473例疑似新生儿溶血病患儿应用微柱凝胶试验诊断新生儿溶血病的价值探讨

孙 颖，裴倩云，赵丹妹

南京市高淳人民医院，江苏 南京 211300

新生儿溶血病指母婴血型不合，母体血型抗体经胎盘进入胎儿体内，与胎儿血型抗原不相合而引起抗原抗体结合，造成红细胞破坏，导致免疫性溶血[1]。本病以ABO 血型不合最为常见，占比约85%～90%，另有RH 血型不合，鲜见MH 血型不合，仅占0.1%。统计数据显示，母婴ABO血型不合约占全部分娩的20%～30%，是新生儿溶血病的潜在风险人群[2]。新生儿溶血病是导致新生儿黄疸的主要原因，多数发生于新生儿出生48 h内，另可见贫血、肝脾肿大，重者或伴水肿、心力衰竭等症，危及健康甚至引起死亡[3]，因此，早期确诊新生儿溶血病并予以有效治疗十分必要。产前诊断可以预测新生儿溶血病的发生，便于产后早期监测及干预治疗，以减轻病变程度，但受多种因素影响，产前检出率并不十分理想，多数新生儿于产后通过实验室检查获得明确诊断[4]。溶血试验是诊断新生儿溶血病的主要方法，即通过鉴定母婴血型抗体明确有无不合。目前，临床可行血型鉴定方法诸多，其中微柱凝胶法凭借敏感性高、操作简单等技术优势在溶血试验中得到广泛使用。本研究择取样本医院近年收治疑似新生儿溶血病473例病例，分析探讨微住凝胶技术用于新生儿溶血病试验诊断中的临床价值，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020年1—12月南京市高淳人民医院接受溶血试验的473 例疑似新生儿溶血病的新生儿作为研究对象，均为住院病例。男244 例，女229 例；年龄1～6 d，平均年龄（1.07±0.51）d。部分明确诊断病例：上呼吸道感染10 例；新生儿肺炎17 例；早产儿14 例；胃—食管反流性疾病5例；败血症3 例；糖尿病母亲的婴儿综合3 例；新生儿窒息2 例；胎粪吸入综合征1 例；少尿1 例；新生儿肠炎1例；其余均存在高胆红素血症402例。

1.2 方法

1.2.1 标本来源 依据《临床检验操作规程》要求进行取样，每例新生儿采集不抗凝静脉血3 mL、EDTA 抗凝全血2 mL，样本均无严重溶血、无脂血及无纤维蛋白存在。

1.2.2 仪器与试剂 ABO、Rh（D）血型定型检测卡、新生儿溶血病胎（婴）儿不完全球检测卡，微柱凝胶法，六微柱孔/卡，国械注（准）字20193401730 号，购自长春博讯生物技术有限公司，其中ABO、Rh（D）血型定型检测卡含抗A、抗B、抗D 各1 孔、空白凝胶管3 孔，新生儿溶血病胎（婴）儿不完全球检测卡，6 孔一致，主要成分为凝胶、抗-IgG 抗体、抗-IgM 抗体、抗-C3d 抗体等；0.8%标准ABO 反定型红细胞悬液， 国械注（准） 字20163402334 号，购自长春博讯生物技术有限公司；BX-1型样本释放剂，主要成分为放散液A（甘氨酸）、放散液B（乙二胺四乙酸二钠）、中和液（三羟甲基氨基甲烷）等，吉长食药监械备20150014号；贝索血清学离心机；微柱卡孵育器；微柱卡专用离心机；水浴箱。

1.2.3 检测操作 依照试剂说明书要求及实验室标准规程方法进行新生儿血型测定及新生儿溶血病试验检测，检测指标包括ABO 血型、RH（D）血型、游离抗体、释放抗体、直接抗人球蛋白、间接抗人球蛋白。ABO血型、RH（D）血型检测：标记血型检测卡，将样本配置成0.8%红细胞悬液，充分摇匀，6 个微孔分别加入红细胞悬液、血浆及标准ABO 反定型红细胞悬液各50 μL，使用专用离心机离心5 min，取出后判定血型检测结果。游离抗体、释放抗体：将EDTA 抗凝全血2 mL离心，收集所有红细胞，用生理盐水洗涤标本6 次，去上清制备成压缩红细胞，以酸放散法制备放散液。标记抗人球蛋白检测卡，前3 孔各滴加新生儿血浆50 μL，后3 孔各滴加放散上清液50 μL，A、B、O 型红细胞悬液分别滴入1 孔和4 孔、2 孔和5 孔、3 孔和6 孔。检测卡置入微柱卡孵育器恒温37 ℃孵育15 min，使用专用离心机离心5 min，肉眼判读结果，前3 孔为游离抗体结果，后3 孔释放抗体结果。直接抗人球蛋白：将样本红细胞用生理盐水洗涤3 遍，用压积红细胞10 μL 悬浮于1 mL 生理盐水中，稀释成0.8%浓度，检测卡做好标记，将50 μL 红细胞悬液加入微管中，使用专用离心机离心5 min，肉眼观察结果。间接抗人球蛋白：将准备好的检测卡做好标记，将50 μL 的0.8%O 型红细胞悬液分别加入微管中，同时加入50 μL 待检者血浆加入微管中，检测卡置于孵育器中37 ℃孵育15 min，使用专用离心机离心5 min，取出检测卡，肉眼观察结果。

