百香果皮分级萃取物中多酚轮廓分析及其抗氧化活性物质筛选

2024-02-17 13:20么亚妹陈奕彤田永涛刘天悦王文蜀
食品工业科技 2024年1期
关键词:粗提物百香果黄酮

么亚妹,陈奕彤 ,田永涛,刘天悦,王文蜀,

(1.质谱成像与代谢组学国家民委重点实验室(中央民族大学),北京 100081;2.中央民族大学生命与环境科学学院,北京 100081)

当今社会面对慢性疾患和人口老龄化双重挑战,含有天然抗氧化剂的功能性食品及相关产品是人类防治慢性疾患和健康管理关口前移的重要物质[1]。百香果(PassifloraedulisSims)是西番莲科(Passifloraceae)西番莲属(PassifloraLinn.)多年生攀援藤本植物,因其独特风味和较高营养价值备受消费者喜爱,现于广西、云南、福建和四川[2]等地作为乡村振兴产业被推广种植[3]。研究表明百香果皮中富含天然多酚,种类繁多,这些多酚被证实能够有效抑制人体内的氧化应激现象[4],是开发性价比高的抗氧化功能性食品的优质绿色资源。

多酚是一类母核为C6~C3 结构的天然化合物,根据取代基位置、类型和数量的不同又分为酚酸类、黄酮类、黄酮醇类、二氢黄酮类、黄烷醇类和花青素类等[5]。不同类型多酚的生物活性及其利用效率具有一定差别。因此,根据不同类型多酚在各极性溶剂中的聚合程度差异[6],对其进行分级利用,有利于多酚的高效精准开发。Fan 等[7]研究发现富硒茶不同萃取部位(乙酸乙酯、正丁醇、水相)酚类化合物种类及其抗氧化和细胞保护活性具有差异,表明富硒茶不同溶剂部位有不同的利用价值。

基于超高效液相色谱串联质谱技术(UPLC-MS)的代谢组学可提供样品代谢物的大量信息,若结合模式识别方法对所得信息进行降维处理,可实现在将数据可视化的同时归纳总结各类数据,呈现多元数据的内在联系的效果。Domínguez 等[8]通过建立PCA模型可视化了碱、酸和酶辅助3 种提取方法下百香果皮酚类化合物差异,为后续研究者获取百香果皮目标酚类化合物而选择高效的提取方法提供了参考。

目前我国鲜见百香果皮不同溶剂部位中多酚种类差别的研究,在此本研究以百香果皮粗提物和不同极性溶剂分级萃取物为研究对象,采用UPLC-MS 分析其化合物组成,并通过代谢组学技术表征百香果皮各分级萃取物代谢物差异,筛选差异代谢物并定量,选用多种抗氧化实验评价各分级萃取物的体外抗氧化能力,寻找发挥抗氧化活性的关键多酚,以期为百香果皮相关抗氧化产品的精准开发提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

紫皮百香果(Passiflora edulisSims)2021 年7 月6 日采自四川省凉山彝族自治州德昌县;石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、无水甲醇、无水乙醇 分析纯,天津致远化学试剂有限公司;DPPH、ABTS、6-羟基-2,5,7,8-四甲基色烷-2-羧酸(6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid,Trolox)上海麦克林公司;过硫酸钾、硫酸亚铁、氯化铁、醋酸钠、盐酸 北京化工厂;2,4,6-三吡啶基三嗪(2,4,6-Tri(2-pyridyl)-s-triazine,TPTZ)上海源叶科技有限公司;原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异槲皮苷、异荭草苷 纯度≥98%,成都艾博克生物科技有限公司;乙腈、甲酸 色谱纯,美国Sigma 公司。

KS-5200DA 液晶超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司;BHS-2 精密数显恒温水浴锅 上海垒固仪器有限公司;R-215 旋转蒸发仪 瑞士步琦公司;EnSpire 酶标仪 美国PerkinElmer 公司;Acquity UPLC I-Class 超高效液相色谱仪、PLUS Xevo G2XS QTOF MS 质谱仪 美国Waters 公司。

1.2 实验方法

1.2.1 百香果皮各分级萃取物总酚、总黄酮含量测定

1.2.1.1 样品制备 百香果皮阴干粉碎,按照液料比20:1(mL/g),用70%乙醇,超声提取30 min,抽滤回收上清液,剩余残渣重复以上步骤2 次,合并上清液,旋蒸、吹干得百香果皮粗提物(CE)。超纯水溶解粗提物浸膏,经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇等比依次萃取,得各极性部位萃取液和剩余水部分,旋蒸、吹干得百香果皮石油醚部位(PE)、乙酸乙酯部位(EE)、正丁醇部位(BE)和水部位(WE)浸膏。浸膏得率计算公式为:

