中心性肥胖2型糖尿病189例血清微RNA-221表达与微血管并发症的关系

李文静

作者单位：聊城市第二人民医院、山东第一医科大学附属聊城二院内分泌科，山东 聊城252600

据统计［1］，我国的糖尿病发病率高达10.9%，其中以2 型糖尿病（T2DM）较为常见。微血管病变是糖尿病病人严重的并发症，可导致失明、肾衰竭等恶性事件的发生，严重影响病人的身心健康及生命安全［2］。有研究显示［3］，肥胖所导致的胰岛素抵抗是2 型糖尿病发病率增加的危险因素之一，而我国T2DM 病人多数伴有中心性肥胖。中心性肥胖T2DM 病人由于腹部脂肪的异常堆积，进一步加重了机体糖脂代谢紊乱和胰岛素抵抗，此类病人存在较高的微血管并发症发生风险。因此，积极探讨中心性肥胖T2DM 病人发生微血管并发症的影响因素及能够早期有效诊断的血清生物学指标对临床及时干预具有重要指导意义。微RNA（miRNA）作为一种微小内源性的非编码RNA 分子，在转录后具有调控靶基因表达的功能，且与糖尿病关系密切，其广泛参与糖代谢及血糖调节相关细胞生理、病理过程［4-5］。有研究［6］显示，miR-221在T2DM 病人血清中呈高表达，且与病情发展相关联，但miR-221水平在中心性肥胖T2DM 病人微血管并发症发生的关系有待深入探讨。鉴于此，本研究检测血清miR-221 水平在中心性肥胖T2DM 病人中的表达水平，并分析血清miR-221 水平与中心性肥胖T2DM 病人出现微血管并发症的关系，以期为临床评估及治疗提供依据，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2019 年6 月至2021 年9 月聊城市第二人民医院收治的中心性肥胖T2DM 病人189 例为研究对象，将其作为观察组，另选取181 例健康体检者作为对照组。本研究经聊城市第二人民医院伦理委员会批准（准号201905-004）。

1.1.1 诊断标准 ①T2DM诊断标准［7］：有典型的糖尿病症状，随机血糖≥11.1 mmol∕L 或空腹血糖≥7.0 mmol∕L 或葡萄糖负荷2 h 血糖≥11.1 mmol∕L；②中心性肥胖诊断标准［8］：男性腰围≥90 cm；女性腰围≥85 cm；③高血压诊断标准［9］：未使用降压药下收缩压≥140 mmHg 或（和）舒张压≥90 mmHg；④高脂血症诊断标准［10］：总胆固醇＞5.72 mmol∕L 或（和）三酰甘油＞1.7 mmol∕L；⑤糖尿病微血管并发症诊断标准［7］：随机尿白蛋白∕肌酐≥30 mg∕g 或（和）肾小球滤过率≥90 mL·min-1·（1.73 m2）-1即可诊断为糖尿病肾病（DN）；存在麻木、疼痛、感觉异常等糖尿病外周神经病变（DPN）症状且（针刺痛觉、压力觉、温度觉、震动觉、踝反射）5 项检测存在1 项异常者，或无以上症状但5项检测存在2项异常即可诊断为DPN；糖尿病视网膜病变（DR）诊断标准：眼底检查发现眼底血管出现微动脉瘤、出血斑、渗出斑、新生血管。

1.1.2 纳入标准 ①观察组均符合上述T2DM 和中心性肥胖的诊断标准；②对照组均经体检确认身体健康且腰围均处于正常范围；③病人或其近亲属知情同意。

1.1.3 排除标准 ①1 型糖尿病或其他特殊类型糖尿病病人；②合并严重心、肝、肾等功能障碍者；③合并肿瘤者；④合并其他自身免疫性疾病、凝血功能障碍者；⑤合并精神疾病或认知功能障碍者；⑥近一个月做过大型外科手术者；⑦因各种原因不能全程参与本研究者。

1.2 方法

1.2.1 血清指标检测 采集两组病人清晨空腹静脉血5 mL，抗凝处理后以2 500 r∕min 的速度、半径10 cm 离心10 min，选择miRNeasy Mini Kits 提取总RNA，检测RNA 浓度和纯度，将RNA 反转录合成cRNA，进行聚合酶链反应，反应条件：预反应（95 ℃，10 min）-解链（95 ℃，8 s）-退火（55 ℃，1 min）-延伸（75 ℃，1 min），共40 个循环，引物序列：miR-221 正向为5"-CAGTCATACATGATTCCTTGTGA-3"；反 向 为5"-CTTTGGTGTTTGAGATGTTTGG-3"；内参U6 正向为5"-CTCGCTTCGGCAGCACA-3"，反 向 为5"-AACGCTTCACGAATTTGCGT3"。 采 用2-ΔΔCt计算miR-221 表 达水平。另采 用 美国UARIANT 糖化血红蛋白分析仪检测糖化血红蛋白（HbA1c）水平，采用ADVIA2000 西门子全自动生化分析仪检测空腹血糖水平、血尿酸（UA）水平，采用韩国免疫荧光分析仪检测超敏C-反应蛋白（hs-CRP）水平。

