高危型人乳头瘤病毒联合液基薄层细胞学检测技术在基层女性宫颈病变早期筛查中的应用

曹碧红，王春晖，吴显劲

惠州市中心人民医院检验中心，广东 惠州 516001

宫颈癌是全世界女性中第二大常见恶性肿瘤，严重危害了女性的身心健康，不仅给患者及其家庭成员带来极大的痛苦，也给社会经济发展及全球健康造成巨大的损失［1］。据2012 年报道［2］，发展中国家有40 万左右的宫颈癌新增病例，占据了全球发病例数的84%。据WHO 统计，2018 年全球约有56.9 万新增确诊病例，31.1 万死亡病例［2］。我国发布的全国癌症统计数据报告显示，每年新发病例约为13 万例，相当于全球宫颈癌每年总新发病例的28%。研究人员已确认宫颈癌的主要致病因素是高危型人乳头瘤病毒（HPV）持续反复感染［3］，使宫颈癌成为目前人类所知癌症中唯一病因明确的癌症，因此，早期筛查与防治显得尤为重要。目前对宫颈病变早期筛查普遍采取细胞学检测或HPV筛查、阴道镜检查及宫颈组织活检三阶段诊断流程［4］。基层医疗机构，特别是经济落后的地区，人群宫颈病变早期筛查条件有限，全流程诊断难以实现，而且采用单一的筛查方法存在弊端，无法保证早期筛查的准确性。为贯彻落实国家“两癌”检查政策，更加有效地进行宫颈癌早期筛查和干预，本研究探讨高危型HPV联合液基薄层细胞检测技术（TCT）在宫颈病变早期筛查中的应用价值，旨在为基层医院开展宫颈癌的预防和早期筛查探索科学、合理、经济性的筛查方案，现将结果报告如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2021年1—6月惠州市博罗县两个乡镇5 160名女性宫颈脱落细胞样本，年龄范围35～64 岁，中位年龄47岁。研究对象没有临床怀孕的可疑症状，避开月经期，由惠州市中心人民医院妇科医生采用专用的宫颈细胞保存管，留取足量的宫颈脱落细胞样本，统一保存。所有样本送至惠州市中心人民医院博罗分院检验科分子生物实验室进行高危型HPV-DNA（PCR-荧光探针法）检测，病理科进行TCT。

1.2 试剂与仪器

高危型HPV-DNA 核酸提取试剂盒（磁珠法）和核酸检测试剂盒由上海科华生物工程股份有限公司提供，可定性检测女性宫颈脱落细胞样本中15 种高危型HPV-DNA 核酸，其中可分型检测2 种极度高危型HPV16、HPV18 型，不可分型检测其他13 种高危亚型包括（HPV31、HPV33、HPV35、 HPV39、 HPV45、 HPV51、 HPV52、 HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68）。核酸提取设备为上海科华的DP-1000自动核酸提取仪，核酸扩增设备为美国的ABI 7500荧光定量PCR仪。TCT细胞样本处理采用的液基细胞和微生物处理，保存试剂由广州安必平医药科技股份有限公司提供，设备为广州安必平制片染色一体机。

1.3 方法

1.3.1 HPV-DNA 检测 按配套仪器的操作说明书进行操作。按照实验数量，将一定量的去抑制剂、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液分别分装到编号为1、2、3、4号深孔板相应孔中。样本充分振荡混匀后，吸取200 μL加入1号深孔板相应孔内，再加入400 μL 裂解工作液。开启核酸提取仪，将深孔板放置于相应位置，插上磁套，按仪器提示编辑核酸提取程序并运行，提取好的模板立即用于PCR扩增检测。若不立即使用，将模板置于-20 ℃冰箱暂存备用。检测到1 种HPV 亚型或以上者判为阳性，未检测到者判为阴性。

1.3.2 细胞学检查 应用TCT 进行女性宫颈脱落细胞形态学检查。标本混匀后转移至透明离心管，经离心后弃去上清液，震荡混匀后加入3～4 mL 细胞保存液，离心制片，巴氏染色，封片，阅片。宫颈细胞学TBS分类［5］诊断结果为：（1）未见上皮内病变细胞和恶性细胞（NILM）；（2）不典型鳞状上皮细胞（ASC），包括未明确意义的ASC（ASC-US）及不排除高度病变的ASC（ASC-H）；（3）低度鳞状上皮内病变（LSIL）；（4）高度鳞状上皮内病变（HSIL）；（5）鳞状细胞癌（SCC）等。NILM 者为阴性，ASC或以上病变为细胞学检查阳性，统一归为癌变组。

1.3.3 阴道镜组织病理检查 所有HPV或TCT阳性女性均行常规阴道镜检查及宫颈组织病理活检。按照病理学的诊断标准［6］将宫颈病变分为：（1）正常或炎症；（2）宫颈上皮内瘤变Ⅰ级（CIN Ⅰ）；（3） 宫颈上皮内瘤变Ⅱ级（CIN Ⅱ）；（4）宫颈上皮内瘤变Ⅲ级（CIN Ⅲ）；（5）宫颈癌（鳞癌、腺癌）。正常或炎症者判为阴性，定期随访；其余诊断均判为阳性，需要治疗。

1.4 统计学方法

采用SPSS 25.0 软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t 检验。计数资料以例数和百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV与TCT检测结果