1.2.1.2 总酚含量测定 参考许梦圆[9]方法,以没食子酸为标准品绘制标准曲线,得到线性回归方程:y=0.0264x+0.1741(R2=0.9990),以每克干物质中没食子酸当量(mg/g)计算总酚含量。

1.2.1.3 总黄酮含量测定 参考许梦圆[9]方法,以芦丁为标准品绘制标准曲线,得到线性回归方程:y=0.0414x+0.1094(R2=0.9990),以每克干物质中芦丁当量(mg/g)计算总黄酮含量。

1.2.2 百香果皮分级萃取物中酚类化合物UPLCMS/MS 分析

1.2.2.1 样品前处理 称取百香果皮CE、PE、EE、BE和WE 浸膏各10 mg,用甲醇溶解至1 mL,3000 r/min高速离心10 min,过0.22 μm 滤膜。

1.2.2.2 标准溶液制备 准确称取一定质量原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异槲皮苷和异荭草苷,用甲醇定容。等浓度梯度稀释酚类化合物标准品溶液,以标准品浓度为横坐标,峰面积(mAU)为纵坐标,绘制各标准品标准曲线。样品特征酚类化合物含量用每克百香果皮干重中所含标准品当量表示。

六是提升了人民调解组织的矛盾吸附化解能力。“一站式”司法确认机制,为人民调解工作提供了坚强后盾,极大地提升了人民调解组织的社会公信力。该机制建立后,很多当事人慕名前来申请调解,并自觉为该机制进行义务宣传。房山区信访部门转办的信访纠纷,绝大多数在法官的指导下得到及时化解和司法确认。这些措施,有效提升了房山区矛盾纠纷多元调解中心的社会影响力。仅一年多的时间,该中心就成功调处纠纷3000余起,矛盾吸附能力和化解能力显著提升。

1.2.2.3 色谱条件 使用配备光电二极管阵列(PDA)探测器的Acquity UPLC 系统进行定性分析。色谱柱:ACQUITY UPLC BEH C18Column(130 Å,1.7 µm,2.1×100 mm);流动相:A 相为0.1%甲酸水,B 相为乙腈;系统流速:0.4 mL/min;柱温:35 ℃;样品进样量为2 μL;紫外检测器设置为:210、280、350、520 nm;洗脱程序:0~0.5 min,1% B;0.5~25 min,1%~40% B;25~27 min,40%~100% B;27~29 min,100% B;29~31 min,1% B。

1.2.2.4 质谱条件 MS 参数设置如下:在负模式下工作的电喷雾电离(ESI)源,离子源温度300 ℃,扫描范围m/z:100~1200 Da,毛细管电压为3.0 kV,锥孔电压30 V,数据采集和处理采用Massynlyx 4.2。

1.2.3 百香果皮体外抗氧化能力分析

1.2.3.1 DPPH 自由基清除能力测试 参照Polatoglu等[10]的方法。用甲醇配制0.1 mmol/L 的DPPH 工作液及不同浓度梯度的样品和BHT 溶液。分别吸取100 μL 不同浓度的样品和100 μL 的DPPH 工作液加入96 孔板中,混匀,室温25 ℃避光反应30 min,在517 nm 处测定吸光度值。以BHT 为阳性对照代替样品按照以上步骤测定吸光度。DPPH 自由基清除能力计算公式为:

式中:A0为空白对照(甲醇+DPPH 工作液)的吸光度;A1为样品的吸光度;A2为样品空白(甲醇+样品溶液)的吸光度。

1.2.3.2 ABTS+自由基清除能力测试 参考Ye 等[11]方法,用甲醇配制7 mmol/L 的ABTS 溶液和用超纯水配制2.6 mmol/L 的过硫酸钾溶液等体积混合,室温下避光反应 12~16 h 备用。使用前用甲醇稀释ABTS 储备液使其在波长734 nm 处的吸光度为0.700±0.020。用甲醇配制0.1~0.7 mmol/L 浓度梯度的Trolox 标准溶液,吸取20 μL 各浓度Trolox 标准溶液和180 μL ABTS 工作液,充分混匀后在734 nm处测定吸光度,以Trolox 溶液浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。将样品代替Trolox 标准溶液进行以上操作,所得吸光度值代入标准曲线,样品ABTS 阳离子自由基清除能力以达到同样消除率所需Trolox 质量(mmol TE/g)表示。

