HPV感染对复发性流产患者早期滋养细胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表达的影响分析

孟 杰 孟雅姣 赵红霞

天津市第四中心医院 300140

复发性流产(Recurrent spontaneous abortion,RSA)又称为习惯性流产,其发生常与滋养细胞某些生物学行为改变有关,包括滋养细胞侵袭不足、胎盘局部缺血缺氧、螺旋小动脉无法转化为低阻力小血管等。正常情况下,基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMPs)与特异性组织抑制物(Specific tissue inhibitor,TIMPs)维持着动态平衡,在正常妊娠中参与胚胎的种植及分娩发动,研究指出,MMPs、TIMPs在调节滋养细胞浸润功能中发挥重要作用[1]。波形蛋白(vimentin)多见于胚胎发育早期细胞中,与基因表达、细胞分化发育、内皮细胞运动、血管阻力等密切相关[2]。近年来研究表明,RAS与免疫紊乱、感染等因素有关[3],既往文献证实人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)感染与RSA有一定关系,但其导致RSA的具体机制及对滋养细胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表达的影响尚不明确。本文主要探讨HPV感染对复发性流产患者早期滋养细胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表达的影响 。

1 资料与方法

1.1 一般资料 将2021年1月—2023年1月本院收治的84例RSA患者设为研究组,另选取95例拟行人工流产术的早孕妇女设为对照组。研究组:年龄22～35岁,平均年龄(28.56±3.02)岁;孕期45～65d,平均孕期(55.14±5.02)d。对照组:年龄23～34岁,平均年龄(28.62±2.98)岁;孕期45～65d,平均孕期(55.36±4.81)d。两组年龄、孕期比较无统计学差异(P>0.05)。研究组纳入标准:患者与同一性伴侣发生连续3次或3次以上自然流产;夫妻双方染色体正常;无子宫畸形、宫内感染、内分泌异常。本研究符合《赫尔辛基宣言》规定,且患者及其监护人对本次研究知情并签署同意书。

1.2 方法 (1)MMP-2、TIMP-2、vimentin免疫组化检测: ①无菌条件下,取新鲜绒毛组织,对照组人工流产术时取样,观察组要在确认胚胎停止发育时取样,在使用生理盐水反复冲洗干净后取适量绒毛组织,并以10%福尔马林固定,石蜡包埋,切片;按照试剂盒说明进行常规免疫组织化学染色,检测组织中的MMP-2、TIMP-2、vimentin表达,其中MMP-2、TIMP-2、vimentin多克隆抗体及所用试剂盒均来自博士得生物技术有限公司。②结果判定:根据细胞中出现棕黄色颗粒为阳性表达,运用高清晰度病理彩色图文分析系统分析图像,每张切片取5个视野并摄片,保证所有图片均在同一条件下拍摄;测定每张图片上滋养细胞的平均光密度(MD)、积分光密度(IOD)、有效面积(A),MD=IOD/A,此值反映滋养细胞中相关蛋白的表达值。(2)HPV-DNA检测:本次检测包括5种低危型及23种高危型HPV基因型;采用聚合酶链式反应(PCR)法,在组织细胞配置好之后,加入细胞消化液将DNA释放出来,并选用HPV L基因区的共有引物GP5+/GP6+和β-globin基因引物Glob-F/Glob-R进行标本PCR扩增,再选用改进的PGMY09/11对β-globin阳性以及HPV阴性进行再次PCR扩增操作,所有扩增过程均包含β-globin基因对照及HPV阳性、阴性对照,电泳技术后将荧光条带出现部分与每条引物扩增的DNA长度相比较。

1.3 观察指标 (1)比较两组滋养细胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表达。(2)比较两组HPV感染情况。(3)比较HPV阳性受试者早期滋养细胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表达水平。

2 结果

2.1 两组滋养细胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表达比较 研究组滋养细胞中MMP-2表达水平高于对照组,TIMP-2、vimentin表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 两组滋养细胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表达比较

2.2 两组HPV感染情况比较 研究组HPV阳性率(42.86%)显著高于对照组(16.84%),差异有统计学意义(χ2=14.639,P<0.001),见表2。

