安徽省两栖类新纪录——孟闻琴蛙

2023年6月10日，在安徽省黄山市黄山风景区（30°8'1.18″ N，118°16'9.33″ E；海拔223 m）进行两栖动物调查过程中，采集到琴蛙属（Nidirana）标本2号。该蛙背面棕色；背侧褶深棕色；前肢皮肤较为光滑，躯干后端皮肤较为粗糙，具疣粒；大腿、胫部和跗部均具3 条黑色横斑；指端吸盘略膨大，呈圆形；叫声为2～7 个相同的规则音节。分子系统学分析结果表明，安徽黄山采集的琴蛙标本与孟闻琴蛙（N.mangveni）模式标本［1］聚成一单系支，支持率为1.00。基于p-distance 模型估算，该标本与孟闻琴蛙模式标本遗传距离为0。综上所述，鉴定此次采集的琴蛙标本为孟闻琴蛙，系安徽省两栖类新纪录种［2-3］。采集的样品取部分肝脏组织保存于95%乙醇的冻存管内，-80 ℃储存；标本使用10%福尔马林固定，冲洗后浸在75%乙醇中保存［4］。标本现保存于安徽大学生命科学学院，标本编号AHU0610-01、AHU0610-02。

孟闻琴蛙隶属于无尾目（Anura）蛙科（Ranidae）琴蛙属，Lyu等［1］通过形态学、声学和系统发育关系分析将其发表为新种，模式产地为浙江省金华市磐安县大盘山风景区，此前长期被鉴定为弹琴蛙（Nidirana adenopleura），现有文献记录该物种也在江西省［5］分布。

本次采集的2号琴蛙标本均为雄性，体长50.67～51.55 mm，头长大于头宽，吻长大于眼径，形态学特征与孟闻琴蛙模式标本基本一致（表1）。背面棕色，背侧褶明显，深棕色；躯干后端皮肤粗糙，具密集疣粒；体侧部具稀疏疣粒，体侧上部棕色，具有黑色小圆斑（图1A、B）；前肢背面皮肤光滑，具稀疏疣粒，肩部与声囊连接处具有黑斑（图1C）；大腿和胫部背面皮肤较为粗糙，具疣粒和肌肉束状纵行肤棱；肩腺白色。四肢背面棕色；鼓膜明显，浅棕色。头长大于头宽；吻长大于眼径；吻棱明显；舌心形，后端具缺刻；虹膜上1/3部棕白色，下2/3部红棕色；具1 对咽侧下外声囊，声囊肉色（图1D）；后肢贴体前伸时，胫跗关节达眼前角与鼻孔之间；指趾端略微膨大分别形成圆形吸盘和长而尖的吸盘；指间无蹼，第Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ指两侧具明显缘膜，第Ⅰ指无缘膜，相对指长：Ⅰ＜Ⅱ＜Ⅳ＜Ⅲ。

图1 孟闻琴蛙（ AHU0610-01，；洪飞 摄）Fig.1 Nidirana mangveni（ AHU0610-01；Photoed by HONG Fei）

表1 孟闻琴蛙成体量度Tab.1 Adult measurement of Nidirana mangveni

孟闻琴蛙与弹琴蛙形态学特征较为相似，但也有如下鉴别特征：弹琴蛙体型肥硕，而孟闻琴蛙体型较为细长；孟闻琴蛙具有较弱的颞褶，弹琴蛙则没有。除此之外，从声音上也能区分两者，弹琴蛙鸣声为2 或3 声相同音节，而孟闻琴蛙鸣声为2～7声相同音节［1］。本研究样品符合孟闻琴蛙的鉴别特征。

取AHU0610-01、AHU0610-02 肝脏组织，采用苯酚/氯仿抽提法提取其基因组DNA，使用引物5'-TYTCWACWAAYCAYAAAGAYATCGG-3'和5'-ACYTCRGGRTGRCCRAARAATCA-3'（Y 表示碱基C/T）对其COI基因进行扩增［6］，PCR 产物送至擎科生物科技（武汉）有限公司测序，得到2 号标本线粒体COI基因片段，并提交到GenBank（OR394180、OR394181）。从NCBI数据库下载琴蛙属30个物种的COI基因序列，并选取琉球拇棘蛙（Babina holsti）作为外群，使用MrBayes 3.1.2 构建贝叶斯树［7］。同时，使用MEGA v6.0［8］中的pdistance 模型计算琴蛙属物种间的遗传距离。结果表明，基于COI基因进行系统发育分析，来自NCBI 数据库中的弹琴蛙和孟闻琴蛙各自成单系，安徽黄山风景区采集的琴蛙与孟闻琴蛙正模序列聚成一单系支，支持率为1.00（图2）。基于p-distance 模型估算，采集于黄山风景区的标本与孟闻琴蛙模式标本序列的遗传距离为0，小于该属之间的最小遗传距离（4.8%）。因此，基于形态学和分子系统学的证据均表明此次在安徽省黄山风景区发现的琴蛙为孟闻琴蛙。

图2 基于线粒体COI基因琴蛙属的贝叶斯树Fig.2 Bayesian inference tree of Nidirana based on mitochondrial COI gene

近几年来，随着生物多样性研究的深入，Lyu等［1］在浙江省金华市磐安县大盘山风景区发现曾被误定为弹琴蛙的琴蛙新种，并命名为孟闻琴蛙。虽然在Lyu 等发表的文章中并未对安徽省的琴蛙样本进行采集分析，但据中国两栖类网站［2-3］记载，安徽省有弹琴蛙的分布（宣城、池州、黄山）。据Lyu 等［1］描述，弹琴蛙鸣叫声为2或3声，孟闻琴蛙为2～7声，笔者在黄山进行两栖类调查时发现，同一片池塘内，2或3声和2～7声的琴蛙叫声都存在，两者叫声具有重合区间，即都会发出2 或3 声的叫声，由于研究区域的局限性，并未对池州和宣城的琴蛙属物种进行研究。综上所述，目前尚不能确定安徽省是否具有弹琴蛙的分布，有待后续进一步研究。

黄山风景区是我国著名的山岳型风景名胜区，位于北纬30°线，属于亚热带季风气候，地形复杂，植被垂直分布明显，拥有多样的生态系统［9］。此次孟闻琴蛙的发现丰富了黄山风景区两栖类多样性，目前，还未有文献记载黄山风景区进行过全面系统的两栖动物多样性研究，后续要加强该区域两栖动物的调查研究，澄清该区域两栖动物多样性。