鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1株)灭活疫苗保存期试验研究

张俊平　蒋凤英　张春玲　王瑞阳　赵本进　丁卫星　杨惠萍　李春华

摘  要：为了确定鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗的保存期，对不同温度下保存不同时间的3批鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗实验室制品的物理性状、安全性和免疫效力进行了检测。试验结果表明，该疫苗冷藏（2～8 ℃）保存12个月、室温（25 ℃左右）保存6个月，其物理性状、安全性和免疫效力无明显变化，均能达到《鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗质量标准》的要求。因此，在《鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗制造及检验试行规程》中规定该疫苗的保存期为：冷藏（2～8 ℃）保存，保存期为12个月。

关键词：鸽Ⅰ型副黏病毒；灭活疫苗；保存期

中图分类号：S858.39 文献标志码：A        文章编号：1001-0769（2023）05-0073-04

鸽Ⅰ型副黏病毒（pigeon paramyxovirus 1，PPMV-Ⅰ）病俗称鸽瘟或鸽新城疫，是一种由禽Ⅰ型副黏病毒引起的、流行于鸽群的急性、热性、高度接触性传染病，以肠炎、严重腹泻和神经症状为特征，迄今为止，鸽新城疫仍然是严重危害养鸽业的主要病毒性传染病之一[1-4]。           Dortmans等[5]认为，PPMV-Ⅰ是适应了宿主鸽的新城疫病毒（Newcastle disease viruse，NDV）变异株。PPMV-Ⅰ与鸡的NDV具有一定的同源性，也有一定的血清学交叉反应，但PPMV-Ⅰ经在鸽体内传代，已适应鸽体内寄生和增殖，使PPMV-Ⅰ与鸡NDV在抗原性上有了很大差异，因此在使用新城疫疫苗免疫鸽群后，出现抗体水平不高，保护率低，免疫期短，不能完全抵抗强毒的攻击[6]。因此，分离、培育出免疫原性良好的毒株，研制出具有良好免疫原性的鸽Ⅰ型副黏病毒灭活疫苗，对预防该病至关重要[7]。本实验室在分离鉴定的基础上研制了鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗，并对疫苗进行了前期研究，现对该疫苗进行不同保存条件、不同保存时间的物理性状、安全性和免疫效力的测定，为鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗的保存期提供科学的理论依据。

1  试验材料

1.1 试验疫苗

鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗的批号分别为20200801、20200802和20200803，均由上海佳牧生物制品有限公司制备。按照《鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗制造及检验试行规程》制造和检验，符合要求。

1.2 试验仪器

TDZ4-WS低速自动平衡离心机购自上海卢湘仪离心机仪器有限公司；DVNXLVCJC黏度计购自美国博勒飞公司；DNP-9272电热恒温培养箱购自上海精宏实验设备有限公司；BPC-250F生化培养箱购自上海一恒科学仪器有限公司；SPF鸡隔离器购自苏州市冯氏实验动物设备有限公司。

1.3 培养基

硫乙醇酸盐流体培养基（fluid thioglycollate medium，TG）、胰酪大豆胨液体培养基（tryplic soy broth，TSB）、酪胨琼脂培养基（casein peptone agar medium，GA）均购自北京中海生物科技有限公司。

1.4 试验动物

30日龄非免疫银王幼鸽（HI抗体水平≤2log2）由上海申裕鸽业养殖专业合作社提供。

1.5 攻毒毒株

鸽Ⅰ型副黏病毒强毒株（川沙株E5代）由上海市农业科学院畜牧兽医研究所分离、鉴定和保存，病毒含量为107.5 ELD50/0.1 mL。

2  试验方法

2.1 试验方案设计

将鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗样本分别保存在冷藏（2～8 ℃）、室温（25 ℃左右）温度条件下，按以下时间点检测物理性状、安全性和免疫效力。

冷藏保存，分别在保存3、6、9、12、15个月后抽取样本进行检测；室温保存，分别在保存1、2、3、6、9个月后抽取样本进行检测。

2.2 疫苗物理性状检验

按现行《中华人民共和国兽药典》三部[8]中常规油乳剂灭活疫苗检验方法进行。

2.3 疫苗安全性检验

给10羽试验幼鸽分别接种在不同温度下保存不同时间的疫苗，每羽肌内注射疫苗   1.0 mL，觀察14 d，记录试验鸽的临床反应情况。

2.4 疫苗免疫效力检验

给10羽试验幼鸽分别接种下不同温度下保存不同时间的疫苗，每羽肌内注射疫苗      50 μL。接种后28 d，每羽采血，分离血清，进行HI抗体效价测定，统计抗体效价的几何平均值。

