外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977与狼疮性肾炎疾病活动性的关系及临床价值

赵志娟 仝 岩 李文博 冯慧洁

河南中医药大学第一附属医院检验科,河南省郑州市 450000

狼疮性肾炎(LN)为系统性红斑狼疮常见并发症,临床表现除系统性红斑狼疮症状外,还存在肾功能不全、血尿、蛋白尿等,且疾病严重程度与治疗方案选择、预后密切相关[1-2],故而临床早期诊断及早干预具有重要作用。临床目前对LN的诊断以病理学活检为金标准,但其属于侵入性操作,创伤较大,故而作为肾脏损伤程度评估的常用检查手段并不理想。随着临床研究深入,分子诊断得到重视。机体肾小球免疫复合物沉积为LN发生的原因之一,而微小RNA(miRNA)作为内源性编码单链RNA分子,在LN发生中发挥了重要作用[3-4]。基于此,本研究选取我院收治的104例LN患者为研究对象,探讨外周血微小RNA-23b(miR-23b)、微小RNA-202-3p(miR-202-3p)、微小RNA-7977(miR-7977)在LN疾病活动性中的临床价值,旨在为临床判定LN疾病活动性提供参考,现分析如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2020年4月—2022年5月收治的104例LN患者为研究对象,其中女49例,男55例,年龄20～55岁,平均年龄(38.20±7.54)岁,病程0.5～7.0年,平均病程(3.53±1.50)年。纳入标准:符合LN相关诊断标准[5];知情本研究,签署同意书;血液系统功能正常;精神、认知正常。排除标准:合并其他肾病;心力衰竭;恶性肿瘤;感染性疾病;肾功能衰竭;合并其他免疫系统疾病;过敏性疾病;呼吸衰竭。根据入院时系统性红斑狼疮疾病活动指数(SLE-DAI)将患者分为活动组(63例,SLE-DAI评分≥10分)和稳定组(41例,SLE-DAI评分<10分)。研究经我院医学伦理委员会审核批准。

1.2 方法 收集LN患者临床资料,包括性别、年龄等;采集其入院时空腹血液约5ml,离心(3 000r/min,10min,8.5cm),取血清,使用实时定量聚合酶链反应法测定miR-23b、miR-202-3p、miR-7977表达量;使用HITACHI 7600-210自动生化分析仪测定血肌酐(SCr),使用Sysmex XE-2100血液分析系统测定红细胞沉降率(ESR),使用免疫比浊法测定补体C3、补体C4,计算肾小球过滤率(eGFR)=186×(SCr)-1.154×(年龄)-0.203×0.742。

1.3 观察指标 (1)比较两组一般临床资料,包括性别、年龄、体重指数(BMI)、病程、吸烟史、饮酒史、高血压、eGFR、SCr、ESR、补体C3、补体C4等。(2)比较两组入院时外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977水平。(3)分析外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977水平与临床有差异指标、SLE-DAI评分的相关性。(4)分析影响LN疾病活动性的因素。(5)外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977水平联合检测对活动性LN的诊断价值。

2 结果

2.1 两组一般临床资料比较 两组性别、年龄、BMI、病程、吸烟史、饮酒史、高血压情况比较,差异无统计学意义(P>0.05);活动组eGFR、SCr、ESR、补体C3、补体C4水平与稳定组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组一般临床资料比较

2.2 两组入院时外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977水平比较 与稳定组相比,入院时活动组外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977水平均较低(P<0.05)。见表2。

表2 两组入院时外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977水平比较

2.3 miR-23b、miR-202-3p、miR-7977与临床有差异指标、SLE-DAI评分的相关性 入院时外周血miR-23b、miR-7977、miR-202-3p水平与eGFR、补体C3、补体C4水平呈正相关,与ESR、SCr、SLE-DAI评分呈负相关(P<0.05)。见表3。

