系统性红斑狼疮女性患者IgG N-糖基与红细胞分布宽度的关联性研究

卢新霞 王连高 王英杰 张玉静 李 翔 张 芸 李 栋 潘相鹏

1. 山东第一医科大学（山东省医学科学院）公共卫生与健康管理学院，山东 济南 250117；2. 泰安市泰山区疾病预防控制中心，山东 泰安 271001

红细胞分布宽度（red blood cell distribution width，RDW）是血常规检测中的一项基础指标，临床上用于反映红细胞体积的异质性程度，即红细胞体积大小的变异程度，常用于不同类型贫血的鉴别诊断[1］。RDW被证明与心血管疾病、癌症以及肝脏疾病有着密切联系[2-4］，同时RDW 与自身免疫性疾病的诊断及病情变化紧密相关，如强直性脊柱炎、类风湿性关节炎及系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）等[5-8］。SLE 是涉及全身多个系统与器官的一种自身免疫性疾病，患者RDW 水平与疾病的病情活动度及诊断结果存在联系，与患者是否贫血无关，表明RDW 对SLE 的诊断与病情评价的应用价值是巨大的[9］。

糖基化是生物学中蛋白质被翻译后修饰的一种机制，通过改变蛋白质的生物学功能，进而影响90%的哺乳动物蛋白的表达[10］，异常的糖基化会导致某些特定疾病的发生[11］。IgG 的糖基化结构对IgG 的功能具有很大的影响，其Fc 段的结构可以被IgG Fc 段连接的糖基结构的微小变化所影响，进而导致IgG 的分子功能发生改变甚至发生逆转[12］，异常的IgG N-糖基化会引起免疫学变化，介导机体抗炎和促炎反应的改变[13］。有研究显示，IgG N-糖基与自身免疫性疾病、神经退行性疾病、慢性非传染疾病及癌症等疾病的发生与发展存在关联，可作为疾病的潜在生物标志物[14-17］。本研究拟通过检测341 例SLE 女性患者的IgG N-糖基水平与RDW 水平，并探讨二者之间的关联性，为后续二者作为SLE联合标志物的研究提供理论基础。

1 对象与方法

1.1 研究对象

本研究以2018 年10 月—2020 年5 月在山东省聊城市人民医院风湿免疫科门诊确诊及住院的SLE患者作为研究对象，共纳入女性患者341例，所有研究对象均符合纳入排除标准，且所有研究对象均为自愿参加并签署知情同意书。纳入标准：符合美国风湿病学会1997年修订的系统性红斑狼疮诊断标准[18］，并具有明确的系统性红斑狼疮的诊断结果，且由2名副主任医师及以上级别的专科医师确诊。排除标准：（1）患有其他自身免疫性疾病，如强直性脊柱炎、干燥综合征等；（2）患有其他严重系统性疾病，如癌症、心脑血管疾病等；（3）数据信息不全者。

1.2 研究方法

1.2.1 基本信息收集 由经统一培训的调查人员对研究对象进行基本资料收集，采用杠杆秤测量研究对象的身高（cm）和体质量（kg），测量时研究对象赤足并脱去衣帽，结果分别精确到1 cm和0.1 kg，计算身体质量指数（body mass index，BMI）。由专业护理人员对研究对象进行晨起空腹外周静脉血液的采集，并进行血常规检查（含RDW指标）。使用乙二胺四乙酸二 钠（ethylenediaminetetraacetic acid disodium，EDTA）真空采血管采集研究对象晨起空腹肘部外周静脉血液样本5 mL 用于IgG N-糖基水平的检测与分析，采用低温离心机（4℃，3 000 r/min）离心10 min，收集上层血浆，并置于-80℃低温冰箱中保存备用。