1.2.3.3 FRAP 法抗氧化测试 参考Chen 等[12]方法,分别配制0.3 mol/L 的醋酸钠溶液、20 mmol/L 的FeCl3·6H2O 溶液、10 mmol/L 的TPTZ 由40 mmol/L盐酸配制而成,上述溶液按照10:1:1 体积比例混合,得到FRAP 工作液避光备用。用甲醇配制0.05~0.80 mmol/L 浓度梯度的FeSO4溶液,吸取20 μL 各浓度FeSO4溶液和180 μL FRAP 工作液,充分混匀后在593 nm 处测定吸光度,以FeSO4溶液浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。将样品代替FeSO4溶液进行以上操作,所得吸光度值代入标准曲线,样品铁离子还原能力以Fe2+当量表示(mmol Fe2+/g)。

1.3 数据处理

将1.2 所得质谱原始数据,导入代谢组学处理软件Progenesis QI,进行基线过滤、峰识别、积分、保留时间校正、峰对齐和归一化处理后,输出得到保留时间、质荷比(m/z)和峰强度的数据矩阵(格式为.csv)。将数据矩阵导入SIMCA 软件,进行PCA和OPLS-DA。采用Masslynx 4.2 进行峰提取和化合物鉴定。使用SPSS 19.0 进行单因素差异显著性分析和抗氧化实验数据处理,采用Pearson 法进行相关性分析。实验重复3 次,结果用平均值±标准差(D)表示,以Origin 绘图。

2 结果与分析

2.1 百香果皮分级萃取物酚类化合物成分分析

2.1.1 浸膏得率 百香果皮乙醇粗提物经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取后,得率降低,由大到小依次为 CE(18.06%)>WE(8.30%)>BE(3.70%)>EE(1.18%)>PE(0.58%),表明分级萃取对百香果皮中的化合物实现了分离。

2.1.2 总酚、总黄酮含量 结果如图1,CE 中总酚含量32.61 mg/g,高于哥伦比亚紫皮百香果皮(24.96 mg/g)[13];总黄酮含量24.07 mg/g,约为广西杂交紫皮百香果(P.edulisדTai-Nong No.1”)果皮(12 mg/g)的2 倍[14],说明四川产紫皮百香果皮富含多酚。不同溶剂萃取物总酚、总黄酮含量呈现显著性差异(P<0.05),表明各溶剂对CE 中的多酚化合物实现了分离。结合得率分析可知,CE 得率最高,但测得总酚含量不高。EE 和BE 化合物得率较低,但等量浸膏中EE 总酚(62.42 mg/g)和总黄酮(43.90 mg/g)含量约为CE(32.61、24.07 mg/g)的2 倍,BE 总酚(47.63 mg/g)和总黄酮(28.84 mg/g)含量也显著高于CE(P<0.05),说明乙酸乙酯[15]和正丁醇[16]能高效富集CE 中羟基苯甲酸类(原儿茶酸)和黄酮醇类(芦丁)2 种类型的多酚。WE 浸膏得率仅次于CE,但总酚(11.83 mg/g)和总黄酮(10.12 mg/g)含量保留不到CE 的1/2,推测WE 富集了较多紫外响应差的大极性水溶性化合物。石油醚极性较小,PE 总酚(1.88 mg/g)和总黄酮(1.51 mg/g)含量最低,均约为CE 的6%,萃取的多酚种类与含量均较少。

图1 百香果皮各分级萃取物总酚和总黄酮含量Fig.1 Total phenols and total flavonoids of different fractional extracts from P.edulis peel

2.1.3 酚类化合物鉴定 得到百香果皮粗提物和各分级萃取物总离子流图(图2),从中共鉴定出33 个酚类化合物(表1),各分级萃取物多酚数量存在差别,CE、BE 和EE 多酚化合物数量明显较多,这是由于不同种类化合物在不同极性溶剂的溶解度有差异[7]。

表1 百香果皮各分级萃取物多酚化合物鉴定Table 1 Identification of phenolic compounds in different fractional extracts from P.edulis peel

图2 百香果皮各分级萃取物的总离子流图Fig.2 Total ion chromatograms of different fractional extracts from P.edulis peel

