食品中总皂苷的测定方法改进

◎ 莫素青，陈 晔

（广西壮族自治区新材料技术工程院，广西 南宁 530000）

总皂苷是一类存在于植物中的天然化合物，具有多种功效和作用，如抗氧化、降血脂、免疫调节及抗脑血管损伤等，在保健和医学领域备受关注。近年来，总皂苷在食品行业被广泛应用，添加总皂苷的食品越来越多，因此建立一种高效稳定的食品中总皂苷的测定方法显得尤为重要。

目前食品（含保健食品）中总皂苷的测定方法比较多，如液相色谱法、近红外光谱法、紫外分光光度法[1]等，但我国尚无国家标准方法，食品中总皂苷的检测主要参考《保健食品理化及卫生指标检验与评价技术指导原则》（2020 年版）第二部分第十四章中“保健食品中总皂苷的测定”，该方法分析步骤多、检测时间较长，特别是试样净化处理后，洗脱液于60 ℃水浴挥干的时间较长，且检测结果精密度差、方法回收率差。本文针对该检测方法进行改进，旨在完善该检测方法，提高该法检测结果的准确度。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

1.1.1 材料

样品：金花茶花；人参皂苷Re：天津中易嘉信科技发展有限公司/斯坦福分析化学公司，纯度：99.9%；Amberlite-XAD-2 大孔树脂：20 ～60 目；中性氧化铝：层析用（100 ～200 目）；无水乙醇、甲醇、高氯酸、冰乙酸、香草醛，分析纯[2]。

1.1.2 仪器和设备

TU-1901 双光束紫外可见分光光度计、电子天平（感量分别为0.01 mg 和0.1 mg）、超声波清洗仪、恒温水浴锅、温控氮吹仪。

1.2 样品前处理

称取2 g（精确至0.000 1 g）经粉碎的样品，经溶剂提取后净化，洗脱液定容后，根据试样中总皂苷含量的高低，分取一定体积洗脱液浓缩至干，显色，于560 nm 波长测定吸光值。

1.3 标准溶液的配制

准确称取18.90 mg 人参皂苷Re 标准品，用甲醇溶解并定容至25 mL，得到人参皂苷Re 标准贮备液（0.756 mg·mL-1）。分别吸取人参皂苷Re 标准贮备液0.10 mL、0.15 mL、0.20 mL、0.25 mL、0.30 mL 以及0.35 mL，得到系列标准点：0.075 6 mg、0.113 4 mg、0.151 2 mg、0.189 0 mg、0.226 8 mg 和0.264 6 mg。

1.4 实验方法

1.4.1 显色前不同浓缩方式对系列标准浓度吸光值稳定性以及曲线线性的影响

系列标准浓度显色前分别采用60 ℃水浴挥干和60 ℃氮吹至干进行处理，做6 次平行试验，并绘制标准曲线，考察显色前不同系列标准浓度的处理方式对数据稳定性及标准曲线线性的影响[3-5]。

1.4.2 净化时不同洗脱液对样品测定回收率的影响

净化样品提取液时，分别采用70%乙醇和70%甲醇进行洗脱，进行低、中、高3 个水平加标，考察不同洗脱液对回收率的影响[6]。

1.4.3 显色前样品洗脱液不同浓缩方式对样品测定结果稳定性的影响

显色前，分别采用60 ℃水浴挥干和60 ℃氮吹至干对样品洗脱液进行处理，进行6 次平行试验，考察不同处理方式对样品测定结果稳定性的影响。

1.4.4 不同洗脱液和洗脱液浓缩方式对不同量洗脱液浓缩时间的影响

试样提取液经净化后分别采用70%甲醇、70%乙醇洗脱定容，分别取5 mL、10 mL、15 mL 采用60 ℃水浴挥干、60 ℃氮吹至干的浓缩方式进行试验，考察不同洗脱液和洗脱液浓缩方式对不同量洗脱液浓缩时间的影响。

2 结果与分析

2.1 显色前不同浓缩方式对系列标准浓度吸光值稳定性以及曲线线性的影响

由表1 可知，氮吹方式处理的各浓度点6 次平行试验吸光值的相对标准偏差均≤6.0%，说明该方式处理的同一浓度点平行试验吸光值离散程度较小、数据间的稳定性较好；而水浴方式处理的各浓度点6 次平行试验吸光值的相对标准偏差均大于10%，最高达到48.7%，说明该方式处理的同一浓度点平行试验吸光值离散程度较大、数据间的稳定性较差。水浴处理的同一浓度点6 次平行试验吸光值波动幅度大，而氮吹处理的稳定性很好。

表1 不同浓缩方式的系列标准浓度吸光值测定结果表

由表2 可知，人参皂苷含量在0.075 6 ～0.264 6 mg时，60 ℃氮吹方式得到的标准曲线相关系数R2明显优于60 ℃水浴方式，而且60 ℃水浴方式处理的标准点曲线线性（R2）低于0.99，曲线相关性差。因此，选择氮吹方式有利于该测定方法标准曲线的建立，得到稳定性好、线性好的标准曲线，也有利于在不同时期测定皂苷时及时发现异常数据。

表2 不同浓缩方式的系列标准浓度曲线线性比较表

2.2 净化时不同洗脱液对样品测定回收率的影响

洗脱液浓缩选择60 ℃氮气吹干的方式，由表3 可知，使用两种不同的洗脱液，样品回收率均在85%以上，在标准曲线线性范围内，加标浓度越高，样品回收率越高。用70%甲醇洗脱，低、中、高3 种不同加标量的回收率均高于90%，回收率相对较好；采用70%乙醇洗脱，加标量低的样品回收率低于90%；且对于同一加标水平，采用70%甲醇洗脱均比70%乙醇洗脱回收率更好。因此，选用70%甲醇洗脱进行后续实验更利于食品中总皂苷含量的测定。

表3 净化时不同洗脱液对样品测定回收率的影响表

2.3 显色前样品洗脱液不同浓缩方式对样品测定结果稳定性的影响

净化时的洗脱液选用70%甲醇，由表4 可知，采用60 ℃水浴挥干的6 次平行试验结果相对标准偏差超过8%，同一样品测定结果数据相对离散，难以满足第三方检测机构对检测数据稳定性的要求；采用60 ℃氮吹至干的6 次平行试验结果相对标准偏差为2.4%，数据相对集中、稳定，采用该方式对样品洗脱液进行处理，更有利于检测工作的开展。

2.4 不同洗脱液和洗脱液浓缩方式对不同量洗脱液浓缩时间的影响

由表5 可知，对于不同量的洗脱液，70%乙醇+60 ℃水浴挥干的方式所消耗的时间均比70%甲醇+60 ℃氮吹至干的方式消耗的时间长。当浓缩量为15 mL 时，采用70%甲醇+60 ℃氮吹至干的方式较70%乙醇+60 ℃水浴挥干的方式可节省65 min，对于常年大批量连续检测样品的检验机构，该方式可以节省大量人力成本和时间成本。

3 结论

本文对保健食品中总皂苷的测定方法进行了改进，用70%甲醇代替70%乙醇作为洗脱液，用60 ℃氮气吹干代替60 ℃水浴挥干进行试验，结果表明改进后的方法比《保健食品理化及卫生指标检验与评价技术指导原则》（2020 年版）第二部分第十四章中“保健食品中总皂苷的测定”更高效省时，对于样品量大的检验机构具有很大意义；系列标准吸光值更稳定，所得标准曲线相关系数更好；样品测定液的吸光值也更稳定、样品测定结果重现性更好，回收率更高。因此，改进后的方法更有利于食品中总皂苷的测定。