1.2.2 IgG N-糖基水平检测方法 研究采用Waters ACQUITY 超高效液相色谱（ultra-high performance liquid chromatography，UHPLC）仪器通过超高压液相色谱技术对IgG N-糖基水平进行高通量检测。该方法简要流程为：（1）采用96孔Protein G提取板对血浆IgG进行分离纯化；（2）采用N-糖苷酶（N-glyeosidase F）释放与IgG结合的N-糖链；（3）采用2-氨基苯甲酰胺（2-Aminobenzamide，2-AB）进行荧光标记；（4）通过超高效液相色谱进行分离及检测分析。最终可以得到24个色谱峰（GP1-GP24），每个峰可代表一种或多种糖基化结构，IgG N-糖基水平可用各个色谱峰的面积占所有色谱峰面积之和的百分比表示。

1.3 统计学处理

使用SPSS 25.0统计软件进行统计分析。采用单样本K-S 检验对计量数据进行正态性检验，正态分布资料使用均值 ± 标准差表示，非正态资料采用中位数和四分位数间距表示，定性资料使用n（%）表示。将SLE 女性患者根据RDW 水平的四分位数（Q1= 12.75，M= 13.30，Q3= 14.60）分为Q1 ~ Q3（≤ 14.60%）与Q4（ > 14.60%）2组，2组间计量资料比较采用两独立样本t检验或Mann-WhitneyU秩和检验，计数资料采用χ2检验。相关性分析采用Spearman 秩相关分析，采用Logistic 回归分析进行RDW 水平组与IgG N-糖基水平间的关联性分析。检验水准α= 0.05。

2 结 果

2.1 研究对象的基本特征

共收集确诊SLE 女性患者341 例，平均年龄为（40.36 ± 12.93）岁，在不同RDW 水平组，2 组间的RDW、TG 水平以及高血压差异具有统计学意义（P< 0.05），结果见表1。

表1 SLE女性患者的基本特征[n（%）/（± s）］

表1 SLE女性患者的基本特征[n（%）/（± s）］

注：SLE为系统性红斑狼疮；BMI为体质量指数；RDW为红细胞分布宽度；TC 为总胆固醇；HDL 为高密度脂蛋白；LDL 为低密度脂蛋白。

基本特征t/χ2 P 0.878 0.041 0.666 0.270 0.473< 0.001 0.449 0.016 0.134 0.768年龄/岁高血压糖尿病贫血BMI/（kg/m2）RDW/%TC/（mmol/L）TG/（mmol/L）HDL/（mmol/L）LDL/（mmol/L）RDW低水平组Q1 ~ Q3（n = 266）40.30 ± 12.73 32（12.03）24（9.02）100（37.59）23.96 ± 3.11 13.13 ± 0.75 4.80 ± 1.57 1.43 ± 0.78 1.30 ± 0.40 6.92 ± 64.06 RDW高水平组Q4（n = 75）40.56 ± 13.71 16（21.33）8（10.67）23（30.67）23.67 ± 3.27 16.72 ± 2.15 4.96 ± 1.70 1.77 ± 1.13 1.38 ± 0.47 9.32 ± 56.70 0.153 4.187 0.186 1.217 0.718 14.249 0.759 2.458 1.501 0.295

2.2 IgG N-糖基水平在不同RDW水平组间差异

在不同RDW 水平组间，GP1、GP3、GP4 及GP8在Q4 组的含量显著高于Q1 ~ Q3 组，GP12、GP14、GP18、GP19 与GP23 在Q1 ~ Q3 组含量显著高于Q4组，Q1 ~ Q3 组的半乳糖基化和唾液酸化水平均高于Q4 组，差异均有统计学意义（P< 0.05），结果见表2。

2.3 IgG N-糖基与RDW水平的相关性分析

IgG N-糖基与RDW水平的相关性分析显示，在总体水平上，GP4 （r= 0.113，P= 0.038）及GP8（r= 0.286，P< 0.001）与RDW 水平呈正相关；GP12 （r= -0.202，P< 0.001）、GP14 （r= -0.159，P= 0.003）、GP18（r= -0.117，P= 0.030）、GP19（r= -0.131，P= 0.015）及GP21 （r= -0.123，P=0.023）与RDW水平呈负相关，结果见表3。

