1例孕妇Bmh类孟买血型的鉴定与输血策略

闫玉静 广西贵港市人民医院输血科 537100

1961年Levine发现了类孟买血型,类孟买血型为非常罕见的红细胞血型,属于Hh血型系统,是除了ABO和Rh血型系统之外的一个重要血型系统, 主要是由α-1,2岩藻糖基转移酶FUT1基因突变引起的。血清学特点是红细胞完全缺乏H抗原或仅有少量的H抗原存在,通过吸收放散试验可检测到红细胞上弱表达的A、B、H抗原,也可能检测不出。在日常输血检验工作中常因正反定型不一致、交叉配血试验不合而被发现,进一步进行血清学检测基本能初步判断为类孟买血型,基因检测技术可最终鉴定类孟买血型。自从1979年张工梁等在我国发现第1例类孟买血型以来,国内越来越多的类孟买血型被发现并报道。现对我市发现的首例Bmh类孟买血型的血清学检测进行分析,并探讨Bmh类孟买血型孕妇的输血策略,报道如下。

1 对象与方法

1.1 对象 孕妇,29岁,孕38周+2d,无输血史,无孕产史,2020年10月26日因破羊水1h余来我院待产,常规检查血型,发现正反定型不一致,增加H抗原检测试验、吸收放散试验、不规则抗体筛查和鉴定试验等血清学试验后,发现患者血型疑似类孟买血型。经患者本人及其家属知情同意后,采集患者EDTA抗凝静脉血和唾液标本送往上级输血研究室做进一步鉴定。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 试剂:单克隆抗A抗B血型定型试剂、单克隆抗H试剂、人ABO血型反定型用红细胞试剂,均由上海血液生物医药有限责任公司提供。单克隆抗AB试剂,由法国Diagast公司提供。不规则抗体检测试剂盒(人红细胞),由长春博德生物技术有限责任公司提供。抗-Lea、抗-Leb试剂,由荷兰Sanquin公司提供。O型新鲜脐带血细胞,由实验室自制。进口微柱凝胶血型卡,由DiaMed GmbH达亚美有限责任公司提供的达亚美血型卡。抗人球蛋白检测卡、抗体鉴定细胞(11个谱细胞),均由长春博迅生物技术有限责任公司提供。Puregene DNA Purification Kit(美国Qiagen公司)、RBC-Ready Gene ABO试剂盒(德国Inno-train)。

1.2.2 仪器:厂商提供的配套离心机和孵育器;显微镜,由日本Olympus公司提供,PCR扩增仪(Gene Amp9700,美国ABI公司)。

1.3 方法

1.3.1 ABO正反定型检测:进口微柱凝胶卡式法:将被测血标本采用低离子介质(达亚美2号稀释液)配制成1%的红细胞悬液,微柱凝胶卡正定型孔和ctl孔各加入50μl。反定型孔加入1%反定型细胞50μl,再加入患者血浆50μl,放置于专用离心机离心观察结果。试管法复核严格按照《全国临床检验操作规程》[1]进行操作。

1.3.2 H抗原检测:采用盐水介质试管法,患者3%的红细胞悬液与单克隆抗-H试剂反应,标准B、O型红细胞与单克隆抗-H试剂反应作为对照,离心后判读结果。

1.3.3 吸收放散试验:取1ml被检红细胞,用生理盐水洗涤4次,最后一次移除所有上清液,留压积红细胞;加入1ml单克隆抗-B血清到洗涤好的红细胞中,混合红细胞和抗体,在4℃孵育2h,其间不时摇晃混匀,离心取上清液与吸收前抗B血清进行对照,倍比稀释后加入B型标准红细胞,离心后观察单克隆抗-B吸收前后的效价有无变化,间接证实是否存在B抗原。使用大量的低温生理盐水(4℃,10ml)洗涤吸收后的压积红细胞多次,留取部分最后一次的洗涤上清液作为平行对照,使用3%B型标准红细胞检测上清液是否残留抗B,如果有应继续洗涤,直到没有抗B存在。56℃热放散10min,离心后放散液和B型标准红细胞反应,离心后观察有无凝集,确认是否存在B抗原。

1.3.4 不规则抗体筛查与鉴定(血清中抗H和抗HI抗体检测): 采用盐水介质试管法和微柱凝胶抗人球蛋白法,患者血浆分别与抗筛细胞(3个谱细胞)和抗体鉴定细胞(11个谱细胞)反应,确定血浆中是否存在不规则抗体,若不规则抗体疑为抗H或抗HI抗体时,加做新鲜O型脐带血红细胞反应,用以判断血浆中的抗体,若不凝集为抗HI抗体,否则为抗H抗体。

1.3.5 红细胞Lea、Leb抗原检测:采用盐水介质试管法,患者红细胞悬液分别与抗-Lea、抗-Leb试剂反应,离心后判读结果。

1.3.6 唾液中血型物质检测:取适量患者的唾液,离心后取上清液,在沸水浴中静置8～10min以去除唾液中的酶,再次离心收集清澈或轻微乳浊液。单克隆抗-A、抗-B和抗-H血清倍比稀释,以出现“2+”凝集块的最高稀释度为最适稀释度备用。用标化血清和处理后的唾液做中和抑制试验,以检测患者唾液中的血型物质。

1.3.7 基因检测及FUT1基因测序:使用Puregene DNA Purification Kit提取标本DNA,严格按照试剂说明书的步骤进行操作。采用RBC-Ready Gene ABO试剂盒对标本进行ABO基因分型检测。PCR扩增仪扩增,扩增条件:95℃变性5min;95℃30s,65℃30s,72℃90s,循环30次;72℃延伸7min后冷却至12℃,完成PCR扩增,对PCR纯化产物进行FUT1基因测序。

