.79%、12.50%、18.75%、25%、6.25% 和28.57%。猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病病毒(PRV)引起的急性、烈性、高度接触性的猪传染病[24,25],临床上以发热、急性脑脊髓炎和繁殖障碍为主要症状。猪是PRV 唯一的自然宿主和储存宿主,已成为一种严重的全球性猪疾病,目前还没有治疗该病的特效药[26]。猪附红细胞体病通常会与猪瘟、链球菌病和弓形虫等疾病发生混合感染,对养殖户造成了很大的经济损失[27-29]。目前主要通过广谱抗生素来进行猪附红细胞体病的防治,但抗生素的滥用和过度使用会导致生猪产生一定的耐药性,且抗生素残留对人类公共卫生安全造成了严重威胁[30]。中草药对动物机体伤害小,吸收后会排出,即使残留在身体里的药物也基本没有毒副作用[31]。
在本试验条件下,黄连解毒散加清瘟败毒散、金美康加生泰蓝、金黄连枝颗粒加青蒿常山颗粒作为饲料添加剂,对猪群能起到一定保健作用。生猪养殖期间结合疫病流行特点,在疾病进入流行高发期前期,可在猪饲料或饮用水中添加相应的中药组方,增强猪群自身抵抗能力。结合免疫、消毒、生物隔离等综合防控措施进行推广应用,促进我国生猪养殖产业的健康发展。