1.3 观察指标与评价标准

观察新生儿ABO 血型与RH（D）血型，统计游离抗体、释放抗体、直接抗人球蛋白、间接抗人球蛋白阳性率。观察不同ABO血型新生儿溶血试验指标结果，统计溶血病检出率以及溶血病患儿试验阳性结果分布。溶血试验评价标准[5]：红细胞抗原与相应抗体结合成特异性抗原抗体复合物，悬浮于微柱凝胶中或漂浮于上层——阳性；红细胞沉于微柱凝胶管底，凝胶介质中未见特异性抗原抗体复合物——阴性。新生儿溶血病诊断标准[6]：释放抗体阳性，或联合游离抗体和（或）直接抗人球蛋白阳性，均确诊新生儿溶血病；游离抗体阳性联合直接抗人球蛋白阳性，确诊新生儿溶血病；游离抗体、直接抗人球蛋白任一阳性，释放抗体阴性，可疑新生儿溶血病，结合临床症状综合分析；三项指标均呈阴性，排除新生儿溶血病。注：游离放散阳性结果必须是针对新生儿ABO 血型抗原的IgG抗体。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0 软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验。计数资料以例数和百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 新生儿血型检测结果

473 例新生儿中，O 型血占比最高，共168 例；占比35.52%；A型血次之，共167例，占比35.31%；B型血127例，占比26.85%；AB 型血占比最低，共11 例，占比2.33%；RH（D）均呈阳性。

2.2 新生儿溶血试验结果

473 例新生儿溶血试验结果显示，游离抗体阳性97例，阳性率20.51%；阳性（+）29例，占比29.90%，弱阳性（±）68 例，占比70.10%。释放抗体阳性156 例；阳性率32.98%；阳性（+）122 例，占比78.21%；弱阳性（±）34 例，占比21.79%。直接抗人球蛋白阳性6 例，阳性率1.27%，均为阳性（+）。间接抗人球蛋白阳性2 例，阳性率0.42%；阳性（+）1例，占比50.0%；弱阳性（±）1例，占比50%。

2.3 473例新生儿溶血试验检测结果分布情况

经统计，确诊新生儿溶血病156 例，排除312 例，疑似5 例，新生儿溶血病检出率32.98%。其中，三项指标均为阳性的6 例新生儿中，有2 例间接抗人球蛋白呈阳性，即4项指标均呈阳性。

2.4 不同血型新生儿溶血试验结果分布

统计显示，血型为A 型、B 型、O 型、AB 型新生儿溶血病检出率分别为53.89%（90/167），53.28%（65/122）、0.60%（1/168）和0%（1/11）。A型血和B型血新生儿溶血病检出率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），均高于O型血和AB 型血新生儿溶血病检出率，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 不同血型新生儿溶血试验结果分布 例

3 讨论

对于血型不合的母亲和婴儿，胎儿红细胞经胎盘血循环进入母体，会刺激母体产生相应的IgG 类免疫性抗体，母体循环作用下，抗体反作用于胎儿红细胞，即会引起新生儿溶血病[7-8]，导致黄疸、贫血、水肿等相关并发症，此类情况也可见于胎儿从父亲方继承了母体所没有的红细胞抗原的情况[9]。

血清学检测是临床诊断新生儿溶血病的重要手段。既往，临床主要采用试管法测定指标，但此法需要反复洗涤红细胞，操作耗时长，过程繁琐，易受人为因素影响，质量控制较为困难，影响诊断准确性[10]。微柱凝胶法是近年用于新生儿溶血病血清学诊断中的检测技术[11]，技术原理为：以凝胶作为检测卡填充物，与血型血清学抗体特异性结合，如未发生抗原反应，未凝集红细胞在离心作用下通过凝胶沉积于管底，反之，凝集红细胞不能通过凝胶而在其中游离或留在凝胶上层[12]。微柱凝胶法敏感性高，可以检测微弱的抗原抗体结合反应，灵敏度与特异度更高，是经研究证实新生儿溶血病检出率高于试管法的有效溶血试验诊断手段[13]。

本研究统计显示，血型为A 型、B 型的新生儿容易发生溶血病，检出率分别为53.89%、53.28%。同时发现1 例母亲血型为A 型，2009 年因卵巢畸胎瘤行左侧卵巢切除术，异常子宫出血输血治疗，后查出血清中抗E 抗体阳性，2021年生产，患儿血型为A 型，出生后即出现新生儿高胆红素血症，对母婴两者的血液进行不规则抗体检查，发现结果均为阳性，存在IgG 类抗体抗-E，当新生儿E 抗原阳性，即发生RH系统的溶血。RH血型是复杂的且具有多态性血型系统， RH 血型新生儿溶血病较ABO 溶血起病急，溶血程度高，病情较重，而RH 血型系统除D 外，其他抗原临床一般不开展，认识及重视均不足，易被忽略。因此，对于有输血史、妊娠史、流产史的孕妇及其婴儿，应开展不规则抗体检查，帮助发现其他血型系统抗体引起的新生儿溶血病[14-15]。本研究基于微柱凝胶技术对473 例疑似新生儿溶血病新生儿进行溶血检测，确诊新生儿溶血病156 例，为溶血病病临床诊断和治疗提供了重要的实验室依据。

综上所述，微柱凝胶法是进行新生儿溶血试验检测的有效手段，能够快速准确检出新生儿有无溶血病，操作简单、敏感性高，便于临床及时有效防治，以改善新生儿预后。