试钛灵-铁(Ⅲ)配合物褪色分光光度法测定安乃近片剂含量

刘禹含 卢 瑶 孙陈磊 朱小米 马卫兴*

(1. 江苏海洋大学 药学院,江苏 连云港 222005; 2. 江苏海洋大学 生物医药产业学院,江苏 连云港 222005)

安乃近是一种解热退烧药,其化学结构如图1所示。目前安乃近制剂只有片剂1种,其常用测定方法是直接碘量法[1],需要使用淀粉指示剂,而淀粉指示剂夏天特别容易变质,而且碘标准液易挥发,每次使用前需要标定。其他测定方法有碘酸钾永停滴定法[2]、电化学测定法[3]、共振瑞利散射光谱[4]、吸收光谱法[5]、近红外光谱法[6]、反荧光猝灭法[7]和高效液相色谱法[8]。试钛灵是一种配位型显色试剂,也叫钛铁试剂,其化学名称是邻苯二酚-3,5-二磺酸钠,它不能与亚铁离子发生配位显色反应,但能与三价铁离子发生配位显色反应形成绿色配合物,可用于铁离子的分光光度测定[9],也可用于硫普罗宁[10]和抗坏血酸[11]的测定,但未见用于安乃近的测定。众所周知,三价铁离子能将碘离子氧化为三碘负离子,而三碘负离子能氧化安乃近[1],显然三价铁离子能氧化安乃近,因此利用三价铁离子能氧化安乃近产生二价铁离子,剩余三价铁离子与试钛灵形成绿色配合物的原理,本研究提出试钛灵-铁(Ⅲ)配合物褪色分光光度法测定安乃近含量的新方法,成功地测定了安乃近片剂的含量,与直接碘量法所测结果一致。本方法与直接碘量法相比,所用试剂稳定,且操作方便、快速。

图1 安乃近分子结构Fig. 1 Molecular structure of analgin

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

分光光度计,722型,上海第三分析仪器厂。

准确称取安乃近标准品0.500 0 g,用体积比为1∶1的乙醇和0.01 mol·L-1盐酸溶液溶解并定容至1 L,摇匀可得浓度为500 μg·mL-1的安乃近标准溶液。用铁铵矾按照常法配制浓度为232 μg·mL-1的Fe3+溶液;0.5%(质量体积比)的试钛灵溶液;由0.1 mol·L-1邻苯二甲酸氢钾溶液与0.1 mol·L-1盐酸调配而成的pH为2.60的Clark-lubs缓冲溶液。

1.2 实验方法

取50 mL容量瓶,加入适量安乃近标准溶液或样品溶液,依次准确加入Fe3+溶液、试钛灵溶液和pH 2.6的Clark-lubs缓冲溶液,随后用水定容至刻度线并摇匀。5 min后,以空白液作参比,用1 cm比色皿在660 nm处测试测定液吸光度下降的绝对值A。

1.3 实验原理

利用三价铁离子与安乃近在水溶液中发生氧化还原反应产生二价铁离子、硫酸氢钠、甲醛、4-甲氨基安替比林和氢离子,反应如图2所示。

图2 三价铁离子与安乃近的氧化还原反应Fig. 2 Oxidation-reduction reaction of analgin with Fe3+

氧化还原反应后剩余的三价铁离子与试钛灵发生配位显色反应形成绿色配合物,反应如图3所示。

图3 三价铁离子与试钛灵的配位显色反应Fig. 3 Chromogenic reaction of Fe3+ with tiron

依据上述前后氧化还原反应和配位显色反应,设计可见分光光度法测定安乃近含量的新方法。

2 结果与讨论

2.1 测试波长的选择

按照1.2配制测定液和空白液。以水作参照比,均在550～780 nm波长范围内测定两溶液的吸收光谱,如图4所示。最大吸收波长均在660 nm处,故选择660 nm作为测定波长。由于安乃近的加入使测定液的吸光度(曲线2)小于空白液(曲线1),显然是褪色反应,因褪色造成的吸光度下降绝对值如曲线3所示。

