地中海贫血患者输注不同Rh抗原匹配红细胞后的血清学特征及免疫功能变化

简晓毅　胡静美　梁少清

【摘要】  目的    调查地中海贫血患者输注不同Rh抗原匹配红细胞（RBC）后的血清学特征及免疫功能变化。方法    选取中山市博爱医院2020年1月—2021年6月收治的地中海贫血患者200例为研究对象，输注不同Rh抗原匹配红细胞，按照受试者Rh抗原与献血者Rh抗原匹配程度，分为Rh抗原完全匹配型（n=67）、部分匹配型（n=90）和Rh抗原随机组（n=43）。比较不同Rh抗原抗体匹配程度组的不规则抗体阳性率、直接抗人球蛋白试验（DAT）阳性率、不良输血反应率和输血有效率；比较不同Rh抗原抗体匹配程度组输血后免疫功能指标（白细胞介素-2、IgM、CD₄⁺、CD₈⁺、CD₄⁺/CD₈⁺）。结果    3组间的DAT阳性率和不规则抗体阳性率差异有统计学意义（P<0.05），随机组的DAT阳性率和不规则抗体阳性率最高；3组间的输血效果有效率和不良反应发生率差异有统计学意义（P<0.05），完全匹配组的输血效果有效率最高，随机组的不良输血反应发生率最高。3组患者输血后白细胞介素-2、IgM均升高，CD₄⁺、CD₈⁺和CD₄⁺/CD₈⁺均降低，且随机组白细胞介素-2、IgM最高，CD₄⁺、CD₈⁺和CD₄⁺/CD₈⁺最低（P<0.05）。结论    在临床工作中，应尽量选择与受试者Rh抗原相匹配的红细胞输注，减少不规则抗体产生和反复输血对免疫功能的损伤，提高输血有效率。

【关键词】  地中海贫血； Rh抗原； 红细胞； 不规则抗体阳性率

中图分类号：R556        文献标识码：A

文章编号：1672-1721（2023）20-0093-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.20.031

地中海贫血是一类单基因遗传性溶血性血液疾病，全世界中有1%～5%的人口是地中海贫血基因携带者，我国广西地区有24.5%的人口携带地中海贫血基因[1]。骨髓干细胞移植是唯一可彻底治愈地中海贫血的方法，但配型困难且治疗费用高昂，因此临床上主要采用反复输注红细胞血制品维持患者机体血红细胞的浓度，避免机体缺氧。地中海贫血往往需要终生输血治疗，长期反复的输血治疗可引起不规则抗体产生，随着输血次数的增加，该抗体的含量也相应上升，导致患者难以找到配血相合的红细胞血制品，对后期治疗造成严重不良影响[2]。目前，地中海贫血患者的红细胞制品输注治疗主要依靠受试者Rh抗原与献血者Rh抗原匹配程度来进行，可分为Rh抗原完全匹配、部分匹配和Rh抗原随机。本研究拟对3种Rh抗原抗体匹配程度患者的血清学特征及其免疫功能变化进行分析，明确何种受试者Rh抗原与献血者Rh抗原匹配程度更为安全、有效。

1    资料与方法

1.1    一般资料    选取中山市博爱医院2020年1月—2021年6月收治的地中海贫血患者200例为研究对象，输注不同Rh抗原匹配红细胞。纳入标准：符合地中海贫血的诊断标准[3]；自愿行输注不同Rh抗原匹配红细胞治疗。排除标准：研究期间转院治疗、终止输血治疗的患者。按照受试者Rh抗原与献血者Rh抗原匹配程度，分为Rh抗原完全匹配型（n=67）、部分匹配型（n=90）和Rh抗原随机组（n=43）。其中Rh抗原完全匹配型（n=67）：男性30例，女性37例，年龄2～20岁，平均年龄（14.15±4.71）岁；部分匹配型（n=90）：男性43例，女性47例，年龄1～19岁，平均年龄（13.30±4.43）岁；Rh抗原随机组（n=43）：男性23例，女性20例，年龄3～18岁，平均年龄（13.58±3.69）岁。3组患者一般资料差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2    研究方法    所有患者在输注不同Rh抗原匹配紅细胞后48 h抽取静脉血，进行血常规、直接抗人球蛋白试验（DAT）、不规则抗体鉴定，检测血清白细胞介素-2、IgM、T淋巴细胞表面分子CD₄⁺、CD₈⁺的含量并计算CD₄⁺/CD₈⁺比值，统计所有患者从血液输注日期至结束后的28 d内发生的不良反应例数和种类。

