蛋黄油源流 制取方法以及脉络研究

何峻宇

蛋黄油是中医传统特色药物之一,味甘、性平,具有清热解毒等效,为禽类动物家鸡鲜卵的卵黄提取物,其主要成分包含卵磷脂、脂肪酸、胆甾醇、叶酸、胡萝卜素等,具有促进创面愈合、镇痛、降血脂等作用,广泛地应用于临床上的外治烧烫伤、湿疹、头疮、口唇干裂、疮疡已溃等,内治冠心病、心悸、胃溃疡、小儿百日咳、小儿疳疾、腹泻等疾病;虽然历年来对蛋黄油的研究及文献综述已有很多,但其医学研究仍相对较少,研究不够深入,临床药用价值潜能十分巨大,故本文对蛋黄油源流、制取方法以及研究脉络进行综述,提出一个蛋黄油最佳提出方式以及最新研究趋势和未来发展方向,以促进药用蛋黄油进一步研究。

1 源流考证

蛋黄油作为当今在中医临床上的治疗特色,属于中华传统治疗方法中经验瑰宝,在中国古代历史上早已有使用记载,在先辈探索过程中,蛋黄油的药用价值得到了巨大开发。鸡蛋黄的描述最早是在帛书《五十二病方》记用“鸡卵”,《伤寒杂病论》方有用鸡子黄者;蛋黄油治病首见于北周姚僧垣撰《集验方·卷九》,用以治疗火疮;隋唐时代《备急千金要方》《千金翼方》记载有孙思邈用以治疗烂疮;《传信言》中描述刘禹用蛋黄油主治孩子热疮;《子母秘录》中记载有许仁则治疗幼儿头上疮及白秃用蛋黄油;宋初时,《日华子诸家本草》《太平圣惠方》《圣济总录》《证类本草》以及《幼幼新书》等,进一步拓宽了蛋黄油的药用治疗范围,包括:头疮、汤火油伤、诸瘘、诸疥等;明代时,蛋黄油进一步发展,在《善济方》《外科正宗》和《鲁府梦方》等书中记载有由蛋黄油制成的生肌凤雏膏和用蛋黄油治疗痔疮、诸疮肿毒等其他疾病;到了清代,《神福堂公选良方》将蛋黄油名为鸡黄煎,并扩大治疗范围到酒渣鼻、脓窝疮、肾囊风、寒湿疮、阴疮溃烂 ,被重压磨肩伤等[1]。蛋黄油在中国古代治病,主要是从外治入手,治疗疾病范围广,种类多,疗效肯定,经过历史的考验与完善,奠定了其在当今医学界临床使用的地位。

2 制取方法

目前关于蛋黄油制取方法的文章综述较为全面,且蛋黄油提取涉及工业、食品、医学等多个领域,并且相互影响,有待进一步交叉学科研究,故本文对此部分简单介绍。

中药制剂蛋黄油的提取工艺为炒制法,多为院内根据经典自行手工生产,但依然存在产量小、批次间差异大、质量控制不完善等缺点,且高温煎炒会造成蛋黄中脂类成分的氧化、酸败以及产生致癌物质苯并芘等有害成分,不适合规模化生产。

现代研究中蛋黄油提取工艺主要分为干馏法、高温热处理法、减压蒸馏法、溶剂萃取法、亚临界法、超临界法、酶法提取法等。干馏法是将蛋黄粉放在260 ℃的烘箱里直接烘烤,蒸掉蛋黄粉中的水分等挥发成分直到馏出油脂,省去了高温翻炒的麻烦,缺点和传统制法一样。溶剂萃取法是采用有机化学试剂为萃取剂,主要有丙烷、氯仿、乙醇等,将蛋黄粉中的脂类物质提取出来,然后经过真空蒸馏回收溶剂,分离得到蛋黄油。溶剂法的提取率高、萃取和分离温度低,得到的蛋黄油颜色浅,但存在溶剂残留的问题。亚临界法是以亚临界状态下的丙烷为溶解介质进行萃取,此法的优点是萃取温度和压力低,生产成本低,缺点是同样存在溶剂残留、提取的蛋黄油中磷脂含量较低的问题。超临界法是以超临界状态下CO2来溶解蛋黄粉中的脂类物质,大多在实验室进行,此法的优点是产量高且无污染,萃取温度低,无溶剂残留,缺点是提取的蛋黄油中磷脂含量少,萃取压力高,生产成本高,萃取过程要求非常严格的缺点,难以大规模工业化生产。酶法提取法,是一种提取油脂的新方法,工艺简单,污染率小,总脂质提取率高,并很好地分离出三酰甘油和磷脂,但脂肪酸的含量高,并且产物中含有脂肪酸,会影响蛋黄油中脂肪酸的形成。

