HPV阳性宫颈癌组织中IGF2BP2和RPRD1B的表达水平及临床价值研究

沈 华，盛晓鹃（南通市海门区人民医院妇产科，江苏南通 226100）

宫颈癌是女性常见恶性肿瘤，全球每年新发患者例数达52万例，死亡达26万例[1]。高危型人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）DNA能整合入宿主细胞染色体，是导致宫颈上皮内瘤变及宫颈癌发病的重要病因[2]。胰岛素样生长因子2结合蛋白2(insulin-like growth factor2 binding protein 2，IGF2BP2)是一种能够结合胰岛素样生长因子2 mRNA并调节其翻译的蛋白质，在新陈代谢中起着重要作用。研究发现，结直肠癌[3]、肝癌[4]等肿瘤中存在IGF2BP2表达上调，其能够激活癌基因MYC的表达，促进肿瘤细胞增殖及转移。细胞核前mRNA结构域调节因子1B(regulation of nuclear pre-mRNA domain containing 1B，RPRD1B)能够结合RNA聚合酶II复合物，参与细胞周期的调控[5]。JIA等[6]发现，RPRD1B能够上调胆固醇调节元件结合蛋白1的表达，促进肿瘤细胞转移，导致胃癌等恶性肿瘤患者不良预后。目前HPV阳性宫颈癌中IGF2BP2，RPRD1B的表达及临床意义研究较少。本研究通过检测HPV阳性宫颈癌组织中IGF2BP2，RPRD1B的表达，探讨两者的临床预后意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集2018年1月～2019年1月于南通市海门区人民医院诊治的82例HPV阳性宫颈癌患者。纳入标准：①经病理检查确诊为宫颈癌，且HPV检测阳性持续一年以上；②初次诊治，既往无放化疗治疗；③临床资料完整，患者及家属对本研究知情同意并签字。排除标准：①并发泌尿生殖系统感染性疾病；②并发其他系统恶性肿瘤；③并发严重肝肾等脏器功能衰竭。年龄31～68（53.3±7.1）岁；病理类型：鳞癌48例，腺癌34例；肿瘤分化程度：高中分化39例，低分化43例；国际妇科联合会（the international federation of gynecology and obstetrics,FIGO）分期：ⅠA～ⅠB期36例，ⅡA期46例；肌层浸润：浅肌层41例，深肌层41例；并发淋巴结转移32例。选取同期诊治的41例HPV阴性宫颈癌患者为对照组，年龄30～69（52.7±6.9）岁。两组年龄之间无明显差异（t=0.446，P>0.05）。本研究经本院伦理委员会审核批准通过。

1.2 仪器与试剂 IGF2BP2兔单克隆抗体（Abcam公司，货号ab124930），RPRD1B兔单克隆抗体（美国CST公司，货号＃74693），PV6000免疫组化染色试剂盒（北京中杉金桥公司），石蜡切片机（德国徕卡公司），DM500光学显微镜（日本奥林巴斯公司）。

1.3 方法

1.3.1 免疫组织化学检测IGF2BP2，RPRD1B表达：留取HPV阳性组患者癌组织及癌旁组织，HPV阴性组癌组织，按照免疫组化染色试剂盒说明进行操作。IGF2BP2，RPRD1B一抗稀释比均为1∶50。镜下观察染色强度和范围，以染色强度评分（0：无染色，1：浅黄色，2：棕褐色）和染色面积评分（0：≤25%，1：25%～50%，2：≥50%）的乘积作为最终免疫组化染色评分，＜2分为阴性，≥2分为阳性。

1.3.2 随访：所有患者自病理确诊后开始随访，随访三年，第1年3个月随访一次，第2～3年6个月随访一次，随访方式为门诊或电话随访。随访内容为患者生存状态及生存时间。随访截止至2022年2月1日,随访终点为患者死亡或随访时间结束。

1.4 统计学分析 利用SPSS23.0软件进行统计分析。计数资料以率（百分比）[n（%）]表示，组间比较采用卡方检验。Spearman秩相关分析HPV阳性宫颈癌组织中IGF2BP2，RPRD1B蛋白表达的相关性。Kaplan-Meier生存分析IGF2BP2，RPRD1B蛋白表达对HPV阳性宫颈癌患者生存预后的影响。COX比例风险模型分析影响HPV阳性宫颈癌患者生存预后的因素。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 组织中IGF2BP2，RPRD1B蛋白表达 IGF2BP2蛋白棕褐色阳性染色主要位于细胞膜和细胞浆，RPRD1B蛋白棕褐色阳性染色主要位于细胞核。见图1。HPV阳性癌组织IGF2BP2蛋白阳性率为67.07%（55/82），高于HPV阴性癌组织9.76%（4/41）及癌旁正常组织6.10%（5/82），差异具有统计学意义（χ2=35.978，65.705，均P<0.05）。HPV阳性癌组织RPRD1B蛋白阳性率为70.73%（58/82），高于HPV阴性癌组织17.07%（7/41）及癌旁正常组织7.32%（6/82），差异具有统计学意义（χ2=31.582，69.290，均P<0.05）。