1.2.2 体格检查 两组受试者均由同一检查人员测量身体质量指数和腹围，受试者均空腹、免冠、脱去厚重衣服、鞋子，采用HW-700 测量身高、体质量，采用无弹性皮尺在受试者呼气末、吸气末开始时测量腹围（第12肋最低点与髂前上缘中点的围长）。

1.2.3 资料收集 收集病人性别、年龄、腹围、身体质量指数、糖尿病病程、合并高血压、高血脂病、服药情况及入院次日清晨检测的空腹血糖水平、HbA1c、hs-CRP、UA 及miR-221 水平等资料，将可能影响中心性肥胖T2DM 病人发生微血管并发症的因素作为自变量，另将中心性肥胖T2DM 病人微血管并发情况记为因变量，均进行赋值，见表1，分析自变量与因变量间的关系。

表1 中心性肥胖T2DM病人189例变量赋值结果

1.3 统计学方法采用SPSS 26.0 软件对数据进行分析处理，计量资料经检验符合正态分布，以±s表示，两组间差异采用独立样本t检验；计数资料以例（%）描述，采用χ2检验；采用多因素logistic 回归分析中心性肥胖T2DM 病人出现微血管并发症的影响因素；采用受试者操作特征（ROC）曲线分析血清指标与中心性肥胖T2DM 病人微血管并发症发生情况的关系；曲线下面积（AUC）对比采用非参数检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组和对照组一般资料比较两组的性别、年龄资料差异无统计学意义（P＞0.05），观察组的腹围、身体质量指数、空腹血糖水平、HbA1c 水平、hs-CRP 水平、UA 水平及血清miR-221 表达水平均高于对照组（P＜0.05），见表2。

表2 中心性肥胖T2DM病人189例与健康对照组181例的一般资料对比

2.2 观察组微血管并发症发生情况及并发和未并发病人的临床资料比较189 例病人中有97 例（51.32%）出现微血管并发症，其中DN 31 例、DR 40例、DPN 26例。并发组与未并发组性别比较差异无统计学意义（P＞0.05），并发组年龄、合并高血压、高脂血症、病程、未按时服药、空腹血糖水平、HbA1c水平、hs-CRP水平、UA 水平及血清miR-130a表达水平均高于未并发组（P＜0.05），见表3。

2.3 中心性肥胖T2DM 病人出现微血管并发症的多因素logistic回归分析经logistic 回归分析可知，年龄、合并高血压、高脂血症、病程长、未按时服药、空腹血糖水平、HbA1c 水平、hs-CRP 水平、UA 水平及血清miR-221 水平高表达均是中心性肥胖T2DM病人出现微血管并发症的危险因素（P＜0.05），见表4。

表4 中心性肥胖T2DM病人出现微血管并发症97例的影响因素分析

2.4 血清指标对中心性肥胖T2DM 病人微血管并发症发生情况的评估价值分析以病人空腹血糖水平、HbA1c水平、hs-CRP水平、UA水平、血清miR-221水平为检测变量，病人微血管并发症发生情况为状态变量（1=发生，0=未发生）制作ROC 曲线，结果显示血清miR-221 水平评估中心性肥胖T2DM 病人微血管并发症发生的AUC 低于HbA1c水平（Z=1.86，P=0.063），高于hs-CRP 水平和UA 水平（Z=2.62，P=0.009；Z=2.27，P=0.023），与空腹血糖水平比较差异无统计学意义（Z=0.16，P=0.876），见表5，图1。

图1 血清指标诊断中心性肥胖T2DM病人出现微血管并发症97例的ROC曲线

表5 血清指标对中心性肥胖T2DM病人出现微血管并发症97例的评估价值

3 讨论

近年来随着生活节奏的加快，人们的生活方式及饮食行为随之改变，中心性肥胖伴糖尿病病人也日益增多，中心性肥胖T2DM 病人以腹围增大为特点，多伴有身体质量指数升高，病人长期处于高血脂、高血糖的环境中，易加重胰岛素抵抗和微血管炎症，从而导致DN、DR 等微血管并发症的发生，严重影响病人的生命安全［11］。本研究还发现，中心性肥胖T2DM 病人腹围、身体质量指数、空腹血糖、HbA1c、hs-CRP、UA水平均明显高于正常人群，且微血管并发症发生率高达51.32%，稍高于刘杰等［12］研究报道的47.25%，可能与样本数量略有差异有关，但均可证实此类病人微血管并发症发生风险较高。因此，积极探索能够影响中心性肥胖T2DM 病人出现微血管并发症的因素及有效评估指标对其早期临床治疗、改善病情具有重要意义。