目前,国内的蛋黄油尚未实现产业化、标准化,较大限制了蛋黄油不仅在工业食品上的应用,也限制了其在医学领域的使用,而现阶段公认溶剂萃取法(乙醇萃取法)是工业上最常用方法,此方法设备投资小、所需溶剂易得、生产成本低、溶剂无毒,残留溶剂对人体无害,适宜大量生产,但存在溶剂残留、获得率低等问题;其次是超临界CO2萃取法,但更为广泛接受的是将超临界CO2萃取法与醇提法相结合提取蛋黄油,可以更高效获得蛋黄油和磷脂,减少资源的浪费。

3 研究脉络

历年来对蛋黄油的研究及文献综述已有很多,本文旨在通过时间顺序,给临床研究清晰地显示蛋黄油研究过程以及最新研究趋势和未来发展方向。

3.1 2015年前 奠定基础2015年前对蛋黄油的研究范围广,创新理论较多,为后世的研究打下了坚实的基础。2010年,张昆明等[2]对5种蛋黄油提取工艺对比实验得出:微波辅助萃取、微波-超声波协同萃取能显著提高卵磷脂得率,明显缩短提取时间,大大简化了提取工艺; 2013年,吴慧等[3]指出:蛋黄油富含维生素A、维生素E等多种维生素,以及日本专利文献介绍粗制后的蛋黄馏油再用减压蒸馏法或酰化(或者兼用两者)进行精制,可使其中的苯并(α)芘含量大幅度降低,从而降低细胞的变异性;刘竹青等[4]应用二次回归正交旋转组合设计证明用乙醇提取蛋黄油是一种安全,高效,操作简便的方法;2014年,蔡鸿飞等[5]通过实验证明氧化铝柱层析吸附对纯化制备药用蛋黄油具有良好的应用前景;黄建军等[6]从单釜萃取及三釜串联萃取两方面研究了超临界CO2萃取釜萃取蛋黄油的最佳条件;许标等[7]从胆固醇角度探索了最佳萃取溶剂为石油醚:丙酮混合萃取溶剂;Riichiro等[8]研究了以纽拉酶F为原料,从高浓度的蛋黄悬浮液中分离蛋黄油的方法,并提出该方法可以进行大规模的分离等。该时期从蛋黄油成分的研究到新型制法与辅助方法的探索与发现,都进行了很多的研究,不仅是对前人经验的总结归纳,更是对蛋黄油研究范围的拓宽以及后世进一步研究提供了可靠的研究基础。

3.2 2015年 虽少但精2015年对蛋黄油研究较少,但研究结果对下一阶段研究举足轻重。杜俊民等[9]基于高温下产生哈尔满碱且对药用蛋黄油临床疗效影响很大,以哈尔满碱和磷脂为中心探索了高温热处理制备蛋黄油的最佳条件;Zhao等[10]提出了新兴的研究方向:中国林蛙蛋油[10]。该时期主要从事于药用蛋黄油研究,并提供了很好的研究方向。

