壮药净癣洗剂提取工艺研究

韦振源,钟 江,龚敏阳

(广西中医药大学第一附属医院·广西 南宁 530023)

壮药净癣洗剂是广西中医药大学第一附属医院皮肤科广西名中医钟江教授的临床应用验方,主要用于治疗足癣、手癣、头癣、体癣等癣类皮肤科疾病,临床应用已超过10 年,临床疗效达90.8%,且无明显不良反应[1]。壮药净癣洗剂以土荆皮、功劳木、蛇床子、白鲜皮、地肤子、苦参、广藿香等中药组方而成,具有清热解毒、消炎止痛、消肿杀虫止痒等功效,尤宜于皮肤病渗出期不宜使用外用药膏的阶段。

本文对壮药净癣洗剂提取工艺的研究釆用正交试验设计,以干浸膏回收率作为评价指标,对其提取时间、提取次数、加水量等3 个主要影响因素进行了提取工艺优化,确定了最佳制剂煎煮提取工艺;旨在规范净癣洗剂的提取制备工艺,提供可靠的试验依据,该制剂的规范化生产和后期的药学试验奠定基础。

1 实验材料

1.1 试药 土荆皮(批号:20190208)、蛇床子(批号:20190312)、功劳木(批号:20190421)、白鲜皮(批号:20190225)、地肤子(批号:201900427)、苦参(批号:201900318)、广藿香(批号:201900504)等7 味药材:由广西仙茱中药科技有限公司提供,经广西中医药大学第一附属医院杨正腾教授鉴定符合《中国药典》2015年版一部各品种项下标准。

1.2 仪器 300 L可倾式夹层锅:武穴富朝化工设备有限公司;JH-100 酒精回收塔: 湖南衡阳市金一帆制药设备实业有限公司;WT600F蠕动泵: 保定雷弗流体科技有限公司;YS7114三相感应电动机:文登市磊元电机厂;DG-1500A电磁感应铝箔封口:桂林大广电子科技有限公司。

2 方法与结果

2.1 提取工艺的选择 壮药净癣洗剂为广西中医药大学第一附属医院皮肤科临床验方,传统使用方法为水煎煮后药液外洗患处,因此本文应用传统工艺水煎煮提取。由于方中的蛇床子和广藿香含有较多的挥发性有效成分,在一人一方煎煮时应后下以尽量避免挥发性有效成分损失。在制剂生产中,因浓缩工艺,使大量挥发性有效成分随蒸汽蒸发而损失。因此,提取工艺对蛇床子和广藿香先进行提取蒸馏液(芳香水),提取药渣留用。

2.2 提取蒸馏液时间的考察 准确称取蛇床子400 g、广藿香200 g,加入圆底烧瓶中,加适量(约2 倍量)水,提取蒸馏液3 h,每半小时收集1 次蒸馏液,共收集6 次,通过测量体积、鼻嗅的方法,分别对收集好的6 次蒸馏液进行评估。结果,前1 h提取的蒸馏液,芳香性浓郁,后2 h提取的4 瓶蒸馏液,随着提取时间的延长,芳香性减弱,再综合实际成本,最终确定蒸馏液提取的时间为 1 h。见表 1。

2.3 正交实验设计 根据单因素试验结果,采用正交试验法[2],以煎煮提取时间、药材加水量和提取次数为考察因素,各选3 水平进行 L9(34)试验, 因素及水平表见表2。

表2 水提取因素水平表

2.4 指标的确定 考虑到本处方为复方多成分作用的特点,因此采用干膏收率作为量化指标进行综合评分, 优选出最佳煎煮提取条件。

2.5 样品的制备 按壮药净癣洗剂处方比例准确称取3/10倍药材量:土荆皮60 g、蛇床子60 g、功劳木60 g、白鲜皮40 g、地肤子60 g、苦参60 g,广藿香30 g,共 370 g,称取 9 份。以上7 味, 蛇床子、广藿香先提取蒸馏液1 h,水溶液和药渣另器保存;其余5 味,加入提取蒸馏液后的蛇床子、广藿香药渣,按表2 正交试验安排 9 次试验,合并煎液及蒸馏后的水溶液,滤过,浓缩至约300 mL,转入500 mL量筒中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀。精密量取25 mL样品至已干燥的恒重蒸发皿内,水浴,蒸干,残渣置于烘箱内保持 105 ℃进行干燥3 h,后立即转至干燥器内进行冷却30 min。冷却后迅速进行精密称定重量,并计算干浸膏得率。

2.6 干浸膏收率测定 精密量取 25 mL至已干燥至恒重的蒸发皿内,水浴蒸干,残渣于烘箱 105 ℃干燥3 h,立即置干燥器内冷却30 min,迅速精密称定重量,按下式计算干浸膏得率。

干膏率=(干膏质量×20)/370×100%。

2.7 试验结果 正交试验结果见表3,方差分析结果见表4。

表3 正交试验结果

表4 方差分析表

由表3直观分析可知,各因素对水煎煮提取工艺的影响顺序为 C(提取次数)>A(加水量)>B(提取时间)。方差分析表明因素 C(提取次数)对水提取工艺有显著影响,因素 A(加水量)和 B(提取时间)对水提取工艺的影响均不显著,故理论上水提工艺最佳条件为:A3B2C3。结合表 3 各因素 K 值进行分析,因素 C 尽管煎煮 3 次时 K 值(K3)最大,但是与煎煮 2 次的 K 值(K2)相差不大;因素 A 尽管加水量为 10 倍时的 K 值(K3)最大, 但是与加水量为 8 倍时的 K 值(K2)相差不大。因此,从节约能耗和生产效率上考虑,确定净癣洗剂的最佳水提取工艺条件为A2B2C2,即:药材加 8 倍量水,提取 2 次,每次提取 1 h。