1:空白液 2:原测定液 3:加入安乃近后的测定液图4 样品的吸收光谱Fig. 4 Absorption spectra of samples

2.2 缓冲溶液用量

实验发现,Clark-lubs缓冲溶液的pH在1.80～3.50时,体系的灵敏度高(图5),当选用pH 2.60的Clark-lubs缓冲溶液用量大于2.00 mL时可保证体系pH值位于此区间,此时体系吸光度最大且平坦恒定,故选择5.00 mL pH 2.60的Clark-lubs缓冲溶液用于控制体系的pH值。

图5 pH对样品吸光度的影响Fig. 5 Effect of pH on absorption of samples

2.3 Fe3+溶液用量影响

实验发现,对于500 μg·mL-1的安乃近来说,Fe3+溶液用量大于2.00 mL时体系吸光度最大且稳定(图6)。当Fe3+用量小于2 mL时,Fe3+不足以完全氧化安乃近,生成的绿色配合物太少导致不能完全显色。因此选用2.50 mL 232 μg·mL-1的Fe3+溶液作为安乃近的氧化剂。

图6 Fe3+用量对样品吸光度的影响Fig. 6 Effect of volume of Fe3+ on absorption of samples

图7 试钛灵用量的影响Fig. 7 Effect of volume of tiron

2.4 试钛灵用量影响

在50 mL体积中,对于500 μg·mL-1的安乃近和2.50 mL Fe3+溶液,0.5%试钛灵用量在3.00～8.00 mL时,体系吸光度最大且稳定,故选用5.00 mL 0.5%试钛灵溶液作为Fe3+的显色剂。

2.5 稳定性实验

实验发现,当溶液配好10 min后,体系吸光度最大且在90 min内保持不变。故溶液配好10 min之后即可测定。

2.6 工作曲线

于一组50 mL容量瓶中分别加入不同体积的安乃近标准溶液,按照1.2操作测定660 nm处的吸光度,绘制工作曲线(图8),其工作曲线的回归方程为A=0.016 1C+0.010 3,相关系数R2为0.997 7,安乃近浓度C在2.50～40.00 mg·L-1内呈良好的线性关系。

图8 样品的工作曲线Fig. 8 Working curve of samples

2.7 回收率实验

按照安乃近处方配制模拟片粉,准确称取安乃近片粉适量(相当于500 mg安乃近),加入1 L容量瓶中,用蒸馏水定容、摇匀、过滤,弃初滤液,准确吸取续滤液3.00 mL于50 mL容量瓶中,按照1.2测定操作吸光度(A)并进行计算,11次平行测定的平均回收率98.95%,其相对标准偏差值为2.05%,符合药物分析要求。

2.8 选择性实验

为了确定方法的选择性,考察了可能存在的干扰组分对本体系的影响,对于20 mg·L-1安乃近来说,当测定的相对误差小于±5%时,共存物质的允许量(mg)分别为:硬脂酸镁(100)、Cl-和Br-(15)、Na+和K+(12)、果糖、乳糖、蔗糖和葡萄糖(10)、Ca2+和Mg2+(6)、Zn2+(5.4)、淀粉和糊精(5.2)、氯苯那敏(2.7)、甲硝唑和替硝唑(2.1)。抗坏血酸和碘离子有强烈干扰,但安乃近片剂中不存在这两种物质。因此本方法具有较好的选择性。

2.9 片剂测定

取安乃近片剂10片,准确称重,研细,准确称取片粉适量(相当于500 mg安乃近),加入1 L容量瓶中,用蒸馏水定容、摇匀、过滤,弃初滤液,准确吸取续滤液3.00 mL于50 mL容量瓶中,按照1.2操作测定吸光度A,根据工作曲线的回归方程计算片剂中安乃近含量,结果如表1所示,与药典推荐的碘量法[1]所得结果一致。

表1 样品分析结果(n=11)Tab. 1 Sample analysis results (n=11)

3 结论

基于安乃近可还原三价铁离子,试液中剩余三价铁离子与试钛灵形成绿色配合物的原理,通过条件优化提出了试钛灵-铁(Ⅲ)配合物褪色分光光度测定安乃近含量的新方法,成功地用于安乃近片剂含量测定。此方法特别适合于批量安乃近片剂样品的快速检测。