白带常规与阴道炎六联检在阴道感染性疾病病原体检测中的价值

翁宝川 王菜籽 杨雅英

阴道微生态系统是成年女性生殖健康的基础和保障，该系统是由内分泌、免疫、微生态菌群、生理结构等构成，各成分发挥着协调、制约的作用，进而使女性的生殖道微环境维持在一个动态稳定、协调的健康状态[1]。但是在外部病原微生物的侵入及影响下，阴道的自净与防御机能下降的状态会造成该系统破坏，进而易发阴道感染性疾病，对成年女性身心健康和生活质量造成不利影响。研究报道，成年女性的各项激素水平发生改变，会诱发阴道上皮细胞的糖原量增加，进而影响局部酸碱平衡，而这就可能增加外部病原微生物的感染风险，所以成年女性的阴道感染及炎性疾病有着较高发生率[2]。早检查、早诊断是防治成年女性阴道感染性疾病发生的关键。既往常采用白带常规对阴道微生态进行检查，在阴道感染性疾病早期诊断中的敏感性整体不高[3]。近年来，随着妇科诊疗技术的发展，阴道炎六联检在生殖感染性疾病诊断中的应用以来，对其监测阴道感染性疾病的病原体检测研究不多。基于此，本研究采取对照研究法探讨白带常规联合阴道炎六联检在阴道感染性疾病的病原体检查及临床诊断中的价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

将2022 年11 月—2023 年4 月在厦门市第三医院接受妇科诊治的500 例白带异常患者纳入观察，均因白带增多、有异味、色变就诊。纳入标准：（1）均存在性生活史，接受检查前3 d 无性生活。（2）未应用阴道置入性药物及抗生素。（3）年龄＞18 岁。（4）未行阴道灌洗，经期完成1 周。（5）对临床检查知情并配合。排除标准：（1）合并生殖疾病。（2）合并机体血液、免疫系统疾病。（3）合并泌尿系统感染。患者年龄24～55 岁，平均（32.5±4.7）岁；生育史：有358 例，无142 例。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 采样

由临床医生应用无菌拭子在受检对象的阴道后穹隆及阴道上1/3 部位刮取适量分泌物，直接涂在一张载玻片和置于一管专用采样试管内，并及时送检。

1.2.2 检测

白带常规：采用白带多功能染色液，严格按照试剂盒说明书操作。常规检测包括阴道清洁度、念珠菌属、滴虫、白细胞（white blood cell，WBC）、加特纳菌、线索细胞、纤毛菌、肾形双球菌、核异质细胞等组织、细胞、微生物检测。由医生采集白带直接涂在玻片上，待干后，滴R1 液（红）3～4 滴展开，盖住涂膜染色15～20 s 后，水洗，去除片上多余水分，滴R2 液（蓝）3～4 滴染色10～15 s 后，水洗，趁湿放显微镜移动夹上，用低倍镜观察全片，再用高倍镜检查，如遇肾形双球菌，待片干后，换油镜仔细检视。如遇细胞外肾形相对双球菌，建议做细菌培养鉴定。

阴道炎六联检：主要检测唾液酸苷酶（sialidase，SA）、白细胞酯酶（leukocyte esterase，LE）、乙酰氨基-β-半乳糖苷酶（acetylamino-β-Galactosidase，Aβ-G）、脯氨酸氨基肽酶（proline aminopeptidase，PA）、过氧化氢浓度、pH 值。由同一个检验人员操作。先将配套样本稀释液加入10 滴由医生采集好的试管中，充分摇匀，同时充分挤压采样的棉签拭子，再取出弃拭子，得样本液待检。将试剂平衡到室温，取出反应装置并将避光放置，将棉签采集样品置入软试管中，加400 μL 稀释液，反复挤压棉签，使样品溢出，于反应装置的六孔中每孔滴加1 滴稀释后样品，每滴约35 μL，再在SA 反应孔中滴加1 滴显色液A，37 ℃反应7 min 后于凝固酶反应孔中滴加1 滴显色液B 继续反应3 min 后，10 min 内判读结果。依照比色卡读取结果并统计分析。