1.3    观察指标    比较不同Rh抗原抗体匹配程度组的不规则抗体阳性率、直接DAT阳性率、不良输血反应率和输血有效率；比较不同Rh抗原抗体匹配程度组输血后免疫功能指标（白细胞介素-2、IgM、CD₄⁺、CD₈⁺、CD₄⁺/CD₈⁺）。

1.3.1    不规则抗体的筛查和鉴定    采用全自动血型仪（瑞士Bio-Rad公司，型号IH-1000）及其配套的低离子抗人球蛋白卡对不规则抗体进行筛查；对不规则抗体阳性的标本采用微柱凝胶法和试管法（长春博德生物技术有限公司）进行鉴定，并与谱细胞（广东营安生物科技有限公司）反应格局进行对比，明确RBC对应抗原和不规则抗体的类别。由同一位具有10年以上不规则抗体鉴定检验的输血科医师，严格按照使用说明书进行操作和鉴定。

1.3.2    DAT阳性率    首先用生理盐水洗涤红细胞3次，再采用低离子介质将洗涤过的红细胞配制成0.8%的红细胞悬液，取50 μL红细胞悬液到微柱凝胶抗人球蛋白检测卡中，专用离心机（亚达美公司，转速1 030 r/min，10 min），观察结果。由于抗原抗体凝集反应，红细胞凝集，分子量增大，不能通过微柱管中的凝胶介质，停留在其中上部，由此可鉴定为DAT阳性。

1.3.3    免疫功能    白细胞介素-2、IgM采用酶联免疫法（南京建成生物技术有限公司）进行检测；CD₄⁺、CD₈⁺采用流式细胞仪（美国Beckman公司）检测。

1.3.4    输血有效率    输血后的血红蛋白（Hb）含量采用全自动血细胞分析仪（深圳迈瑞医疗生物有限公司，型号BC-6900）进行检测，输血后Hb升高值≥Hb升高预计值的80%为有效，其余为无效。Hb升高预计值（g/L）=供血者的Hb含量（g/L）×输入量（L）/患者的体质量（kg）×90%（输入量需要以全血量为标准，将各种红细胞制剂折算为其相对应的全血量；供血者若为儿童，按照0.09 L/kg进行计算；其中90%为检验误差）。

1.4    统计学方法    采用SPSS 24.0统计学软件进行数据分析，计量资料以x±s表示，行t检验和单因素方差分析，计数资料以百分比表示，行χ²检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2    结果

2.1    地中海贫血患者血清学特征    3组间的DAT阳性率（χ²=18.785，P<0.001）和不规则抗体阳性率（χ²=25.624，P<0.001）差异有统计学意义，随机组的DAT阳性率和不规则抗体阳性率最高，具体不规则抗体类型见表1。

2.2    地中海贫血患者输血效果和不良输血反应发生情况    3组间的输血效果有效率（χ²=12.585，P=0.001）和不良反应发生率（χ²=18.775，P<0.001）差異有统计学意义，完全匹配组的输血有效率最高，随机组的不良输血反应发生率最高，具体不良输血反应类型见表2。

2.3    输血前后免疫功能变化    3组患者输血前白细胞介素-2、IgM、CD4+和CD8+差异无统计学意义（P>0.05）；输血后白细胞介素-2、IgM升高，CD₄⁺、CD₈⁺和CD₄⁺/CD₈⁺降低，且随机组白细胞介素-2、IgM最高，CD₄⁺、CD₈⁺和CD₄⁺/CD₈⁺最低，差异具有统计学意义（P<0.05），见表3。