百香果皮粗提物和各分级萃取物中多酚种类也不同(图3),EE 和BE 中羟基苯甲酸类和黄酮醇类化合物占比较大,与上文总含量分析结果一致,说明中等极性溶剂乙酸乙酯和较大极性溶剂正丁醇会更多富集粗提物中以原儿茶酸为代表的羟基苯甲酸类化合物和以芦丁为代表的黄酮醇类化合物。PE 和WE 中酚类化合物种类较少,均只鉴定出2 个羟基苯甲酸类和2 个黄酮醇类化合物,可能原因是小极性溶剂石油醚更容易富集叶绿素等脂溶性成分,而经各极性溶剂萃取富集后,WE 只余留了少量多酚。

图3 百香果皮各分级萃取物酚类化合物种类占比Fig.3 Proportion of phenolic compounds in different fractional extracts from P.edulis peel

2.2 百香果皮各分级萃取物化合物组成差异分析

构建无监督PCA 模型对百香果皮粗提物和各分级萃取物中的化合物进行差异分析。本次分析共提取出2 个包含化合物种类、数量和含量等信息的主成分,其方差解释率分别是59.98%,37.82%,累计方差解释率为97.80%,说明该模型精准性和预测能力可靠。百香果皮各部位多酚代谢物3 次生物学重复数据能够较好地集中在一起,提示实验样品稳定,数据重复性好。

图4 显示,百香果皮各分级萃取物数据分布于不同象限。在x 轴方向上,PE、EE 和BE、WE 分立于x 的负半轴和正半轴。y 轴方向上,PE 和WE 分布于负半轴,与分布于正半轴的EE 和BE 明显区分,表明PE、EE、BE 和WE 中化合物种类、数量及含量存在差异。CE 和BE 数据点没有明显分离,说明CE和BE 化合物种类数量或含量较为相似,这可能是因为乙醇和正丁醇仅相差2 个碳原子,结构相似,导致了二者对百香果皮中多酚化合物的相似溶解能力。

图4 百香果皮各分级萃取物PCA(a)和OPLS-DA(b)图Fig.4 PCA (a) and OPLS-DA (b) of different fractional extracts from P.edulis peel

OPLS-DA 模型表现出与PCA 类似的结果,PE、EE、BE 和WE 分别分布于第三、二、一和四象限,支持了不同极性萃取溶剂能够有效区分百香果皮中多酚化合物的结论。此外,差异代谢物是区分不同溶剂萃取的关键信息,变量重要性投影(Variable Importance in Projection,VIP)可表示不同化合物对于区分不同组分贡献大小,VIP≥1 为常见的差异代谢物筛选标准。本研究共指认了4 个VIP≥1 的酚类代谢物(表2)作为解释百香果皮各分级萃取物差异性的代表化合物。

表2 百香果皮的显著差异代谢物Table 2 Significantly differential metabolites of fractional extracts from P.edulis peel

2.3 百香果皮差异酚类化合物含量分析

采用外标一点法测定4 个差异代谢物含量(表3)。不同溶剂萃取物中各差异物含量区分明显(P<0.05),CE、EE 和BE 中差异代谢物的含量普遍高于PE 和WE。对羟基苯甲酸和原儿茶酸都是羟基苯甲酸类化合物,但原儿茶酸C6 位置比对羟基苯甲酸多一个OH,故分子极性增加,更易溶于极性较大的乙醇。因此,原儿茶酸在CE 的含量(152.40 μg/g)最高,EE(97.62 μg/g)和BE(27.97 μg/g)次之。对羟基苯甲酸则在极性适中的EE 中含量(653.44 μg/g)最高,其次为CE(556.65 μg/g)和BE(344.53 μg/g)。EE 中异槲皮苷(2420.64 μg/g)和异荭草苷(113.23 μg/g)含量最高,其异槲皮苷含量约为CE 的3 倍,高于香蕉百香果(Passiflora tripartitavar.Mollissima(Kunth)L.H.Bailey)果肉的9.80 μg/g[17]。异荭草苷是西番莲属的特征酚类化合物[18],Da 等[19]研究发现黄果西番莲果皮中异荭草苷含量为270~870 μg/g,紫皮百香果皮EE 中异荭草苷约为CE 的5 倍。这可能是由于异槲皮苷和异荭草苷均为黄酮单糖苷类化合物,极性适中,更易溶于中等极性溶剂乙酸乙酯。