1.3 判定标准

1.3.1 白带常规判定

清洁度。临床医生直接将分泌物涂于载玻片上进行特殊染色后，通过光学显微镜检测，主要观察上皮细胞、阴道杆菌、WBC、脓细胞及杂菌等分布情况，并评估清洁度。具体分为：Ⅰ度，在镜下能够观察到大量的上皮细胞，且以阴道杆菌为主。Ⅱ度，在镜下能够观察到部分上皮细胞、阴道杆菌，伴或不伴其他微生物。Ⅲ度，在镜下可以观察到无或少量的上皮细胞和阴道杆菌，但其他如WBC、脓细胞、杂菌大量存在。Ⅳ度，在镜下未观察到阴道杆菌，基本上是WBC、脓细胞、杂菌[4]。

然后在显微镜下观察有无滴虫、真菌等情况。凡可以观察到线索细胞和（或）大量脓细胞和（或）滴虫和（或）念珠菌等病原体，均判定存在阴道炎；如镜下未能明确杂菌的类型，但清洁度为Ⅲ度以上则判定为阴道炎；如镜下有线索细胞再加以下其中2 条：（1）阴道分泌物稀薄均匀。（3）pH 值≥4.5。（3）胺试验呈阳性，清洁度为Ⅲ度以上。即可诊断为阴道炎[5]。

1.3.2 阴道炎六联检判定

正常阴道分泌物pH 3.8～4.5，当pH ≥4.5 时判定为阴道炎，pH ＜4.5 判定为真菌性阴道炎，pH ≥5.0 时判定为滴虫阴道炎；过氧化氢浓度与乳酸杆菌数量呈正比；SA 阳性表示阴道炎；LE 阳性表示有炎症存在，但不能说明什么病原菌感染；PA 阳性也考虑阴道炎和念珠菌感染；Aβ-G 阳性表示有真菌和（或）阴道毛滴虫感染，但真菌中白念珠菌和热带念珠菌含有此酶，而克柔念珠菌和光滑念珠菌无此酶活性。

1.3.3 联合诊断

在联合诊断中，如可观察到线索细胞和（或）大量脓细胞和（或）滴虫和（或）念珠菌等病原体，清洁度在Ⅲ度以上，以及根据pH ≥4.5 进行联合诊断。

1.4 观察指标

观察不同检查方法下WBC 计数增高、细菌性感染、念珠菌感染、滴虫感染的检出率，阴道炎检出率为几项检出率的总和。观察不同检查方法下白带清洁度。

1.5 统计学处理

采用SPSS 23.0 统计学软件进行数据分析。计数资料以n（%）表示，采用χ2检验或等级秩和检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同检查方法下WBC 计数增高、细菌性感染、念珠菌感染、滴虫感染及阴道炎检出率比较

白带常规联合阴道炎六联检的细菌性感染、念珠菌感染、滴虫感染的检出率及阴道炎检出率均高于单一方法检测，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 不同检查方法下WBC 计数增高、细菌性感染、念珠菌感染、滴虫感染及阴道炎检出率比较[例（%）]

2.2 不同检查方法下白带清洁度比较

白带常规、阴道炎六联检及联合检测的白带清洁度比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 不同检查方法下白带清洁度比较[例（%）]