图1 组织中IGF2BP2，RPRD1B蛋白表达（免疫组化，200×）

2.2 HPV阳性癌组织中IGF2BP2与RPRD1B蛋白表达相关性 HPV阳性癌组织中IGF2BP2与RPRD1B蛋白表达呈显著正相关（r=0.717，P<0.05）。

2.3 IGF2BP2，RPRD1B蛋白表达与HPV阳性宫颈癌临床病理参数的关系 见表1。肿瘤FIGO分期ⅡA期、伴淋巴结转移HPV阳性宫颈癌组织中IGF2BP2，RPRD1B蛋白阳性率高于ⅠA～ⅠB期、无淋巴结转移组织，差异具有统计学意义（均P＜0.05）。

表1 IGF2BP2，RPRD1B蛋白表达与临床病理参数的关系[n（%）]

2.4 IGF2BP2，RPRD1B蛋白表达与HPV阳性宫颈癌患者生存预后的关系 见图2。随访中，死亡22例，失访1例，三年生存率为73.17%（60/82）。IGF2BP2阳性组和阴性组患者的三年生存率分别为65.45%（36/55），88.89%（24/27）。RPRD1B阳性组和阴性组患者的三年生存率分别为65.52%（38/58），91.67%（22/24）。IGF2BP2阳性组和RPRD1B阳性组患者三年累积生存率分别低于IGF2BP2阴性组和RPRD1B阴性组，差异具有统计学意义（Log Rankχ2=6.487，5.192，P<0.05）。

图2 Kaplan-Meier生存曲线分析HPV阳性宫颈癌组织IGF2BP2，RPRD1B蛋白表达与预后的关系

2.5 单因素及多因素COX比例风险回归分析影响HPV阳性宫颈癌患者生存预后的因素 见表2，3。以HPV阳性宫颈癌患者预后作为因变量（0=存活，1=死亡，t=时间），单因素及多因素COX比例风险模型分析结果，FIGO分期ⅡA期、并发淋巴结转移、IGF2BP2阳性、RPRD1B阳性是影响HPV阳性宫颈癌患者预后的独立危险因素。

表3 多因素COX比例风险模型

3 讨论

宫颈癌是我国女性常见恶性肿瘤，近年来其发病有年轻化的趋势，严重威胁女性健康。HPV感染是宫颈癌发病的重要危险因素，我国女性HPV感染亚型多为16，18，52和53[7]。持续的高危型HPV感染能够导致宫颈癌前病变的发生，最终发展为宫颈癌。深入研究HPV阳性宫颈癌发生发展的分子机制，寻找新的肿瘤标志物，对疾病早期诊治，具有较大的临床意义。

胰岛素样生长因子2结合蛋白2(IGF2BP2)是胰岛素生长因子2 mRNA结合蛋白家族成员，参与调节mRNA亚细胞定位、稳定性和翻译[8]。研究表明，IGF2BP2在胰腺癌[9]、前列腺癌[10]等癌症中过度表达，其作为N6甲基腺苷阅读器，通过K同源性结构域识别具有GGC序列，调控基因表达，促进肿瘤恶性进展。本研究中，HPV阳性宫颈癌中IGF2BP2表达升高，与FIGO分期、淋巴结转移有关，提示IGF2BP2参与HPV阳性宫颈癌的疾病发生发展。IGF2BP2的表达上调与HPV病毒感染有关。HU等[11]学者报道，HPV DNA编码E6/E7蛋白能够在转录水平上调宫颈癌细胞中IGF2BP2的表达，IGF2BP2促进癌基因MYC mRNA的N6甲基腺苷修饰及蛋白表达，促进肿瘤细胞糖酵解的发生，导致肿瘤过度增殖和转移。研究发现，结直肠癌等恶性肿瘤中IGF2BP2作为一种促癌基因，通过促进受体酪氨酸激酶2 mRNA的N6甲基腺苷修饰，增加ErbB2 mRNA的稳定性及蛋白表达，促进肿瘤细胞增殖、侵袭，抑制肿瘤细胞的凋亡发生[12]。因此，IGF2BP2作为一种促癌因子，参与促进宫颈癌肿瘤恶性进展。本研究中，IGF2BP2阳性表达患者生存预后较差，表明检测IGF2BP2表达有助于评估HPV阳性宫颈癌患者临床预后。笔者分析，IGF2BP2的表达可能是通过影响化疗治疗的敏感性，导致患者不良预后。JIANG等[10,13]报道，IGF2BP2能够上调肿瘤细胞中转录因子c-myc的表达，c-myc通过增强乳酸脱氢酶A的活性，促进肿瘤细胞对多西他赛、顺铂等化疗药耐药性形成，肿瘤易发生复发和转移，导致不良预后。尚有学者在T细胞急性淋巴细胞白血病中发现，应用IGF2BP2的小分子抑制剂JX5或敲除肿瘤细胞中IGFBP2的表达后，能够显著抑制肿瘤细胞的增殖，增强肿瘤对化疗治疗的敏感性，以IGF2BP2为靶点的临床治疗有助于逆转肿瘤耐药，改善患者临床预后，是潜在的新的肿瘤治疗方案[14]。