表3 百香果皮各分级萃取物差异酚类化合物含量(μg/g)Table 3 Content of differential phenolic compounds in different fractional extracts from P.edulis peel (μg/g)

2.4 百香果皮各分级萃取物体外抗氧化活性分析

2.4.1 DPPH 自由基清除测试结果 百香果皮各分级萃取物DPPH 自由基清除能力与质量浓度呈现一定量效关系(图5)。各组分间DPPH 自由基清除能力存在差异,阳性对照BHT、CE、EE 和BE 浓度—清除率曲线整体趋势相似,WE、PE 与其他组分区分明显。CE、EE、BE 和BHT 的SC50值差异不显著(P>0.05),单因素方差结果(表4)与图5 结果一致,提示CE、EE 和BE 具有和阳性对照相似的DPPH自由基清除效果。EE 的DPPH 自由基清除能力最强(SC50=0.02 mg/mL),约是CE 的4 倍。BE 的SC50(0.06 mg/mL)约为CE 的1.5 倍,高于阳性对照BHT(SC50=0.04 mg/mL),说明乙酸乙酯和正丁醇有效富集了百香果皮粗提物中的抗氧化活性化合物。WE(SC50=0.26 mg/mL)和PE(SC50=0.30 mg/mL)自由基清除能力显著低于CE(P<0.05)。

表4 百香果皮各分级萃取物含量及体外抗氧化活性Table 4 Content and activity of different fractional extracts from P.edulis peel

图5 百香果皮提取物各分级萃取物和BHT 对DPPH 自由基清除能力Fig.5 Scavenging effect of different fractional extracts from P.edulis peel and BHT on DPPH free radicals

2.4.2 ABTS+自由基清除实验结果 Trolox 是水溶性维生素E 衍生物,与酚类化合物结构相似,均有C6~C3 以及羰基结构,被证实是最适合作为ABTS+自由基清除能力判断的标准化合物。因此,酚类化合物抗氧化能力常以 Trolox 为当量表示[20]。以 Trolox标准溶液浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标绘制标准曲线,得到回归方程y=-1.996x+0.7180(R2=0.9993)。

由图6 可知,百香果皮粗提物和各分级萃取物均具有ABTS+自由基清除能力,但存在显著性差异(P<0.05),由强到弱分别为:EE>BE>CE>WE>PE,与DPPH 自由基清除结果一致。CE 的ABTS+自由基清除能力为0.249 mmol TE/g,与甜果西番莲(P.ligularisJuss)种籽有相似的ABTS+自由基清除能力(0.31~0.75 mmol TE/g)[21]。CE 经分级萃取后,ABTS+自由基清除能力明显升高,EE ABTS+自由基清除能力(0.911 mmol TE/g)最强,约为CE(0.249 mmol TE/g)的4 倍,其次为BE(0.379 mmol TE/g),约为CE 的1.5 倍。证明乙酸乙酯和正丁醇有效富集了抗氧化活性化合物。WE 和PE 的ABTS+自由基清除能力较差,分别仅达到EE 的11%和7%。

图6 百香果皮提取物各分级萃取物对ABTS+自由基清除能力Fig.6 Scavenging effect of different fractional extract from P.edulis peel on ABTS+ free radicals

2.4.3 FRAP 实验结果 结果如图7,百香果皮各分级萃取物均具有Fe2+还原能力,但Fe2+还原能力差异明显,由高到低依次为:EE>BE>CE>WE>PE,与DPPH自由基和ABTS+自由基清除能力实验结果一致。 EE 的Fe2+还原能力约是CE(0.212 mmol Fe2+/g)的2.5 倍,为0.505 mmol Fe2+/g。BE 的Fe2+还原能力(0.301 mmol Fe2+/g)也明显高于CE,约是CE 的1.5 倍。而WE(0.143 mmol Fe2+/g)、PE(0.1 mmol Fe2+/g)的Fe2+还原能力显著(P<0.05)低于CE,PE 仅约为百香果皮CE 的1/2,但高于紫皮百香果叶醇提物Fe2+还原能力(0.078 mmol Fe2+/g)[22]。FRAP 基于SET 机制,该机制下物质抗氧化能力取决于其电离势,酚类化合物给出电子将氧自由基转化为阴离子从而达到还原效果,不同极性萃取物的多酚化合物物质组成及含量使其电离势有所区别,并使其抗氧化能力存在差异[23]。

图7 百香果皮提取物各分级萃取物铁离子还原能力Fig.7 Iron reduction ability of different fractional extracts from P.edulis peel

