探讨新生儿溶血病血清学检测在HDFN诊断中的应用价值

梁婷婷 李丽红

因母婴血型不合而引发的新生儿或胎儿溶血性疾病（hemolytic disease of the fetus and newborn，HDFN），临床将其称为溶血症。父母双方的血型决定了胎儿的血型，当父方带给胎儿的是母方没有的血型抗原后，此抗原进入母体导致母体生成相应的免疫抗体；免疫抗体顺着胎盘绒毛膜凭借Ig-G 抗体形式到达胎儿血液循环引发抗原抗体免疫反应，进而诱发肝脾肿大、水肿、贫血等临床症状，并会在出生后发生进行性黄疸加重[1]。ABO 血型不合是引发该疾病发生的主要因素，而Rh 血型D 抗体引发该疾病病情较重，会引发髓外造血、胆红素脑病等病症，对新生儿的生命安全以及成长发育造成不利影响[2]。流式细胞仪法、血清学检查以及常规检查均为HDFN 实验室检查常用方式[3]。现对2019 年1月—2022 年12 月龙岩市第二医院收治的100 例疑似HDFN 患儿的血样进行血清学测定，以临床综合诊断为“金标准”，分析血清学检测在HDFN 诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019 年1 月—2022 年12 月龙岩市第二医院新生儿科接受治疗的高胆红素血症患儿100 例，男56 例，女44 例；年龄1 ～15 d，平均（4.03±0.23）d。分娩孕周36 ～40 周，平均（38.03±0.45）周。本研究基本流程已上交至医院医学伦理委员会（批号180729），在其批准下开展。参与研究的100 例患儿家属均对本研究知情同意。

HDFN 临床诊断标准[4]：（1）红细胞抗体释放试验或直接抗人球蛋白试验阳性。（2）血红蛋白及红细胞量减少（脐带血＜13 g/dL）。（3）无其他可能诱发新生儿溶血的情况。

HDFN 实验室诊断标准[5]：抗体放散试验、游离抗体试验、直接抗人球蛋白试验（direct antiglobulin test，DAT）试验中，3 项结果均为阳，可确诊为HDFN ；游离抗体试验为阴，另2 项为阳性，也可确诊为HDFN ；只有抗体放散试验为阳，也可确诊为HDFN。游离抗体试验、DAT 试验单项或2 项结果为阳性，为疑似HDFN。

纳入标准：（1）100 例患儿的皮胆素均在15 mg/dL以上，出现高胆红素血症相关临床表现，疑似为母婴血型不合而引发的HDFN。（2）临床资料完整。排除标准：（1）经检测发现患儿体内存在单纯疱疹病毒抗体、巨细胞病毒抗体、风疹病毒抗体或合并地中海贫血等。（2）伴有免疫性疾病者。

1.2 方法

测定试剂：上海血液生物医药有限责任公司生产的Rh（D）血型定型试剂以及抗A、抗B 血型定型试剂、反定型标准红细胞。由戴安娜生物技术有限公司生产的抗人球蛋白检测卡以及新生儿血型卡（直抗卡）。迈瑞医疗器械有限公司生产的BC-7500 检测血细胞比容、血红蛋白。西门子医学诊断有限公司生产的ADVIA 2120 全自动生化分析仪检测相关生化项目。

血样采集：抽取母亲静脉血以及新生儿脐带血各3 ～5 mL，分别置入含EDTA-K2 抗凝剂试管中，混匀送检。

实验室检查：（1）母亲血清抗体效价检测：将样本血清中的Ig-M 抗A、抗B 抗体用2-Me 试剂处理后，对干扰进行消除；对Ig-G 抗体效价进行测定，测定方式为盐水倍比稀释法。（2）游离抗体试验检测：将标准A、B 红细胞悬液各1 滴以及新生儿血清2 滴分别加入试管中，在37 ℃温育箱内反应30 min ；再通过生理盐水进行3 次洗涤，将上清液去除；将抗人球蛋白试剂Ig-G 加入各个试管中，每个试管加2 滴，1 500g离心15 s ；根据是否出现凝集判定结果。（3）新生儿血样抗体释放试验：在试管中加入等体积的生理盐水以及压积红细胞，混匀后置入56 ℃水浴箱内反应10 min，在1 500g的条件下进行3 min 的离心；将上层放散液提取到另一洁净试管中，加入相应抗原红细胞，再放置37 ℃水浴箱内反应30 min ；再通过生理盐水进行3 次洗涤，加入抗人球蛋白试剂，1 500g离心15 s。根据是否出现凝集判定结果。（4）新生儿血样直接抗人球蛋白试验：依据抗人球蛋白检测卡说明书操作，洗涤3 次待检红细胞制成红细胞悬液，与抗人球蛋白试剂一起加入试剂管后1 500g离心15 s。根据是否出现凝集判定结果。（5）母亲不规则抗体筛查检测：依据抗人球蛋白检测卡说明书操作。（6）通过试管法鉴定母亲与新生儿血样标本。

1.3 观察指标

（1）记录100 例患儿中母婴血型不合的发生情况，并分析造成血型不合的系统类型以及各系统引发的母婴血型不合中发生HDFN 的情况[6]。（2）母亲A、B血型发生HDFN 的情况。（3）记录31 例HDFN 患儿的血清学检测结果。（4）31 例HDFN 患儿采血送检结果中，出生天数不同与其结果阳性的关系。（5）产前母体采血送检结果与产后婴儿采血送检结果对比。

1.4 统计学方法

采用SPSS 26.0 统计学软件进行分析。计数资料用n（%）表示，行χ2检验。P＜ 0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同血型系统发生HDFN 的情况对比