2 结果

血清学检测结果为ABO血型正反定型不符,正定型表现为O型,反定型B型;H抗原检测结果为阴性,提示红细胞上未检出H抗原;吸收放散试验结果显示,抗B血清吸收前后效价基本无变化,放散液与B细胞呈阴性反应,证实红细胞表面未检出B抗原。不规则抗体筛查与鉴定试验结果为血浆与抗体筛选细胞、抗体鉴定细胞反应均为阳性,且强度一致,提示血浆中含有抗H或者抗HI;和O型脐带血细胞反应,结果阴性,表明血浆中含有IgM类抗HI抗体。Lewis血型为Le(a-b+),证实为分泌型个体。唾液中血型物质检测结果显示抗-A(++++),抗-B(-),抗-H(++),表明唾液中有B物质和H物质。基因检测结果为Bmh类孟买血型,ABO基因分型为BB,FUT1基因测序结果为h3h3突变。

3 讨论

根据实验室检测结果,本例患者FUT1基因突变,为分泌型Bmh类孟买血型。类孟买血型极其罕见,在医学中的意义和价值尤其重大。随着实验室检测技术水平的发展,类孟买血型的检出率越来越高,相关的文献报道也越来越多。常见的类孟买型有Omh、Amh、Bmh等,AB类孟买型的报道较少见[2]。

类孟买血型的频率在不同人群中存在差异,孟买型在印度孟买附近的马哈拉施特拉邦人中大约为1∶7 600,泰国为1∶5 000,而在欧洲人的频率很低,只有1∶312 081左右。孟买型在中国极少见,相对较多的是类孟买型,类孟买血型在我国的报道主要见于南方,台湾地区类孟买型的比例大约为1∶8 000,香港地区为1∶15 620,大陆目前还没有进行大量样本的调查,仅在某些地区和民族较高,如福建地区频率约为1∶8 500,与台湾地区相似,都具有较高的类孟买型频率。而云南少数民族拉祜族中的频率高达2.2%,其他省份大规模筛查的数据尚未见到。经调查,本例患者的祖籍为福建莆田,属于类孟买型频率高发地区。孕妇自述其家庭成员目前暂未发现血型异常和配血困难的情况,但是未经过专业机构的相关实验室检测,其家庭成员的ABO血型结果并不能最终确定。由于条件受限,本例Bmh未能取得家庭成员的血液样本和唾液标本进行检测供家系分析。

日常检验工作中常规检测血型时一般只做ABO正反定型,未常规做H抗原检测,导致类孟买血型很容易漏检。类孟买血型人群的血浆中通常含有抗-H或抗-HI,抗-H一般出现在H缺乏的非分泌型个体血清中,如孟买型、Ah、Bh、Oh。抗-HI则出现在分泌型的类孟买型,会影响类孟买血型的反定型鉴定,以及盐水法的不规则抗体筛查和交叉配血[3],因此类孟买血型也极易误定为O型。建议常规检测 ABO血型时增加H抗原检测,可避免罕见的类孟买血型的漏检。血清学检测联合分子生物学检测才能准确鉴定血型,从而更好地指导临床输血[4-5]。

类孟买型患者若需输血,输同型血无疑是最理想的选择。但是此血型非常罕见,血源的获得十分困难。针对该类血型患者的输血策略研究,相关的文献报道层出不穷[6-8]。笔者认为,一是建议择期手术患者可进行自体输血,可将红细胞冰冻保存,急需时解冻即可使用。二是因为类孟买型人群具有家族性遗传特点,家属进行血型检测有助于发现有无同种血型,紧急需要时可互助使用。三是血液中心应建立类孟买型稀有血型库,鼓励这类群体互助献血。四是对于紧急情况如车祸、急诊手术、大出血等需要紧急输血时或者无法寻找到同型血液的患者来说,可筛选37℃无反应活性或者最低反应活性的供者输注,输注过程中密切观察患者是否发生输血不良反应,充分保证患者的输血安全、有效。

H抗体的典型特征是能与O型脐带血细胞反应(比成人O细胞的反应弱),反之则称为抗-HI抗体。根据不规则抗体筛查和鉴定的结果,证实该患者血浆中含有抗-HI。抗-HI活性一般较弱,在37℃常无反应。本例患者为即将生产的孕妇,性质较特殊,考虑到该孕妇在生产过程中可能需要输血,联系血站后并无此类型的供者,短时间内也无法调到同型血,因此可以选择O型相容(在抗人球蛋白卡中交叉配血无反应)的红细胞给患者输注。该孕妇分娩过程中和分娩后出血均不多,生命体征正常,不需要输血。作为一个负责提供临床医疗用血的科室,无论患者输血与否,都要做好稀有血型患者输血的应急预案,为未来可能会出现的稀有血型患者输血工作做好充分的准备。随着三胎政策的放开,孕产妇的数量越来越多,应重视产前检查,尤其是血型鉴定,抗H抗体容易致敏,应尽量避免输血。另外,提醒此类稀有血型的群众出行须更加注意安全,减少外伤,减少不必要的输血。

本例类孟买血型患者的发现,填补了我市类孟买血型检测的空白,同时,在类孟买血型的血型鉴定、交叉配血试验、输血策略方面也积累了一定的经验,从而可以更好地保障类孟买血型患者的生命安全。