3 讨论

正常成年健康女性的阴道微生态是稳定的，乳酸杆菌是主要的优势菌群，阴道上皮细胞糖原通过该菌群产生乳酸，以确保阴道环境维持在弱酸环境中，此种环境有助于抑制致病微生物的存活、繁殖，发挥一种阴道自净和防御屏障的功能，但是由于饮食、性生活、妊娠、病原菌感染等，会导致白带异常，使阴道微生态平衡打破，这就给其他病原生物的生长繁殖提供了环境。与此同时，个体内分泌激素的变化在一定程度上也会影响阴道微生态的平衡，这就大大增加了外源性病原微生物的侵入，进而增加了阴道感染性疾病的发生风险。从临床上看，阴道感染性疾病主要表现为分泌物异常、瘙痒、异味等，存在特异性。临床上仅有宫颈炎性疾病的症状与之相似，因而对大部分而言，需要跟进临床症状、阴道分泌物性状等诊断[5]。但在治疗上通常需根据患者个体感染的病原微生物信息针对性用药，不能判定感染病原微生物而根据经验用药可能会造成抗生素应用不当，影响疗效和预后，且会增加耐药性，增加治疗难度。因而，有必要探寻新的、针对白带检查诊断方法。

近年来，有临床研究人员指出，受阴道自洁及防御屏障作用的影响，成年阴道感染性疾病的发病存在一定的过程与阶段[6]。因此，在早期阶段通过相关检验指标的观察实现阴道感染性疾病的早期预防对提升疾病治疗有效率、降低疾病对女性生殖健康的影响具有积极作用。白带常规检测是妇科的一般检查，通过白带检测可以发现患者阴道分泌物中的各种成分，来分析患者的感染情况，然后发现病原体，可以针对性地治疗感染，效果较好[7]。通过白带常规检查进行诊断，临床常规使用显微镜观察标本，这种方法具有较强的主观意志活动，人为干扰较大，对技术水平的要求较高[8]。因此，近年来临床采用试剂盒检测实现简单、快速、全面评估女性阴道微生态情况，对于处于亚临床感染的阴道微生态评估则更有助于预防阴道感染的发生，具有评价与预防价值。近年来临床主张采用阴道炎六联检，在SA、LE、过氧化氢的检测基础上追加PA、Aβ-G 与pH，从而进一步提升阴道微生态环境评估的全面性与准确性[9]。但不同检测方法的实际应用检测效能以及检测精确度往往存在较大的差异。本研究结果显示，白带常规联合阴道炎六联检的细菌性感染、念珠菌感染、滴虫感染的检出率及阴道炎检出率均高于单一方法检测，差异有统计学意义（P＜0.05），白带常规、阴道炎六联检及联合检测的白带清洁度比较，差异有统计学意义（P＜0.05），与相关研究报道一致[10]。由此表明，阴道炎六联检对女性阴道感染性疾病的检出率高于白带常规镜检。

阴道炎六联检作用机制就是当成年女性阴道发生或存在炎症改变时，阴道内环境的pH 值均会发生不同程度的升高，通过采集阴道分泌物并检测其pH 值，如果pH值高于正常健康生理状态下女性阴道内环境pH 值范围则表明可能存在感染的风险[11]。其中阴道炎六联检项目中LE 是存在于WBC 中的中性粒细胞内，其他细胞内则没有。只要在阴道分泌物中检测到中性粒细胞也就是炎症细胞，表示阴道黏膜受损，有炎症存在。相较于白带常规镜检，阴道炎六联检对LE 的检测可实现定性检测，有效避免镜检法中因WBC 破碎或其他非炎症细胞存在而无法有效评估的情况。SA 则为阴道炎的可靠标志物之一，其主要由感染的细菌分泌产生。而PA 则与阴道炎、念珠菌的感染具有一定关系。Aβ-G 辅助诊断真菌和（或）阴道毛滴虫感染[12]。通过对6 个项目的联合检测可在阴道微生态评估与感染性疾病诊断中的价值得到进一步提高，并且与常规镜检的联合检测可快速、准确、简单地进行微生态评估与感染诊断。

综上所述，成年女性阴道微生态环境直接关系到生殖系统的健康，一旦生态环境受到影响，那么阴道感染性疾病的发生风险增高，而白带常规联合阴道炎六联检在女性阴道微生态评估中大大提高检出率，可用于成年女性阴道感染病原体检查及诊断。同时，此文的研究结果为检测阴道感染性疾病后期标准的制定提供了借鉴内容。