3.3 2016—2018年 发展加速2016—2018年,对蛋黄油研究进一步深入,并逐渐细微化、结构化。2016年,林影影等[11]通过实验证明超临界萃取和乙醇提取结合工艺,可更有效地提取蛋黄油和 PC,减少资源的浪费;袁诚等[12]通过正交试验发现并优化氧化铝对蛋黄油中胆固醇的富集;Wu等[13]通过蛋黄油进一步制得SZK油,然后进行湿疹小鼠试验,证明乙醇提取法是较好的蛋黄油提取方法;2018年,吴志珊等[14]通过高效液相色谱法,精确测定了蛋黄油软膏中维生素 E 的含量,证明该方法的简便快速性;王梦园等[15]通过单因素和响应面优化试验确定了乙醇提取蛋黄粗磷脂的最佳工艺条件,使蛋黄油提取物磷脂提取率提高。该时间段内,溶剂提取法与超临界萃取法地位开始初步确立,并有结合趋势,并在前人基础上进一步探索与创新,且研究逐渐关注到具体单个活性物质的作用与提取,推动了蛋黄油进一步的研究。

3.4 2019—2021年 关键时期2019—2021年,对蛋黄油的研究进步更大,提出了更多创新性的观点,研究方向更明确。2019年,何仙玉等[16]实验证明超声辅助乙醇法可以更好地提纯蛋黄油中的卵磷脂,并为蛋黄卵磷脂的提取、贮藏和综合利用提供了技术支持;杨福明等[17]在文章中综述了现有蛋黄油提取方式以及蛋黄油中各活性物质研究现状,并强调其中卵磷脂重要的地位;辛董董等[18]确定乙醇萃取法制备蛋黄油的最优条件,并通过研究证明,在酸价、碘值、哈尔满碱和不饱和脂肪酸的含量上,得到的鸭蛋蛋黄油含量显著增高;在胆固醇、磷脂和饱和脂肪酸的含量,得到的鸡蛋蛋黄油含量显著增高;孙静等[19]用蛋壳粉替代传统的Al2O3,采取溶剂萃取工艺从鸭蛋黄中提取到了较高含量的卵磷脂产品,为卵磷脂的粗提工艺提高了借鉴;杨希良等[20]实验表明醇提蛋黄油对 SD 大鼠慢性胃溃疡有保护功能;赵小伟等[21]介绍了北京中医药大学自行研制出了特色中药制剂,血余蛋黄油,用于烫伤、顽固性溃疡、放射性溃疡、放射性肠炎或疮疡溃后久不收口者;2020年,朱帅等[22]综述提出:提取蛋黄卵磷脂的方法主要有溶剂提取法和超临界萃取法和蛋黄卵磷脂具有抗氧化、抗菌、抗炎、神经保护和心脑血管保护等功能的生理活性,以及介绍了蛋黄卵磷脂脂质体;陈伊凡等[23]通过实验确定了乙醇提取蛋黄油最佳条件,以及将提取的蛋黄油进行氧化调控后进行对比发现蛋黄油中挥发性物质组成较单一,而氧化蛋黄油中的挥发性成分明显更多;朱帅等[24]又提出采用丙酮脱脂、乙醇提取的方法提取蛋黄粉中的 PC,获得PC 提取率为 24.23%;Su等[25]通过亚临界流体-丙烷萃取法(SPE)制备蛋黄油(EYO)和低脂蛋黄粉,指出亚临界技术在制备蛋黄油和低脂EYP方面具有独特的优势。该时期进一步确定了蛋黄油提取以溶剂(乙醇)提取为主,其次是超临界萃取法,应用中基本确立与巩固了溶剂(乙醇)提取与超临界萃取法配合使用的地位;并提出了其他新型蛋黄油提取方法;蛋黄卵磷脂为该时期的主要研究方向;鸭蛋提取蛋黄油的创新观念也被提出与探索;该阶段是蛋黄油研究中关键时期,为后续蛋黄油进一步研究与临床价值探索提供了重要的参考价值。

自2015年以后,到现今阶段,蛋黄油提取方法与辅助提取方法逐步验证、修改、完善与创新,研究方向更加明确具体化,蛋黄油药用价值研究逐步由宏观走向细微化,各类创新性观点也逐渐提出,卵磷脂成为现今研究重点,溶剂(乙醇)提取与超临界萃取法结合成为主要提取方式,鸭蛋蛋黄油创新性提出等等,可见蛋黄油研究正处于突破的关键时期。

