层黏连蛋白α3亚基在胰腺癌组织中的表达及其与肝转移的关系

任培君 江月萍 周积晓 荆雪 董娴宁 周建蕊

1青岛大学附属医院消化内科,青岛 266000;2青岛大学附属医院病理科,青岛 266000

【提要】 回顾性分析82例行手术切除且病理证实为胰腺癌患者的临床资料,探讨层黏连蛋白α3亚基(LAMA3)在胰腺癌组织中的表达及其与肝转移的关系。结果显示,胰腺癌肝转移组LAMA3高表达率显著高于非肝转移组,肿瘤分化程度、病理分期及LAMA3表达水平与胰腺癌肝转移相关且是其独立危险因素。LAMA3高表达可能促进胰腺癌发生肝转移,LAMA3可作为一种潜在治疗靶点和预后标志物。

胰腺癌是一种高度致命的恶性肿瘤,确诊后的5年生存率仅为10%[1]。转移是胰腺癌患者死亡的主要原因,其中肝脏为最常见的转移部位,其次是腹膜、肺和胸膜等[2-4]。层黏连蛋白是由α、β和γ亚基组成的异三聚体分子,层黏连蛋白α3亚基(laminin subunit alpha 3,LAMA3)基因参与编码层黏连蛋白的α亚单位,从而调节细胞转移和机械信号传导,抑制肿瘤细胞的侵袭和转移[5-6]。LAMA3参与胃癌、并影响卵巢癌、皮肤癌、肺癌和膀胱癌等肿瘤的发生、发展,影响患者预后[7-11]。已有文献证实LAMA3在胰腺癌组织中表达升高[12-14],但LAMA3的表达与胰腺癌术后肝转移的关系尚不明确。本研究旨在探讨LAMA3在胰腺癌组织中的表达及其与肝转移的关系,为临床判断预后提供有效证据。

一、资料与方法

1．研究对象:收集2018年1月至2020年12月间青岛大学附属医院病理科存档的82例行手术治疗且术后病理证实为胰腺导管腺癌患者的石蜡标本。所有患者术前未行放、化疗。记录患者的性别、年龄、血清CEA和CA19-9水平、肿瘤大小、肿瘤分化程度、病理分期、是否淋巴结转移、有无脉管侵犯及神经侵犯等。本研究经青岛大学附属医院医学伦理委员会批准通过(QYFYWZLL27485),患者或其家属均签署知情同意书。

2．胰腺癌组织LAMA3蛋白表达检测:标本常规切片,采用免疫组织化学法检测胰腺癌组织LAMA3蛋白表达,严格按试剂盒说明书操作。鼠抗人LAMA3单克隆抗体购自美国Abcam公司,工作浓度1∶100。以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照,以胞质中出现黄色或棕褐色的颗粒样着色为LAMA3蛋白阳性表达。根据阳性细胞的染色强度和阳性细胞百分比进行评分:无染色为0分,染色呈淡黄色为1分,染色呈棕黄色为2分,染色呈棕褐色为3分;阳性细胞占比≤20%为0分,21%～50%为1分,51%～75%为2分,>75%为3分。两者相乘≥4分为LAMA3高表达,<4分为LAMA3低表达。

3．随访和分组:采用门诊就诊的方式进行随访。术后随访1年,随访至2021年12月31日。根据随访期内影像学检查结果有无肝转移瘤将患者分为肝转移组和非肝转移组。

二、结果

1．临床资料:82例患者中,男性50例,女性32例,年龄29～86(62.30±0.99)岁。血清CEA水平3.55(0.75～80.20)ng/ml,CA19-9水平104.95(0.63～2194.00)U/ml;肿瘤大小3.00(1.00～8.00)cm;肿瘤分化程度示高分化1例,中分化48例,中-低分化12例,低分化21例;病理分期示Ⅰ期35例,Ⅱ期38例,Ⅲ期6例,Ⅳ期3例;伴有淋巴结转移38例,脉管侵犯27例,神经侵犯65例。

2．胰腺癌肝转移与LAMA3蛋白表达及患者临床病理特征的关系:免疫组织化学染色结果显示,LAMA3在肝转移组胰腺癌组织中呈高表达(图1)。38例肝转移组患者中11例(28.9%)LAMA3呈高表达,44例非肝转移组患者中仅1例(2.3%)LAMA3呈高表达,肝转移组LAMA3高表达率显著高于非肝转移组,差异有统计学意义(χ2=11.614,P<0.05,表1)。临床病理特征分析发现,肿瘤大小、肿瘤分化程度及病理分期与胰腺癌肝转移显著相关(P值均<0.05),而性别、年龄、血清CEA水平、血清CA19-9水平、淋巴结转移、脉管侵犯及神经侵犯与胰腺癌肝转移无关(表1)。