3  试验结果

3.1 鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗冷藏保存试验结果

实验室试制的3批（生产批号分别为：20200801、20200802、20200803）鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗冷藏保存12个月，疫苗的物理性状、安全性和免疫效力检验均合格；保存15个月，生产批号为20200802的疫苗免疫效力检验不合格。根据试验结果确定鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗冷藏保存期为12个月。具体试验结果见表1。

3.2 鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗室温保存试验结果

实验室试制的3批鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗室温保存6个月，疫苗的物理性状、安全性和免疫效力检验均合格，保存9个月的生产批号为20200802的疫苗经物理性状和免疫效力检验均不合格，根据试验结果确定鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗室温保存期为6个月。具体试验结果见表2。

4  分析与讨论

鸽Ⅰ型副黏病毒病是危害养鸽业的主要疾病之一，迄今尚无有效治疗药物，接种疫苗是预防该病的关键。尽管鸽副黏病毒与鸡新城疫病毒为同一属，但两种病毒在抗原性上有一定差异，在致病性上也有一定区别，许多报道表明，用现有的鸡新城疫疫苗接种鸽子虽具有一定的效果，但保护率并不理想[9-10]。因此，研制一种安全有效的鸽Ⅰ型副黏病毒灭活疫苗迫在眉睫。疫苗研制过程中疫苗保存期的确定是必不可少的环节。

本研究是在鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗前期研究的基础上，进行的不同保存条件、不同保存时间的鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗的物理性状、安全性和免疫效力检测，根据试验结果判定，疫苗冷藏（2～ 8 ℃）可保存12个月，室温（25 ℃左右）可保存6个月。考虑到实际生产及疫苗运输过程中存在很多影响因素，并且目前绝大部分生产、经营、使用单位都具备冷藏（2～8 ℃）保存条件。因此，将鸽Ⅰ型副黏病毒（S-1株）灭活疫苗保存期定为：冷藏（2～8 ℃）保存，保存期为12个月。

参考文献

[1] MARLIER D，VINDEVOGEL H．Viral infections in pigeons[J]．The Veterinary Journal，2006，172（1）：40-51.

[2] KIM L M，KING D J，GUZMAN H，et al．Biological and phylogenetic characterization of pigeon paramyxovirus serotype 1 circulating in wild North American pigeons and doves[J]．Journal of Clinical Microbiology，2008，46（10）：3303-3310.

[3] KALETA E F，ALEXANDER D J，RUSSELL P H．The first isolation of the PPMV-1 virus responsible for the current panzootic in Pigeons[J]．Avian Pathology，1985，14：553-557.

[4] （美）Y. M. 塞弗（SAIF Y M）主编．苏敬良，高福，索勋主译．禽病学[M]．第十一版．北京：中国农业出版社，2005：108-130.

[5] DORTMANS J C F M，ROTTIER P J M，KOCH G，et al．Passaging of a Newcastle disease virus pigeon variant in chickens results in selection of viruses with mutations in the polymerase complex enhancing virus replication and virulence[J]．Journal of General Virology，2011，92（Pt2）：336-345.

[6] 秦彤，劉小惠，崔奕杰，等．鸽Ⅰ型副黏病毒HT40克隆株的筛选及其生物学特性鉴定[J]．中国兽医杂志，2007，43（6）：11-12.

[7] 仇微红，叶贺佳，李敏，等．1株鸽新城疫病毒的分离、鉴定及生物学特性研究[J].养禽与禽病防治，2012（3）：7-10.

[8] 中国兽药典委员会．中华人民共和国兽药典2020年版三部[S]．北京：中国农业出版社，2021.

[9] 张淑霞，杨增歧，赵余放，等．鸽禽I型副粘病毒油佐剂灭活苗对肉种鸽免疫效果观察[J]．中国预防兽医学报，1999，21（3）：163-165.

[10] 古静，党安坤，兰邹然．鸽I型副黏病毒病研究进展[J]．中国兽医杂志，2019，55（1）：95-97.