表3 miR-23b、miR-202-3p、miR-7977与临床有差异指标、SLE-DAI评分的相关性

2.4 影响LN疾病活动性的因素 以LN疾病活动性为因变量,将LN患者入院时eGFR、SCr、ESR、补体C3、补体C4、外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977水平作为自变量,对自变量进行赋值(以104例的平均值为界:≤平均值=1,>平均值=2)。eGFR:≤76.93ml/(min·1.73m2)=1,>76.93ml/(min·1.73m2)=2;SCr:≤96.01μmol/L=1,>96.01μmol/L=2;ESR:≤53.66mm/h=1,>53.66mm/h=2;补体C3:≤0.80g/L=1,>0.80g/L=2;补体C4:≤0.24g/L=1,>0.24g/L=2;miR-23b:≤0.49=1,>0.49=2;miR-202-3p:≤10.49=1,>10.49=2;miR-7977:≤6.10=1,>6.10=2。Logistic回归分析显示,入院时eGFR≤76.93ml/(min·1.73m2)、SCr>96.01μmol/L、ESR>53.66mm/h、补体C3≤0.80g/L、补体C4≤0.24g/L、外周血miR-23b≤0.49、miR-202-3p≤10.49、miR-7977≤6.10水平是活动性LN的危险因素(P<0.05)。见表4。

表4 影响LN疾病活动性的因素

2.5 外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977水平联合检测对活动性LN的诊断价值 以活动性LN患者为阳性样本,以稳定性LN患者为阴性样本绘制ROC曲线。结果显示,外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977水平联合诊断活动性LN的AUC为0.882,最佳诊断敏感度、特异度分别为80.95%、95.12%。见表5。

表5 外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977水平联合检测对活动性LN的诊断价值

3 讨论

LN为免疫复合物性肾小球炎性反应,可增加系统性红斑狼疮患者病死风险,因肾活检临床广泛应用受限,需积极寻找评估LN疾病活动程度的其他指标,以帮助临床早期诊断、干预,从而改善预后。miRNA是生物学研究的热点,与机体免疫功能、自身免疫耐受水平密切相关,在大多数自身免疫性疾病中呈异常表达,尤其是系统性红斑狼疮等患者[6-8]。在本研究中,LN患者外周血miR-23b呈异常表达,且其表达水平≤0.49是活动性LN的危险因素。有关研究发现[9],miR-23b在系统性红斑狼疮中呈低表达,可能通过介导转化生长因子β1/Smad3通路参与到其发生、发展过程中,并与疾病活动性具有明显关联性。系统性红斑狼疮患者可能存在Treg细胞功能缺陷,而在Treg细胞中miR-23b靶基因→叉头状转录因子P3呈特异表达,故而可影响自身免疫功能,且miR-23b-BMSCs促使转化生长因子β大量分泌时,可加快Treg细胞分化[10]。故而miR-23b与系统性红斑狼疮发生、疾病活动程度有关。

本研究结果显示,miR-202-3p与LN有关,其表达水平与疾病活动度具有相关性,外周血miR-202-3p≤10.49时为活动性LN的危险因素。庞杰等[11]研究发现,系统性红斑狼疮患者血清miR-202-3p水平与T淋巴细胞亚群具有显著相关性,可参与患者免疫反应调控过程,且其表达缺失时可激活免疫炎性反应,促使系统性红斑狼疮发生、发展。miR-202-3p与机体免疫反应有关,其可靶向结合PPARGC1A mRNA,抑制Toll样受体信号传导及其介导的免疫反应,从而加重系统性红斑狼疮病情,导致LN。

miR-7977是临床近年新发现的miRNA,可参与细胞分化、增殖等行为过程,在自身免疫性疾病等疾病中扮演重要角色。本研究结果还显示,LN患者外周血miR-7977呈异常表达,并与eGFR、补体C3、补体C4、ESR、SCr、SLE-DAI评分具有紧密关联性,且是活动性LN的危险因素。杜然等[12]研究指出,外周血miR-7977表达水平越低,LN病情越严重,与本研究结果一致。miR-7977异常升高可促进炎性介质释放、加重免疫系统紊乱程度,加快弥漫性增生性疾病发生,引起LN[13]。因此,临床积极关注LN患者外周血miR-7977表达水平具有数据指导作用。

另外,本研究ROC曲线分析显示,外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977水平联合诊断活动性LN的AUC、敏感度、特异度最佳,故而推荐将其作为常用指标进行推广应用。

综上所述,LN患者外周血miR-23b、miR-202-3p、miR-7977水平异常表达,并与疾病活动程度有关,联合检测有助于临床判定疾病活动度。