表1 胰腺癌肝转移与患者临床病理特征及层黏连蛋白α3亚基蛋白表达的关系

图1 肝转移组胰腺癌组织(1A)和非肝转移组胰腺癌组织(1B)中的层黏连蛋白α3亚基表达(免疫组织化学 ×400)

3．影响胰腺癌肝转移的多因素分析:多因素logistic回归分析结果显示,肿瘤分化程度、病理分期及LAMA3高表达是影响胰腺癌肝转移的独立危险因素(表2)。

表2 影响38例胰腺癌肝转移的多因素分析

4．LAMA3高表达与胰腺癌肝转移患者病理特征的关系:LAMA3高表达与胰腺癌肝转移组患者的肿瘤大小、肿瘤分化程度、病理分期及淋巴结转移均无明显相关性(表3)。

表3 层黏连蛋白α3亚基高表达与胰腺癌肝转移组患者病理特征的关系[例(%)]

讨论LAMA3位于人的18号染色体上,包含76个外显子,2 665 624个碱基对,主要包括LAMA3A和LAMA3B两个转录本[15]。LAMA3编码层黏连蛋白并广泛存在于人体的各个器官中,参与调节细胞黏附和迁移,并通过高亲和力受体与细胞结合,从而间接促进和抑制肿瘤细胞的生长[16]。肿瘤组织中LAMA3的表达水平及其对患者预后的影响因癌症类型而异。研究发现,长链非编码RNA LINC00628通过招募甲基化酶促进LAMA3启动子甲基化,从而降低LAMA3在肺腺癌中的表达[9]。Tang等[10]研究发现,LAMA3在卵巢癌组织中表达水平低于正常组织,且LAMA3低表达卵巢癌患者预后比高表达患者差。已有研究证明LAMA3在胰腺癌组织中表达上调,且其过表达可促进癌细胞增殖、分化,从而影响胰腺癌患者的生存预后[12,15]。本课题组前期采用生物信息学方法也证实了LAMA3在胰腺癌组织中高表达,这表明LAMA3可能参与胰腺癌的进展过程。

肿瘤细胞从原始病灶脱落,穿过基底膜,侵入至血管或淋巴管,通过血流或淋巴扩散至远端器官最终形成继发性肿瘤[17]。层黏连蛋白332是基底膜屏障的关键成分,一旦LAMA3表达异常,层黏连蛋白332便无法合成,基底膜结构缺失不完整,为肿瘤发生血行转移提供有利的条件[18]。Huang等[14]探讨了LAMA3、LAMB3和LAMC2在胰腺导管腺癌恶性生物学行为中的作用,结果表明LAMA3不仅在肿瘤组织中高表达,且LAMA3对肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响更强。本研究分析了患者临床病理特征及LAMA3表达与胰腺癌肝转移的相关性,结果发现肿瘤分化程度、病理分期及LAMA3表达是影响胰腺癌肝转移的独立危险因素。LAMA3高表达的患者肝转移率高达91.7%(11/12),提示LAMA3高表达可能促进胰腺癌患者发生肝转移。除此之外,肿瘤分化程度越低,病理分期越晚的胰腺癌患者肝转移率越高。

Pan等[19]研究证实,随着胰腺癌病理分期的进展,LAMA3的表达呈渐进性增加。Chen等[12]研究也发现LAMA3的阳性表达与胰腺癌的分化、浸润深度和分期显著相关,这表明LAMA3可能通过相关机制在胰腺癌的进展过程中发挥重要作用。本研究进一步分析LAMA3高表达与胰腺癌术后肝转移患者病理特征的相关性,结果发现LAMA3高表达与患者的肿瘤大小、肿瘤分化程度、病理分期及淋巴结转移均无明显相关,这可能与本研究所纳入的肝转移组患者样本量少有关。未来仍需要多中心、大样本数据加以证实。

综上所述,LAMA3在胰腺癌组织中表达增高,其表达水平是影响胰腺癌患者发生肝转移的独立因素,LAMA3高表达可能促进胰腺癌患者发生肝转移。未来可通过检测胰腺癌组织中LAMA3的表达水平来预测胰腺癌患者的肝转移情况,对判断患者预后具有指导意义。

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