3    讨论

不规则抗体是指患者血清中含有除抗-A、抗-B外的其他血型的抗体，大多数为IgG抗体，可由反复输血、Rh阴性孕妇孕育Rh阳性胎儿等免疫刺激因素引发，后期可引起血型鉴定正反不符、新生儿溶血性疾病、血液输注无效等严重不良后果[4]。目前，人类现存的36个红细胞血型系统中，Rh血型是除ABO血型之外的最重要、最复杂的血型之一，其中的E、e、C、c、D不仅是临床上的常见血型，而且输血不良反应发生率也较高[5-6]。因此，对输注不同Rh抗原匹配红细胞后的地中海贫血患者的血清学特征进行调查，对于日后输血安全具有重要意义。

本研究中，不规则抗体阳性率为15%（30/200），其中Rh血型不规则抗原最高，其次为MNS血型，与洪毅等[7]研究报道一致。其中，随机组的DAT阳性率和不规则抗体阳性率最高，完全匹配组的输血效果有效率最高，随机组的不良输血反应发生率最高，与贺峰等[8]研究报道一致。CD₄⁺和CD₈⁺是机体内两类重要的免疫细胞表面因子，而CD₄⁺/CD₈⁺比值的增高与降低可表示机体免疫功能的亢进和低下。输血后，3组患者白细胞介素-2、IgM升高，CD₄⁺、CD₈⁺和CD₄⁺/CD₈⁺比值降低，随机组白细胞介素-2、IgM最高，CD₄⁺、CD₈⁺、CD₄⁺/CD₈⁺比值最低。这是因为反复输血治疗不仅可增加机体单核-巨噬细胞的负荷，使得巨噬细胞Ⅱ类抗原表达减少，促进了白细胞介素-2和IgM的表达和释放；而且可产生外源性沉淀产物，诱导T淋巴细胞凋亡，使得CD₄⁺、CD₈⁺比值降低，机体免疫功能被抑制，导致输血效果降低[9-10]。在临床工作中，有时可能达不到Rh抗原抗体完全相合的治疗原则。有研究表明，即使在抗原抗体完全相合的情况下，患者每输注1 U的异体红细胞，有1.0%～1.6%的概率会产生不规则抗体[11]。因此，患者在首次输血治疗后有可能已经产生了不规则抗体，随机组产生不规则抗体的概率最高。首次产生的不规则抗体含量较低，并无特异的临床表现，随着输血治疗次数的增加，不规则抗体含量上升，可出现发热、过敏，甚至严重溶血反应，严重影响输血效果。DAT阳性是由于患者自身抗体或机体接收异源红细胞产生的免疫复合物黏附在红细胞膜表面所导致的，IgG-红细胞复合物更容易被巨噬细胞识别、吞噬，导致急慢性溶血反应的发生[12]。

综上所述，在临床工作中，应尽量选择与受试者Rh抗原相匹配的红细胞输注，减少不规则抗体产生和反复输血对免疫功能的损伤，提高输血有效率。

参考文献

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[7]    洪毅，李菲，楊阳，等.56 510例患者不规则抗体及特异性检测结果分析[J].海南医学，2021，32（2）：222-224.

[8]    贺锋，程金凤，蔡细英.地中海贫血和再生障碍性贫血患者输注不同Rh抗原匹配红细胞后的血清学特征及疗效[J].临床血液学杂志（输血与检验），2020，33（8）：541-544.

[9]    巨小英，刘艳梅.RH血型E抗原对输血患者机体免疫功能的影响[J].贵州医药，2020，44（10）：1625-1626.

[10]    李波.在输血治疗中RhE抗原对受血者机体免疫功能的影响[J].临床医学研究与实践，2019，4（21）：77-80.

[11]    余旭琦，陈俊妍，严海雅.产科回收式自体输血的研究进展和应用[J].中国输血杂志，2018，31（5）：568-572.

[12]    周朝霞，杨小红.74例直接抗人球蛋白试验阳性患者临床特征和RBC输注效果分析[J].湖南师范大学学报（医学版），2020，17（3）：60-63.

（收稿日期：2023-04-13）