4 讨论

虽然蛋黄油现阶段研究有很多,创新性观点的提出亦不少,但仍存在许多需要改进的地方。①中药制剂的蛋黄油为院内制剂,存在产量小、批次间差异大、质量控制不完善等缺点。而上述研究显示在较高浓度的蛋黄悬浮液喷雾干燥后可以进行大规模的分离与提取,以及淘汰蛋鸡屠宰后通常会遗留许多卵泡为蛋黄油来源提供了巨大的商机;探索将药用蛋黄油与工业化生产有机结合起来,研究药用蛋黄油大规模批量化生产,规范化投入临床使用,是促进蛋黄油临床更加广泛使用的关键。②研究显示,高温制取蛋黄油是获得具有较高医药应用价值的蛋黄油的必不可少的条件,主要跟有关抗菌活性的生物碱成分如哈尔满等含氮杂环化合物有关,但高温同样也会带来苯并芘等有害物质的产生,限制其临床应用范围,而日本专利介绍了粗制后的蛋黄馏油再用减压蒸馏法或酰化(或者兼用两者)进行精制,可使其中的苯并芘含量大幅度降低,从而降低细胞的变异性。如何控制疗效与毒性之间的平衡,探索新的方式达到减毒增效的目的,促进临床使用,有待进一步研究与探索。③蛋黄油中各类生物活性物质和药用价值方面研究仍然不足,其中卵磷脂、维生素、哈尔满等都具有进一步研究的价值,如研究显示维生素是各类化妆品良好的辅料,其对皮肤渗透性及保湿效果好,蛋黄油批量化生产后,亦可促进医美的发展;同时蛋黄油中胆固醇、脂类物质提取和成分分析的报道较少,而卵磷脂则是近年来研究的主要方向。④无论是传统提取法或超临界提取法配合醇提取法所萃取的蛋黄油,酸值和过氧化值都偏高,且还含有大量的胆固醇,这些对于患者而言,都会削减疗效甚至带来坏处,而有研究显示,氧化铝柱层析吸附对纯化制备药用蛋黄油可以改善这些影响因素,提高药用价值,进一步临床试验探索和其他方面探索以促进药用蛋黄油更高品质的研发。⑤中国林蛙蛋油,鸭蛋油等新兴观念的提出,其中以鸭蛋蛋黄油最为重要,上述研究显示鸭蛋蛋黄油在酸价、碘值、哈尔满碱和不饱和脂肪酸的含量上比鸡蛋蛋黄油更高,而哈尔满碱和不饱和脂肪酸中卵磷脂等,都已经证实为鸡蛋蛋黄油药用价值的关键,故形成假说:鸭蛋蛋黄油药用价值比鸡蛋蛋黄油药用价值更高,临床上更推荐使用鸭蛋蛋黄油,以及进一步探索鸭蛋蛋黄油与鸡蛋蛋黄油成分差异,临床疗效差异,都具有重要的临床研究价值。⑥蛋黄油成方制剂如:熊胆痔灵栓、熊胆痔灵膏等,提示蛋黄油成方研究也是进一步拓展蛋黄油药用价值范围的关键点,同时结合其他中药,在中医辨证思维指导下,更加合理使用蛋黄油与其他中药的配合使用,更能提高其临床药用价值。⑦蛋黄油的质量标准控方面仅限于性状鉴别和简单的总磷量含量测定,缺少完整规范的蛋黄油质量评定方法,探索合理的蛋黄油质量控制检测指标,也能够促进蛋黄油进一步临床的广泛使用。⑧蛋黄卵磷脂脂质体作为药物载体,具有鲜明的靶向性,是最新的第四代给药系统中的一个重要制剂;蛋黄卵磷脂也是特殊药用乳液的基本成分,具有成为新一代药物的潜力;人工设计蛋、转基因鸡蛋等新科技引入,为生产抗病药物提供了更加简单而廉价的方法,给未来蛋黄以及全蛋中生物活性物质的开发提供了良好的发展前景。

蛋黄油提取与应用涉及到工业、食品、医学等多个领域,并且相互影响,有待进一步研究,且其研究价值潜力巨大。目前,国内外对蛋黄油的研究仍不够深入透彻,也正是由于这个原因,国内外蛋黄油产品的开发和应用仍然有很大的提升空间,值得进一步探索。