2.8 验证试验 为了进一步验证提取工艺的稳定性与可靠性,按处方比例称取1 倍量同批次药材,共 1 233 g,称取 3 份。按“2.5 项”下方法操作,水提工艺条件为:药材加8 倍量水提取2 次,每次提取1 h。合并煎液及蒸馏后的水溶液,滤过,滤液浓缩至1 000 mL,测定干浸膏收率。干膏率分别为15.21%、15.30% 和15.26%。由此可知,按最佳工艺条件进行水煎煮提取,其干膏率均处于较高水平,表明该工艺合理,稳定可行。提取工艺最终确定为:土荆皮、功劳木、白鲜皮、地肤子、苦参5 味药材,加入提取蒸馏液后的蛇床子、广藿香药渣,加8 倍量水煎煮2 次,每次1 h。

3 讨论

对手足癣的治疗,目前临床上广泛应用的西药有局部使用水杨酸、苯甲酸等角质剥脱剂,口服或外用唑类和丙烯胺类抗真菌药物等[3]。但是在临床使用上,由于抗真菌药的副作用、价格、易耐药、易复发等问题,使中医药治疗越来越受到关注。

净癣洗剂是由土荆皮、功劳木、蛇床子、白鲜皮、地肤子、苦参、广藿香等中药组成的广西中医药大学第一附属医院验方,具有清热解毒、散瘀消肿、祛风燥湿、杀虫止痒的功效[1],主要用于足癣、手癣、头癣、体癣、股癣、花斑癣、皮肤念珠菌等,在临床上应用时间较长,治疗效果显著。方中土荆皮具有祛风除湿、杀虫止痒的功效;研究表明土荆皮对红色毛癣菌有强烈的抑制作用[4];土荆皮内存在广泛的具抗菌活性的内生真菌,是潜在的抗真菌药物的重要资源[5-6]。功劳木具有清热燥湿、泻火解毒的功效;功劳木的化学成分主要是生物碱类[7],具有抗菌、消炎、抗病毒、抗癌等作用[8],实验显示十大功劳属植物无水甲醇溶液提取物具有抑菌活性[9]。蛇床子性温,味苦辛,功能杀虫止痒燥湿;实验研究明确测定了蛇床子多种皮肤癣菌有显著抑菌作用[10];挥发油有体外抗组胺作用[11];蛇床子素有较好的抗炎作用[12];挥发油有较强促透能力[13],在本方中蛇床子可以促进其他药物渗透入皮肤,更好的发挥药效。白鲜皮清热解毒、祛风燥湿,行于肌肤,实验研究结果显示,白鲜皮水浸剂对红色毛癣菌、须癣毛癣菌等皮肤癣菌均有不同程度的抑菌作用[14];减少炎症介质释放,减轻人体瘙痒感[15]。地肤子清热除湿止痒,实验证实地肤子水提液可以抑制多种皮肤癣菌;能提高模型致痒阈,具有抗炎、抗过敏的效用,还可以抑制多种真菌[16]。苦参清热燥湿、杀虫止痒,体外抑菌实验表明苦参有明显的抑菌作用[17]、抗菌作用[18];另外也有较强的抗炎作用,减少局部渗出[19]。藿香芳香化浊,对皮肤癣菌的生长繁殖可以选择性地完全抑制,中国广藿香油的活性最强[20],广藿香油能抑制多种真菌,研究表明广藿香油对皮肤癣菌可以选择性抑制作用。诸药合用,很好地发挥清热解毒、消炎止痛、杀虫止痒等功效,使皮肤受热均匀、腠理疏通,气血流畅,从而达到治疗的目的。尤其是在皮肤病渗出期不宜使用外用药膏阶段,可使用净癣洗剂收敛杀菌,提高临床治愈率,降低复发,值得临床推广应用。

中药外用洗剂具有制备工艺简单,设备要求不高,局部作用显效迅速、不良反应少、生物利用度较高等特点,是常见的医院制剂剂型。净癣方源自临床应用验方,以液体制剂外洗患处。患者自行煎药,有效部分提取不完全,质量难以稳定,既影响到方药充分发挥作用,也造成药材浪费等缺点。净癣洗剂方传统使用方法为水煎煮后药液外洗患处,因此本文应用传统工艺水煎煮提取。由于方中的蛇床子和广藿香含有较多的挥发性有效成分,在一人一方煎煮时应后下以尽量避免挥发性有效成分损失。

正交设计是一种高效、快速的多因素试验设计方法,可用最少的试验次数筛选出最佳试验条件。本实验采用3 水平4 因素的正交实验,以干浸膏收率为评价指标对制备工艺进行优化。优化提取工艺条件加8 倍量水,提取2 次,每次1 h,结合最佳工艺验证实验以及中试产品生产实验表明,正交实验优选煎煮提取工艺条件合理、稳定,工艺条件较易控制,具有良好的连续性、稳定性,可操作性强,应用设备为普通常用生产设备,符合壮药净癣洗剂大生产实际需要,可满足临床患者获得稳定保质的用药需求。