5 160 名研究对象中，高危型HPV 筛查阳性人数375例（阳性率为7.27%），其中HPV16 约占17.07%，HPV18约占10.13%，其他13种高危型HPV占72.8%。TCT筛查阳性人数230 例（阳性率为4.46%），其中ASC 约占61.74%，LSIL 约占30.43%，HSIL 约占6.52%，SCC 约占1.31%。HPV 和TCT 联合筛查检出阳性人数424 例（阳性率为8.22%），高于HPV或TCT单独筛查阳性率。

2.2 HPV、TCT检测的诊断效能

对HPV 与TCT 联合筛查阳性的424 例女性进行阴道镜组织病理检查。375 例HPV 阳性经组织病理检查180 例为阳性，阳性结果预测值为48.00%，阴性预测值为91.84%。其中HPV16 阳性预测值为79.69%，HPV18 阳性预测值为73.68%，均高于其他13 种高危型阳性预测值37.00%；49 例HPV 阴性而TCT 阳性经病理检查4 例为阳性。TCT 检查中细胞学阳性预测值、阴性预测值分别为79.13%、98.97%。TCT 阳性指标随着细胞病变程度加深，阳性预测值也逐步增加，HSIL 的阳性预测值为93.33%，SCC 的阳性预测值为100.00%。HPV 与TCT 联合筛查检出双阳性的阳性预测值为98.34%，均明显高于HPV、TCT单一筛查的阳性预测值，见表1。

表1 HPV、TCT与组织病理结果

3 讨论

近年来，全球宫颈癌的发病率呈逐步上升趋势，发病年龄越来越年轻化，对于女性的身体健康产生了严重威胁。在我国，虽然宫颈癌的病死率有所下降，但各级医院对于宫颈癌患者的收治比例却呈升高趋势［7］。依据患者的临床症状及相关检查指标及时检查确诊，是保证宫颈癌与癌前病变及时诊断和有效治疗的重要基础［8-9］。然而宫颈癌早期病变的临床症状并不十分明显，患者常无不适感，难以引起自身足够的重视，特别是在较偏远地区或基层乡镇的女性群众。由于受教育程度低，缺乏宫颈相关疾病的预防知识，容易忽视自身的健康状况，导致宫颈轻微病变最终发展为宫颈癌的可能性增大［10］。故早筛查、早诊断并及时治疗对降低人群宫颈癌的发病率和死亡率有很大的临床价值和社会经济效益。目前，宫颈癌诊断的金标准仍是病理学检查，但存在创伤性较大、操作复杂、报告时间长的弊端，而且基层医疗卫生机构技术条件非常有限，无法应用于人群大规模筛查。为此，本研究借助国家“两癌”筛查政策对博罗县乡镇妇女群众进行HPV 核酸检测和TCT检查，以了解该地区妇女群众HPV 感染和宫颈病变情况，探讨HPV和TCT在基层女性宫颈病变早期筛查和预防中的应用价值。研究结果显示，该地区乡镇妇女群众高危型HPV 筛查阳性率为7.27%，低于世界水平（10.40%）［11］和医院检查人群感染率（14.40%、16.94%）［9，12］；TCT 筛查阳性率为4.46%，低于粤东地区水平（6.04%）［12］。这可能与研究对象分布不同有关，本文研究对象为乡镇普通女性人群，不包括医院就诊人群数据。高危型HPV16和HPV18占比达到27.2%，两者的阳性预测值远高于其他13 种高危型阳性预测值，提示HPV16、HPV18型与宫颈病变密切相关，在人群筛查中应该重点关注这种亚型阳性的感染人群，加强防范和预防接种，有临床症状者及早就医治疗。TCT 筛查的阳性预测值和阴性预测值分别为79.13%、98.97%，且随着宫颈细胞病变程度的加深，阳性预测值逐步增加，提示TCT 结果异常时，要警惕宫颈病变恶化，要早诊断早治疗。

有研究［13］发现，HPV 感染具有一过性，许多感染者HPV 可于1～2 年自然消退，致使HPV 检测的特异性降低；而TCT 检测会受到病理形态学诊断技术的影响，导致灵敏度偏低而假阴性率高。本文分析HPV联合TCT检测结果发现，HPV 与TCT联合筛查检出的阳性率与阳性预测值均高于单一的HPV 或TCT 检测。这与相关研究［14］结论相似，表明HPV联合TCT检测在宫颈病变早期筛查中优于单一的HPV 或TCT筛查，能显著提高宫颈病变早期筛查的灵敏度和特异性。因此建议采用HPV联合TCT检测方法作为基层女性人群宫颈病变早期筛查的重要手段。

综上所述，HPV 联合TCT检测方法的诊断效能优于单一的HPV或TCT检测，能够提高宫颈病变早期筛查灵敏性和特异性，对基层健康人群的宫颈病变早期筛查具有重要意义。HPV疫苗已被批准上市，主要用于预防HPV感染引起的宫颈癌等癌前病变或不典型病变。但接种成本较高、接种后效果评价和全面推广还需时间。因此，要因地制宜，强化健康教育和早期筛查价值，加强针对高危型的HPV疫苗的接种推广，使更多的女性远离HPV的感染，降低人群宫颈癌发病率。