表2 两组HPV感染情况比较[n(%)]

2.3 两组中HPV阳性、阴性受试者早期滋养细胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表达比较 研究组中,HPV阳性患者滋养细胞中MMP-2表达水平高于阴性,TIMP-2、vimentin表达水平低于阴性,差异有统计学意义(P<0.05);对照组中,HPV阳性、阴性者滋养细胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表达差异无统计学意义(P>0.05),见表3～4。

表3 研究组HPV阳性、阴性患者早期滋养细胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表达比较

表4 对照组HPV阳性、阴性者早期滋养细胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表达比较

3 讨论

RSA病因较为复杂,包括免疫、病毒感染等因素,多为早期流产。相关研究显示,在胚胎发育的早期,子宫—胎盘血液循环以及妊娠的完成均依赖于滋养细胞向子宫内膜层的侵袭迁移能力[4]。滋养细胞兼具高度繁殖以及浸润性生长的特点,具有严格的空间性及时间性,在胚胎发育及胎盘建立中发挥着重要的作用。因此推测滋养细胞中一些细胞因子的异常分泌可能是导致流产发生的危险因素,其中MMP-2、TIMP-2均是滋养细胞内分泌的重要细胞因子;vimentin为细胞骨架蛋白,维持细胞器形态并参与细胞间的信号传递[5-6]。

MMP-2是一类以无活性酶原形式分泌到外环境的蛋白酶,并参与许多人体生理及病理过程,如在胚泡植入中可促进血管生成、参与蜕膜止血与修复,且可维持细胞外基质的动态平衡;相关研究显示,MMP-2可在许多恶性肿瘤组织中监测到,因此作为组织侵袭的标志物[7-8]。当MMP-2在滋养细胞中过度表达时便会导致侵袭过度,对胚胎发育产生不良影响,甚至导致流产。TIMPs对MMPs具有特异性抑制作用,两者之间的动态平衡可控制侵袭程度,促进妊娠顺利进行[9]。研究发现,MMP-2的活性表达与滋养细胞的迁移活力呈正相关;施林领等[10]的研究中推测MMP-9/TIMP-1动态失衡是稽留流产患者发病的重要因素。vimentin在正常的上皮细胞中不表达,可作为间叶组织的标记,主要定位于绒毛间质细胞、血管内皮细胞,是中间丝的一种,当绒毛血管内皮发生缺血等病变,可对内皮中间丝产生干扰作用。本文结果显示,研究组滋养细胞中MMP-2表达水平高于对照组,TIMP-2、vimentin表达水平低于对照组,说明RSA的发生可能与妊娠早期滋养细胞MMP-2、TIMP-2、vimentin异常表达与有关。目前对于HPV感染导致RAS发生的机制尚未明确,相关学者认为,HPV衣壳蛋白质的质量较大从而不容易穿过胎盘屏障,因此对早期妊娠不产生危险[11]。但本文结果显示,研究组HPV阳性率高于对照组,说明HPV与RAS的发生具有相关性;此外,研究组中,HPV阳性患者滋养细胞中MMP-2表达水平高于阴性,TIMP-2、vimentin表达水平低于阴性,而对照组中,HPV阳性、阴性者滋养细胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表达差异无统计学意义,可能是样本量较少所致,仍提示HPV可能影响RSA发生,且在RSA患者中,HPV影响妊娠早期滋养细胞MMP-2、TIMP-2异常表达更显著,其机制推测为HPV能促进MMP-2表达,病毒感染后,细胞内的分子含量以及活性均会发生变化,诱导细胞产生内源性炎性因子,包括白介素、肿瘤坏死因子等,均能对其他蛋白的转录水平和活性产生诱导或抑制作用;除此之外,HPV可诱导细胞黏附等相关蛋白降解,从而使细胞间的黏附性降低,促进MMP-2在滋养细胞中过度表达,最终导致侵袭过度[12-13]。

综上所述,RSA的发生可能与早期滋养细胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin的异常表达有关,且HPV可能参与这一过程。本研究样本量少,来源集中,相关论点有待进一步论证。