尖锐湿疣患者皮损组织中Toll 样受体4、核因子κB p65 蛋白表达及临床意义

朱 周 顾丽群 任 祺 花 卉 谷 丽

江苏省南通市第三人民医院皮肤科，江苏南通 226006

尖锐湿疣（condyloma acuminatum，CA）是由人乳 头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染所导致的皮肤黏膜良性赘生物病变，是一种常见的性传播疾病，该病的发病率逐年增加，部分患者治疗困难、不易根治[1-2]。HPV 感染引起的CA 易复发、进展速度快、传播能力强，严重影响患者的身心健康[3]。有研究报道，细胞增殖和凋亡在CA 的发生发展过程中起着重要的作用[4]。Toll 样受体4（Toll-like receptor，TLR4）作为Toll 样受体的一员，可以促进炎症因子的生成，与机体的免疫反应和炎症反应关系密切[5-6]。核因子κB p65（nuclear factor-κB p65，NF-κB p65）是一种核转录因子，可以与各类细胞因子、生长因子和凋亡因子等相互作用，参与机体的氧化应激、凋亡、炎症等过程[7-10]。关于TLR4 和NF-κB p65 在CA 中的表达水平及其与病程发展关系的研究较少，本研究探讨CA 患者皮损组织中TLR4 和NF-κB p65 蛋白表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020 年1 月至2022 年8 月在江苏省南通市第三人民医院（以下简称“我院”）治疗的尖锐湿疣患者92 例作为观察组，纳入标准：①诊断符合《尖锐湿疣诊疗指南》[11]中的标准；②初治。排除标准：①合并有恶性肿瘤、自身免疫系统疾病、肝肾功能障碍、血液系统疾病等其他严重疾病；②合并有人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒感染及结核病；③入组前3 个月内有糖皮质激素、免疫制剂服用史；④妊娠期或哺乳期妇女。另选取同期于我院行包皮环切术的成年男性55 例及外阴整形术的成年女性37 例作为对照组，两组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。见表1。本研究获得我院医学伦理委员会批准（20220401）。

表1 两组一般资料比较

1.2 研究方法

采用免疫组织化学染色检测观察组皮损组织和对照组皮肤组织的TLR4 和NF-κB p65 蛋白表达水平，首先进行常规染色，之后按照试剂盒说明书（北京中杉金桥生物技术公司，512821CB）进行操作，抗体的稀释比例为1∶100，以已知阳性片作阳性对照，以PBS 代替一抗作阴性对照。

1.3 判断标准

TLR4 主要表达于表皮全层的胞膜和胞质，呈现黄色至棕褐色颗粒。NF-κB p65 蛋白主要表达于细胞核和胞浆，呈腺黄色至棕褐色颗粒。每张切片随机选取5 个不同区域，在高倍视野下（400×）观察，对阳性细胞比例和染色强度进行评分，阳性细胞比例：＜10%为0 分，10%～＜25%为1 分，25%～＜50%为2 分，50%～＜75%为3 分，≥75%为4 分；染色强度：无着色为0 分，浅黄色为1 分，黄色为2 分，棕褐色为3 分。阳性细胞比例和染色强度得分之和≥4 分为阳性表达，＜4 分为阴性表达[12]。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 统计学软件进行数据分析。计量资料采用均数±标准差（）表示，比较采用t 检验；计数资料采用例数和百分率表示，比较采用χ2检验。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组TLR4、NF-κB p65 蛋白表达比较

观察组TLR4、NF-κB p65 蛋白表达阳性率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见图1、表2。

图1 观察组皮损组织TLR4、NF-κB p65 蛋白表达 （免疫组织化学染色，400×）

表2 两组TLR4、NF-κB p65 蛋白表达比较[例（%）]

2.2 CA 患者不同临床病理特征与TLR4 蛋白表达的关系

病程≥3 个月、疣体数目≥10 个、疣体最大直径≥10 mm 患者TLR4 蛋白阳性表达率高于病程＜3 个月、疣体数目＜10 个、疣体最大直径＜10 mm 患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 CA 患者不同临床病理特征与TLR4 蛋白表达的关系[例（%）]

2.3 CA 患者不同临床病理特征与NF-κB p65 蛋白表达的关系

疣体数目≥10 个、疣体最大直径≥10 mm 患者NFκB p65 蛋白表达阳性率明显高于疣体数目＜10 个、疣体最大直径＜10 mm 患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 CA 患者不同临床病理特征与NF-κB p65 蛋白表达的关系[例（%）]

3 讨论

CA 发病与HPV 感染有关，HPV 可以通过皮肤黏膜的微小破损入侵表皮细胞基底层，进而引起黏膜异常增殖，患者还可能出现免疫系统功能异常[13-14]。TLR与机体抵抗微生物入侵的免疫反应关系密切，研究发现TLR 参与肿瘤和自身免疫性疾病等的发生发展过程[15]。TLR4 作为TLR 中的一员，具有抑制病毒、炎症反应和凋亡的作用[16]。NF-κB p65 可以作用于下游靶基因，调控炎症因子、凋亡因子的表达[17]。因此，本研究采用免疫组织化学染色检测CA 组织中TLR4 和NF-κB p65 的表达情况，进一步探讨其临床意义。

本研究结果显示，观察组皮损的TLR4、NF-κB p65 蛋白表达水平明显升高。CA 是由HPV 引起的最常见的表皮感染，大多数HPV 感染可通过有效的免疫反应消除，未能根除HPV 会促进疣体的发展，这主要与HPV 能够避开人体免疫防御系统有关[18]。这一过程涉及一系列炎症反应，近年来的研究已证实促炎性细胞因子，包括白细胞介素和肿瘤坏死因子，是皮肤和黏膜炎症发展的重要介质[19-20]。有研究表明，TLR4与机体天然免疫和获得性免疫系统发挥作用有着密切的关系，正常组织中TLR4 的表达量极低，而HPV 感染组织其表达量明显增加[21-22]。NF-κB p65被证实参与多种疾病的炎症反应、细胞增殖及细胞凋亡过程，NF-κB p65 与多种HPV 感染疾病的进展及预后有关[23-24]。因此，CA 组织中TLR4、NF-κBp65 蛋白表达水平明显升高。

CA 的疣体数目、疣体最大直径及病程进展与HPV 感染分型有关，高危型HPV 感染或HPV 混合感染容易导致临床上顽固型难治性CA，且此类HPV 感染的CA 病程进展较快，预后较差。文献报道，高危型HPV 感染和HPV 混合感染组织中TLR4 蛋白、NF-κB p65 蛋白表达水平明显高于低危型HPV 感染组织[25]。TLR4、NF-κB p65 蛋白表达水平与疣体数目、疣体最大直径及病程有关。细胞在正常状态下，NF-κB p65受机体正负反馈机制的调控处于未激活状态，当细胞受氧化应激、炎症因子、病原体感染等多种刺激时，NF-κB p65 作为TLR 通路的下游信号分子，被TLR4蛋白激活，进而调控一系列复杂的信号通路，促进促炎性细胞因子、趋化因子及多种调控因子的转录表达，促进细胞异常增殖和血管生成、抑制凋亡、免疫逃逸、侵袭和转移，对机体造成影响[26]。

综上所述，尖锐湿疣患者皮损组织中TLR4、NF-κB p65 蛋白呈高表达，与疣体数目、疣体最大直径及病程有关，这一结果可能为临床上治疗和预防尖锐湿疣提供新的思路。但本研究未探讨血清水平的TLR4、NF-κB p65 蛋白含量及对CA 的临床意义，在以后的实验将进一步的研究。