水产品中呋喃唑酮代谢物快速检测准确率影响因素分析

■ 文｜东莞市动物疫病预防控制中心 张汉霞 邹潍力 姚婉仪 彭家杰 殷三鸿 谢翠美 胡浩光 李希国＊

呋喃唑酮对人体有致癌、致畸副作用，农业部公告第250号《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》中规定硝基呋喃类药物及其代谢物为禁用药物，在动物性食品中不得检出。呋喃唑酮属于硝基呋喃类广谱抗生素，曾被应用于水产养殖业。硝基呋喃类原型药在生物体内代谢迅速，其代谢产物因和蛋白质结合而保持长时间稳定，故常利用对其代谢物的检测来反应硝基呋喃类药物的残留状况。

胶体金快速检测技术是目前基层镇街检测机构在水产品质量安全监测中最常用的方法，但在日常组织的能力比对中，仍存在基层检测结果不合格的情况。本文通过随机选取八个胶体金试剂盒产品，验证了其在鳊鱼、鲤鱼、黄骨鱼、草鱼、南美白对虾等不同基质水产品中呋喃唑酮代谢物的检测准确率情况，进而将其应用于基层镇街检测机构中，查找影响基层水产品中呋喃唑酮代谢物快速检测准确率的因素。实验结果表明，样品基质、检测人员技术能力、试剂盒质量等因素是影响水产品中呋喃唑酮代谢物快速检测准确率的关键因素。

一、试剂盒现场验证

1.材料与方法

在市场上随机选取A、B、C、D、E、F、G、H等8个不同厂家的呋喃唑酮代谢物胶体金快速检测试剂盒，并邀请厂家售后工程师参与现场验证。在市场购置鳊鱼、鲤鱼、黄骨鱼、草鱼、南美白对虾等五种不同基质的水产品，按GB/T 30891-2014的要求制备成肉糜，经液质联用法（农业部783号公告-1-2006）检测，呋喃唑酮代谢物含量低于0.5µg/kg的样品作为空白样品，按说明书为每个试剂盒称取不同基质样品共20份，通过添加呋喃唑酮代谢物标准物质后制备成阳性样品，具体样品情况见表1。

表1 验证样品情况

2.现场验证结果

验证现场由各试剂盒厂家工程师进行实验操作，在120min的现场验证时间内，A、B、C、D、F五个产品的验证结果全部符合要求，且总检测用时A＜B＜D＜F＜C。产品E未在规定时间内完成检测，G、H两个产品均出现了假阴性的问题。具体验证结果见表2。

二、基层能力比对

1.材料与方法

根据现场验证情况，选取准确率 100%且用时最短的A、B两个产品用于全市基层检测机构的快检能力比对，其中选取A产品的13家，选取B产品的16家，作为比对另有3家机构选取了G产品。选取经液质法（农业部783号公告-1-2006）上机检测，呋喃唑酮代谢物含量低于0.5µg/kg的宝石鲈鱼肉肉糜作为空白样品，按试剂盒说明书要求分别称取各自重量的样品，通过添加呋喃唑酮代谢物标准物质后，制备成浓度为1.0µg/kg的呋喃唑酮代谢物阳性样品。各基层检测机构现场抽取4份样品，带回各自实验室检测，12小时内上报检测结果。

2.比对结果

每家基层检测机构4份样品检测结果均正确的记为“合格”。使用A产品的13家检测机构，比对合格率为92%,假阴性率2%，项目正确率98%。使用B产品的16家检测机构，比对合格率为75%，假阴性率34%，项目正确率66%。使用G产品的3家检测机构，比对合格率为33.3%，假阴性率42%，项目正确率58%。

三、结果分析与讨论

1.样品基质的影响

现场验证时选择了鳊鱼、鲤鱼、黄骨鱼、草鱼、南美白对虾等五种基质样品，基层能力比对时选择了宝石鲈样品，研究显示宝石鲈鱼肉的粗脂肪含量高达5.23%，是其他淡水鱼的近2倍。试剂盒A产品采用了过色谱小柱的样品净化浓缩技术，可以较好的去除脂肪等杂质；而试剂盒B产品采用了氮吹浓缩技术，需自行采取去油脂措施。因此在现场验证环节针对五种脂肪含量低的样品基质，A、B两个产品均能以100%的正确率通过验证，而在基层的能力比对环节，因宝石鲈鱼肉样品中过多的脂肪影响了产品的比对准确性，其比对正确率分别下降为98%、66%，表明样品基质特别是脂肪含量影响快检结果的准确性。

2.检测技术能力的影响

A、B两个试剂盒产品虽然采取了不同的样品浓缩技术，但针对技能熟练的检测人员，能够根据样品实际情况采取相应措施，同样可以准确的完成检测。譬如在验证环节采用的草鱼样品，根据《中国食物成分表》显示其脂肪含量也高达5.2g/100g，但验证环节由其厂家工程师进行操作，对脂肪含量高的样品提取液，自行采取了高速冷冻离心分层的方法，将脂肪层悬浮在离心管上层实现分离，并准确吸取中间层有机溶液进行后续的氮吹浓缩，因此在现场验证环节B产品的正确率也达到100%，但在基层能力比对环节，因各基层检测机构人员能力层次不一，缺乏检测经验，遇到问题样品不能及时采取有效措施去除干扰，因此在该环节中B产品的比对正确率下降至66%，表明检测人员技术能力影响结果的准确性。

3.试剂盒质量的影响

A-H八个试剂盒产品在现场验证环节均由技能娴熟的厂家工程师进行实验操作，其正确率能够反应出试剂盒质量对结果准确性的影响。其中G产品在验证环节的正确率就仅为95%，而在基层比对环节中受各因素影响其正确率进一步降低为58%，因此筛选质量可靠的试剂盒产品是保证准确率的主要因素。针对基层检测机构人员变动频繁，缺乏实操经验，仅能按照说明书完成操作的情况，筛选A类抗干扰能力强的产品更为适合。

四、结论

提升基层检测机构水产品中呋喃唑酮代谢物的快检准确率，首先要选取经过各级部门验证合格的试剂盒产品，其次需要提高基层检测人员的能力水平，制定定期培训机制，针对不同基质样品在提取、离心、净化、浓缩等过程中易出现的问题点进行实操培训讲解，增强其识别杂质含量异常样品的检测能力，防止因检测结果误判而导致问题样品流入市场。