100 例患儿中，有58 例患儿出现母婴血型不合，其中ABO 血型系统50 例，Rh 血型系统8 例。ABO 血型系统HDFN 发生率显著高于Rh 血型系统（P＜0.05），见表1。

表1 不同血型系统发生HDFN 的情况对比 [例（%）]

2.2 母亲A、B 血型发生HDFN 的情况对比

50 例ABO 血型系统母婴不合者中，O-A 型HDFN 发生率显著高于O-B 型（P＜0.05），见表2。

表2 母亲A、B 血型发生HDFN 的情况对比[例（%）]

2.3 31 例HDFN 患儿的血清学检测结果

抗体放散试验、游离抗体试验、DAT 试验中，3项结果均为阳者1 例，占比3.23% ；前两项试验结果为阳性，DAT 试验结果为阴性2 例，占比6.45% ；DAT 试验以及抗体放散试验结果为阳性，游离抗体试验结果为阴性3 例，占比9.68% ；单独抗体放散试验为阳性者25 例，占比80.65%。单独抗体放散试验为阳性的HDFN 患儿占比率显著高于其他类型（χ2＝5.362，P＜0.05）。

2.4 31 例HDFN 患儿采血送检结果中，出生天数不同与其结果阳性的关系

31 例HDFN 患儿中，出生天数为4 ～7 d 者其阳性率显著高于其他出生天数的患儿（χ2＝6.152，P＜0.05），及生命安全[9]。因此，对孕妇产前进行筛查，早检测、见表3。

表3 31 例HDFN 患儿采血送检结果中，出生天数不同与其结果阳性的关系（例）

2.5 产前母体采血送检结果与产后婴儿采血送检结果对比

产前检测IgG 抗A 或抗B 效价结果与产后采血对比，产前检测准确率为90.32%（28/31），产前母体采血送检结果与产后婴儿采血送检结果对比见表4。

表4 产前母体采血送检结果与产后婴儿采血送检结果对比

3 讨论

母体与胎儿之间血型不一致是因为胎儿从父体获得了母体不具备的红细胞抗原，这对母体造成刺激，导致母体发生免疫反应，生成抗体IgG。该抗体通过母婴之间的胎盘进入胎儿体内，与胎儿血液中对应抗原结合而破坏胎儿血液中的红细胞，诱发血管外溶血的发生[7]。该疾病是诱发新生儿黄疸以及高胆红素血症的主要因素，而母体中的抗体数量、新生儿自身造血功能以及抗体与胎儿体内红细胞结合量均会对溶血病的患病程度造成影响，引发不同程度的水肿、贫血、黄疸[8]。而高胆红素血症是该疾病引发的最危险并发症，它会对新生儿脑干中各类神经造成损害，会对患儿的运动、智力均造成影响，威胁患儿的生活质量以早诊断、早治疗对该疾病患儿具有重要意义，可为其生命安全做出保障，符合我国的优生优育政策[10]。

本研究表明，100 例患儿中58 例出现母婴血型不合，其中ABO 血型系统50 例，Rh 血型系统8 例。ABO 血型系统HDFN 发生率显著高于Rh 血型系统（P＜0.05）；50 例ABO 血型系统母婴不合者中，O-A 型HDFN 发生率显著高于O-B 型（P＜0.05）。这提示ABO 血型系统引发的HDFN 发生率更高。这是因为ABO 溶血病为同种免疫疾病类型，胎儿体内的红细胞抗原会对母体造成影响并诱发免疫反应，进而导致母体内生成为抵抗胎儿红细胞抗原而出现的IgG 抗体。该抗体在胎盘的借助下进入到胎儿的血液内，损害胎儿血液中的红细胞，引发溶血[11-12]。而母亲为O 型血，胎儿为A型或B 型血是主要的ABO 溶血病类型，这与O 型血母体中具有一定的抗A 或抗B 免疫抗体有关。

本研究还得出，31 例HDFN 患儿的血清学检测结果中，单独抗体放散试验为阳性的HDFN 患儿占比率显著高于其他类型（P＜0.05）。这提示血清学检测在HDFN 检测中具有较高的临床应用价值，可为疾病的早期诊断提供有价值的辅助依据。这与庞建等[13]在《临床血液学杂志》中发表的《血型血清学检测技术对新生儿溶血病的诊断价值》一文中相应观点一致，证实了本研究结果的可靠性。对其分析，抗体放散试验、游离抗体试验、DAT 试验属于ABO 型溶血病检验的主要方式，抗体放散试验属于直接检验，对有无发病进行判定；游离抗体试验是对血清中游离抗体反应进行检验，进而对疾病的进展情况进行判定[14]。DAT 试验是对红细胞中IgG 抗体反应进行检测。单独抗体放散试验基本可以评定患儿是否患病，而另2种检验方式属于补充检验，三者联合应用可提高诊断结果准确性[15]。另外，本研究还对31 例患儿检出时间进行了研究，得出出生天数为4 ～7 d 者其阳性率显著高于其他出生天数的患儿（P＜0.05）。这说明新生儿出生1 周内其被检出的概率最大。而产前检测IgG 抗A 或抗B 效价结果与产后采血对比，产前检测准确率为90.32%，这说明母亲体内IgG 抗A 或抗B 效价越高，新生儿娩出后患有该疾病的风险越大。文章中体现了中国输血协会拟定的《胎儿新生儿溶血病实验室检测专家共识》的临床参考标准[16]。

综上所述，在HDFN 诊断中血清学检测结果具有较高的辅助价值，对于O 型血母体、A 型血婴儿应格外注意，以便于及时检出疾病，为新生儿的生命安全以及健康成长提供保障。