本研究发现，观察组血清miR-221 表达水平高于对照组，说明血清miR-221 表达水平在中心性肥胖T2DM 病人中升高。miR-221 在血管内皮细胞中含量丰富，且在细胞功能调节、迁移、再生等生理过程中发挥重要作用，过表达miR-221 可通过调控下游靶基因中存在的相关胰岛素分泌蛋白，抑制胰岛细胞增殖，从而参与中心性肥胖T2DM 的发生发展［13］。李俊等［14］研究发现糖尿病小鼠血清miR-221表达水平较于正常小鼠显著上调，在高糖环境刺激下miR-221的表达明显上调，本研究结果与之相符。此外，本研究结果显示微血管并发症并发组血清miR-221 表达水平高于未并发组，且多因素Logistic回归性分析显示血清miR-221水平高表达是中心性肥胖T2DM 病人出现微血管并发症的危险因素。有研究［15］报道，miR-221 在糖尿病小鼠血管平滑肌细胞中呈高表达，导致糖尿病小鼠的血管内膜增厚。于海生等［16］研究发现miR-221 在DR 病人中的表达水平也明显上调，促使机体发生血管内皮炎症，与糖尿病视网膜血管病变的发生密切相关。miR-221可调控胰岛素PKC 信号通路，抑制胰岛细胞的增殖及胰岛素相关信号转导，增强周围组织的胰岛素抵抗，促进T2DM 发展进程，还具有调节血管疾病炎症反应和细胞凋亡等功能，可通过抑制脂多糖刺激内皮细胞中炎性细胞因子的产生，加剧血管内皮炎性反应和损伤［17］，另外还能通过SIRT1∕Nrf2 信号轴诱导高血糖刺激下的视网膜微血管内皮细胞凋亡，导致DR［18］。

此外，本研究结果显示，年龄、合并高血压、高脂血症、病程长、未按时服药、空腹血糖水平、HbA1c水平、hs-CRP 水平、UA 水平均是中心性肥胖T2DM病人出现微血管并发症的危险因素，与既往报道相符［19-22］。空腹血糖水平及HbA1c水平是反应血糖控制状况的重要指标，水平升高提示血糖紊乱及高胰岛素抵抗，机体在高糖状态易损伤各种小血管和末梢神经，进而增加微血管并发症的风险；病人年龄越大，机体免疫力较低，容易发生机体感染，另外胰岛功能相对下降，容易出现血糖控制不佳现象，另外病程越长，病人血糖调节能力越差，且病人长期用药可能出现倦怠松懈心理，不按时用药，导致血糖波动较大，控制不佳，增加微血管并发症的发生风险。中老年病人易合并高血压、高脂血症，会共同促进心脑血管疾病的进展，导致心脑血管疾病的发生；hs-CRP 是一种炎症标志物，其水平越高，病人机体炎性反应越严重，从而导致血管内皮损伤加重；UA 是人体内分布最广的一种含水抗氧化剂，其水平过高可导致高尿酸血症，促进糖尿病血管病变的发生。所以应针对中心性肥胖T2DM 病人加强临床治疗，针对上述危险因素积极进行干预，以达到改善病人血糖水平，降低其微血管并发症发生风险，提高其生存质量的目的。

本研究进一步采用ROC 分析空腹血糖水平、HbA1c水平、hs-CRP水平、UA 水平、血清miR-221水平对中心性肥胖T2DM 病人微血管并发症发生情况的评估价值，结果显示五项血清指标均具有一定的评估价值，其中血清miR-221水平评估的临界值、灵敏度、特异度和AUC分别为0.83、88.86%、79.35%和0.81，评估价值虽略低于HbA1c 水平，但显著高于hs-CRP 水平和UA 水平，与空腹血糖水平评估价值相当，表明了血清miR-221 水平有助于临床评估中心性肥胖T2DM病人微血管并发症的发生。

综上所述，血清miR-221 在中心性肥胖T2DM病人中呈高表达，是此类病人发生微血管并发症的危险因素，且当中心性肥胖T2DM病人血清miR-221水平大于0.83 时对微血管并发症具有一定的诊断意义。