细胞核前mRNA结构域调节因子1B(RPRD1B)编码基因位于人类20号染色体，能结合并激活RNA聚合酶II复合物，参与DNA损伤修复，RNA转录及蛋白质翻译等生物学过程[15]。研究表明，RPRD1B作为一种致癌因子，能够促进细胞周期素D1的表达，加速肿瘤细胞G1期向S期的转换，导致肿瘤过度增殖[16]。本研究中，HPV阳性宫颈癌组织中RPRD1B表达升高，并与FIGO分期、淋巴结转移有关，提示RPRD1B参与HPV阳性宫颈癌的疾病发生发展。WEN等[17]学者报道，HPV DNA编码产生的E6/E7蛋白能够诱导宫颈癌细胞中RPRD1B的表达，并在宫颈癌组织标本中证实E6/E7蛋白与RPRD1B蛋白表达具有较强的正相关性。肿瘤中RPRD1B的表达升高能够促进肿瘤的增殖和侵袭，导致肿瘤恶性进展。研究发现，RPRD1B能够促进肿瘤细胞中信号转导子和转录激活子3的磷酸化激活，招募p300结合到细胞周期素D1的启动子区域，促进细胞周期素D1的表达，诱导肿瘤过度增殖[18]。另外，肿瘤中RPRD1B的表达上调还能够促进β-连环蛋白/转录因子4转录复合体的形成，激活下游Wnt/β-连环蛋白信号通路，诱导肿瘤细胞由上皮性表型向间质性表型转化，增强肿瘤细胞的迁移和侵袭能力，导致肿瘤转移[19]。本研究中，RPRD1B阳性表达的HPV阳性宫颈癌患者生存预后较差，是影响患者不良生存预后的独立危险因素。分析其原因，一方面是RPRD1B阳性表达的HPV阳性宫颈癌肿瘤恶性程度高，肿瘤增殖及侵袭能力强，术中肉眼难以分辨的微小转移灶不易被彻底手术切除，肿瘤术后复发转移风险较高，患者临床预后较差。另一方面，有学者在胰腺癌中发现，RPRD1B能够增强肿瘤细胞对吉西他滨等化疗药的耐药性，导致患者较差的总体生存和无进展生存预后，而敲除肿瘤细胞中RPRD1B 的表达后，肿瘤细胞重新恢复了其对化疗药物治疗的敏感性[20]。因此，RPRD1B是新的HPV阳性宫颈癌患者预后相关肿瘤标志物，以RPRD1B为靶点的治疗是一种潜在的抑制肿瘤增殖、侵袭，增强肿瘤化疗敏感性的治疗方案，值得临床和基础进行深入研究。本研究中，HPV阳性宫颈癌组织中IGF2BP2与RPRD1B蛋白表达呈明显正相关，提示两者在HPV阳性宫颈癌中可能存在协同的作用关系。笔者认为，宫颈癌中IGF2BP2与RPRD1B均受到HPV病毒编码产生的E6/E7蛋白的表达调控，IGF2BP2主要在转录水平调控下游癌基因如c-myc mRNA稳定性，而RPRD1B蛋白主要在蛋白水平调控RNA 翻译和蛋白表达，两者通过激活下游细胞信号传导，促进宫颈癌细胞的恶性增殖和转移[11,17]。但HPV阳性宫颈癌中IGF2BP2与RPRD1B的具体相互作用机制尚不清楚，有待深入的实验研究进一步探索。

综上所述，HPV阳性宫颈癌中IGF2BP2，RPRD1B蛋白表达升高，两者与肿瘤FIGO分期、淋巴结转移有关，共同促进HPV阳性宫颈癌的肿瘤进展。IGF2BP2阳性，RPRD1B阳性是影响HPV阳性宫颈癌患者预后的独立危险因素。临床上，医生可根据IGF2BP2，RPRD1B蛋白表达，对HPV阳性宫颈癌患者的预后进行预测，对于不良预后的高危患者予以积极诊治及随访，改善临床预后，实现肿瘤的个体化治疗。但本研究也有不足之处，本研究是单中心研究，纳入的样本含量较小，结果可能存在一定的偏倚，有待今后设计多中心、多地区的临床实验，进一步研究IGF2BP2，RPRD1B的临床应用价值。