表3 SLE女性患者RDW水平与IgG-N糖基水平相关性分析

2.4 IgG N-糖基水平与RDW水平组的多因素分析

以SLE 女性患者的不同RDW 水平组为因变量，经标准化转换后的GP1、GP3、GP4、GP8、GP12、GP14、GP18、GP19 与GP23 为 自 变 量 分 别 纳 入logistic 回归模型，在调整年龄、BMI、高血压、糖尿病、贫血、TG、TC、HDL及LDL后，GP12、GP14、GP18与GP23为RDW 升高的保护因素（P< 0.05），OR值分 别 为0.564 （95%CI：0.352 ~ 0.904）、0.902（95%CI： 0.834 ~ 0.976）、0.840 （95%CI：0.745 ~0.947）及0.473（95%CI：0.244 ~ 0.918）；GP4 与GP8 为RDW 升高的危险因素（P< 0.05），OR值分别为1.052 （95%CI：1.005 ~ 1.102）、1.138（95%CI：1.055 ~ 1.277），结果见表4。

表4 IgG N-糖基水平与RDW水平组的logistic回归分析

3 讨 论

本研究结果显示，RDW 低水平（Q1 ~ Q3）组中的半乳糖基化及唾液酸化水平显著高于RDW高水平（Q4）组（P< 0.05）。相关性分析结果显示，SLE女性患者的RDW 水平与GP12、GP14、GP18、GP19及GP21 呈负相关，与GP4 及GP8 呈正相关。在随后的logistic 回归分析中发现，低水平的GP12、GP14、GP18与GP23为RDW 升高的保护因素，高水平的GP4 与GP8 为RDW 升高的危险因素，反映着这些因素所代表的IgG N-糖基结构可能与SLE女性患者RDW水平存在相关性。

有研究显示，当IgG N-糖基唾液酸化修饰降低时，会促进IgG 与免疫细胞上的Fc 受体（FcγRIIIa）结合，从而增加免疫复合物与免疫细胞的相互作用，加重炎症反应[19］。当机体的半乳糖基较低时，会使Fc 受体及Dectin-1 与IgG 的结合受到抑制，进而引起或促进机体的炎症反应，半乳糖基修饰水平增加则可以促进机体的抗炎效应[20］。SLE患者在不同种族中的IgG N-糖基化变化是十分相似的，患者的IgG N-糖基的半乳糖基化水平和唾液化水平较正常人群均减少[14］。而RDW 水平受机体炎症的影响，持续的炎症反应可以激活补体系统，导致患者的自身抗体或补体可附着于红细胞表面，从而导致红细胞的破坏及RDW的升高[8］。同时，炎症因子水平的增加，会导致红细胞表面的特异性受体增加，也可直接或间接作用于促红细胞生成素，达到抑制红细胞成熟的作用，最终无效或大小不一的红细胞进入外周血，导致RDW升高。异常的IgG N-糖基化可能通过影响机体炎症反应，引起机体抗炎或促炎状态的改变，从而导致或干预红细胞的正常生长发育及生成代谢，最终影响RDW的变化，但具体机制仍需进一步研究证实。本研究探讨了SLE 女性患者IgG N-糖基水平与RDW水平的关系，但仍处于初步关联性研究阶段，且具体机制仍需进一步验证，后续应加大样本量及增添免疫学实验以加强二者间因果关系的论证与具体机制的研究。后续研究RDW 联合IgG N-糖基指标对SLE 的早期诊断或病情监测具有一定的实用临床价值。

综上所述，在SLE女性患者中，IgG N-糖基水平与RDW水平存在一定的关联性，异常的IgG N-糖基化或许是影响RDW 水平升高的原因之一，但具体的因果关系及机制仍需进一步研究验证，为后续IgG N-糖基与RDW 作为联合指标对疾病进行早期诊断或反映疾病情况的研究提供理论基础。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突