上述体外抗氧化能力测试结果表明CE 具有良好抗氧化能力,但经过不同极性溶剂分级萃取后,各部位抗氧化能力明显不同,EE 和BE 体外抗氧化活性增强,PE 和WE 活性减弱,说明乙酸乙酯和正丁醇高效富集了CE 中抗氧化活性物质。文献报道对羟基苯甲酸[24]、异槲皮苷[25]和异荭草苷[26]的抗氧化能力优秀,而EE 中这3 个化合物含量高。此外EE中还鉴定出原花青素B2(28)等多个特有酚类化合物,原花青素B2 被报道有效消除羟自由基、超氧阴离子自由基和强有力的金属螯合能力,是目前国际上公认的天然抗氧化剂[27],由此推测这些化合物是EE高抗氧化力的原因。BE 鉴定出儿茶素衍生物[28]和咖啡酸衍生物[29]等具有高抗氧化性的酚类化合物,其中毛蕊异黄酮是中草药黄芪的主要抗氧化活性成分[30],由此BE 在体外抗氧化测试中表现仅次于EE的良好活性。酚类化合物种类与含量较少应该是造成PE 和WE 抗氧化活性较低的原因。

2.5 相关性分析

如图8 所示,百香果皮总酚含量与ABTS+自由基清除能力、Fe2+还原能力呈显著相关(P<0.05),与DPPH 自由基清除能力呈极显著相关(P<0.01),总黄酮含量与Fe2+还原能力呈极显著相关(P<0.01),与DPPH、ABTS+自由基清除能力呈显著相关(P<0.05),提示百香果皮总酚对其发挥抗氧化能力贡献突出,与Ghasemzadeh 等[31]发现总酚含量与抗氧化活性显著相关的结果一致。

图8 百香果皮各分级萃取物酚类物质含量与抗氧化活性相关性分析Fig.8 Correlation analysis between phenolic components and antioxidant capacity of different fractional extracts from P.edulis peel

相关性分析结果表明异槲皮苷和异荭草苷为百香果皮抗氧化活性化学标志物。异槲皮苷含量与ABTS+自由基清除能力和Fe2+还原能力显著相关(P<0.05),说明异槲皮苷对百香果皮发挥抗氧化能力贡献显著。Xue 等[32]发现酚类化合物糖基化对其抗氧化活性具有重要作用,异槲皮苷为C3-糖苷黄酮类化合物,而C3-糖基化有利于稳定糖苷的构象,增强自由基清除能力,这可能是异槲皮苷与百香果皮抗氧化活性显著相关的原因。异荭草苷含量与ABTS+自由基清除能力和铁离子还原能力相关系数均高达0.99,与DPPH 自由基清除能力相关性也较高,提示异荭草苷也对百香果皮抗氧化活性有贡献。多羟基赋予黄酮高的抗氧化、螯合和促氧化活性[33],而且黄酮B 环的邻二羟基结构会进一步提高其抗氧化能力[34],这可能是异荭草苷对百香果皮发挥抗氧化活性起突出贡献作用的原因。

3 结论

百香果皮粗提物多酚丰富,经不同极性溶剂萃取后所得各部位的化合物和体外抗氧化活性均有差异,表明分级萃取能有效富集百香果皮各类型多酚,因此开发百香果皮抗氧化功能性产品时可进行分级提取,提高其利用效率。粗提物CE 抗氧化活性弱于乙酸乙酯萃取物EE 和正丁醇萃取物BE,提示粗提物中存在不发挥抗氧化活性的化合物,且也存在分子间相互拮抗作用减弱其总抗氧化活性。乙酸乙酯可有效富集以C6~C1 构型为主的酚酸类化合物和黄酮醇类化合物,表现出强于百香果皮粗提物的抗氧化能力,展现了开发为百香果皮高品质抗氧化相关产品的潜力。BE 差异酚类物质含量和抗氧化活性仅次于EE,其酚类物质种类与含量丰富,且次级代谢物富集得率高,也是百香果皮抗氧化活性酚类物质产品开发的高价值部位。总酚和总黄酮是百香果皮发挥抗氧化能力的重要物质基础,其中的异槲皮苷和异荭草苷是抗氧化活性化学标志物。本研究为百香果皮抗氧化产品开发质量标准建立提供了基础数据,为促进百香果产业副产物的精准高效开发,科学拓展百香果产业链提供了支持。

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